Marcatura mediata da virus e trapianto di cellule di eminenza gangliare mediale per studi in vivo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 6:31 min. • July 8th, 2025
Raccogliere il tessuto di eminenza gangliare mediale, contenente progenitori interneuroni corticali, da embrioni di topo geneticamente modificati.
Aggiungere un polimero cationico e dissociare il tessuto in una sospensione unicellulare.
Aggiungere vettori lentivirali che trasportano un reporter GFP Cre ricombinasi-dipendente affiancato da siti lox. Incubare.
Il polimero neutralizza le cariche della membrana virale e della cellula ospite, consentendo la fusione virale e il rilascio di RNA.
L'RNA virale viene trascritto inversamente e integrato nel genoma ospite.
Centrifugare ed eliminare il surnatante. Assorbire il fluido in eccesso.
Trasferire le cellule su una superficie idrofoba e caricarle in un dispositivo di iniezione.
Iniettare le cellule nella corteccia di un cucciolo di topo anestetizzato.
Lascia che il cucciolo si riprenda e cresca.
I progenitori trapiantati si differenziano in interneuroni maturi nella corteccia.
Un sottogruppo di questi interneuroni co-esprime Cre ricombinasi e RFP.
In questi interneuroni, Cre asporta i siti lox, capovolgendo il gene GFP e consentendone l'espressione.
Visualizzare la co-espressione di RFP e GFP per identificare gli interneuroni che espri
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