Colorazione in immunofluorescenza del cervello di Drosophila per l'imaging di cellule gliali a singola cellula

Inizia con il cervello delle mosche transgeniche Drosophila, contenenti diversi tipi di cellule gliali che ospitano un sistema ricombinasi specifico per le cellule.

Determina l'espressione di una proteina della superficie cellulare fusa a diversi epitopi antigenici sullo stesso tipo di cellule.

Trattare il tessuto con un fissativo per reticolare le proteine e preservare l'architettura tissutale.

Lavare per rimuovere il fissativo in eccesso.

Aggiungere proteine bloccanti per mascherare i siti di legame non specifici per ridurre la colorazione di fondo.

Incubare il tessuto con un cocktail di anticorpi primari che si lega ai diversi epitopi espressi sulle cellule gliali.

Lavare per rimuovere gli anticorpi primari non legati.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.

Lavare per rimuovere gli anticorpi secondari non legati.

Monta il cervello all'interno di un distanziatore di imaging e posiziona un vetrino coprioggetti. Il distanziatore crea una camera per il tessuto, preservandone la struttura tridimensionale.

Cellule diverse dello stesso tipo gliale marcate con diversi anticorpi coniugati con fluorofori consentono di comprendere le