JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:41 min. • July 8th, 2025
Prendi un modello in vitro di barriera emato-encefalica, o BEE, che comprende due compartimenti separati da una membrana porosa.
Il compartimento superiore o luminale contiene cellule endoteliali microvascolari. Queste cellule esprimono giunzioni strette, imitando l'endotelio della barriera emato-encefalica che limita il passaggio di cellule e molecole.
Il compartimento inferiore o abluminale contiene neuroni, astrociti e microglia, che rappresentano il parenchima cerebrale.
Introdurre un virus neurotropo nel compartimento luminale per simulare un'infezione trasmessa per via ematica e incubare.
Il virus viene endocitoizzato dalle cellule endoteliali, subisce un traffico intracellulare all'interno delle vescicole e viene rilasciato sul lato abluminale.
Dopo l'incubazione, rimuovere la camera superiore. Campionare il terreno dal lato abluminale per valutare la quantità virale, confermando il successo dell'attraversamento dello strato endoteliale.
Aggiungere il terreno fresco e incubare di nuovo.
Il virus entra nelle cellule neurali attraverso l'endocitosi, si replica e rilascia la progenie virale.
Quantificare l'aumento della carica virale extracellulare per confermare la neuroinvasione e la replicazione virale.
Dopo aver impostato un mini dispositivo cerebrale BBB, come dimostrato, aggiungere 3.500 unità formanti placche del ceppo virale neurotropico francese del virus della febbre gialla, diluite in 50 microlitri di terreno cellulare endoteliale FBS al 2% con molta attenzione sulla parte superiore del compartimento luminale. Inoculare il mini cervello BBB di controllo con 50 microlitri di terreno cellulare endoteliale FBS al 2% senza virus. Quindi, posizionare il mini dispositivo cerebrale BBB esposto al virus nell'incubatrice per 24 ore.
Il giorno successivo, rimuovere gli inserti per determinare la permeabilità delle cellule endoteliali in un pozzetto compagno, come appena dimostrato, e conservare 1 millilitro di campione da ciascun pozzetto per determinare il titolo virale nel compartimento abluminale.
Sotto l'inserto delicatamente per evitare perdite del vano luminale nel vano abluminale.