Saggio di fagocitosi su cellule vive di cellule simili alla microglia utilizzando sinaptosomi umani

Prendi una piastra multipozzetto contenente cellule simili a microglia che mostrano attività fagocitaria.

Incuba con una colorazione nucleare per etichettare i nuclei.

Aggiungi un inibitore della polimerizzazione dell'actina al pozzetto di controllo negativo.

Durante l'incubazione, l'inibitore si lega ai filamenti di actina, inibendo la polimerizzazione dell'actina e la fagocitosi.

Mantieni la piastra a basse temperature e aggiungi sinaptosomi umani marcati con colorante sensibile al pH--frammenti isolati di terminali sinaptici neurali.

Centrifuga la piastra a basse temperature per favorire le interazioni cellula-sinaptosoma ma prevenire l'assorbimento prematuro.

Trasferisci la lastra a un sistema di imaging di cellule vive.

Nel pozzetto del test, i sinaptosomi vengono fagocitati e si fondono con i lisosomi formando fagolisosomi. L'ambiente acido lisosomiale attiva il colorante, determinandone la fluorescenza.

Nel corso del tempo, nel pozzetto del test, vengono inghiottiti più sinaptosomi causando un ulteriore aumento della fluorescenza.

Tuttavia, nel pozzo di controllo negativo, la polimerizzazione dell'actina è inibita, impedendo l'assorbimento del sinaptosoma. La fluorescenza minima risu