JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:26 min. • July 8th, 2025
Inizia con una soluzione di resiniferatossina (RTX), un agonista ad alta affinità del recettore TRPV1, canali ionici sensibili al dolore espressi sui neuroni sensoriali.
Prendi un topo adulto anestetizzato e somministra RTX per via intraperitoneale.
Il farmaco entra nella circolazione sistemica e raggiunge i gangli della radice dorsale (DRG), un ammasso di corpi cellulari di neuroni sensoriali situati vicino al midollo spinale.
RTX attraversa la barriera emato-nervosa e interagisce con i neuroni sensoriali di piccolo diametro nel DRG che esprimono abbondantemente TRPV1.
Il legame di RTX con TRPV1 attiva i recettori, inducendo un massiccio afflusso di ioni calcio nei neuroni.
Il calcio intracellulare attiva gli enzimi che degradano i fosfolipidi della membrana cellulare, le proteine cellulari e il DNA, portando infine alla morte neuronale.
Successivamente, le fibre nervose intraepidermiche (IENF), i terminali periferici dei neuroni sensoriali di piccolo diametro che innervano la pelle, iniziano a degenerare.
Questa degenerazione delle IENF provoca la perdita di input sensoriali dalla pelle, stabilendo così un modello di neuropatia a piccole fibre.
Per iniziare, indossa i dispositivi di protezione individuale e prendi le dovute precauzioni durante la preparazione della resiniferatossina o della soluzione stock RTX. Diluire un'aliquota di 600 microlitri in soluzione salina per l'esperimento e dividere il resto in aliquote da 12 microlitri per la conservazione. Per i topi di prova, utilizzare topi ICR maschi adulti di otto settimane, di peso compreso tra 35 e 40 grammi. Somministrare una singola dose di soluzione RTX per via intraperitoneale con una siringa per microiniezione. Successivamente, iniettare un secondo gruppo di topi con un volume uguale di veicolo che funga da controllo. Dopo aver effettuato tutte le iniezioni, ospita i topi nelle loro gabbie domestiche e assicurati che abbiano accesso immediato a cibo e acqua.