Immunoprecipitazione nativa della cromatina delle cellule della neurosfera
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 7:03 min. • April 28th, 2025
Prendi le cellule della neurosfera in un tampone contenente detergenti, calcio e inibitori della proteasi.
Il detergente permeabilizza le cellule, mentre l'inibitore inattiva le proteasi per preservare la proteina bersaglio legata alla cromatina.
Aggiungere la nucleasi e incubare. La nucleasi utilizza il calcio per digerire la cromatina.
Aggiungere un tampone contenente EDTA che chela il calcio, inattivando la nucleasi.
Aggiungere il tampone di lisi per lisare le cellule, rilasciando la cromatina.
Centrifugare e raccogliere il surnatante.
Aggiungere anticorpi specifici per la proteina bersaglio e incubare con rotazione. Centrifugare e rimuovere il surnatante.
Introdurre microsfere magnetiche mirate all'anticorpo e incubare con la rotazione.
Aggiungere il tampone di lisi per separare il DNA non specificamente legato.
Cattura magneticamente le perle e rimuovi il surnatante.
Aggiungere un tampone ad alto contenuto di sale per separare le proteine non specificamente legate.
Cattura magneticamente le perle e rimuovi il surnatante.
Aggiungere un tampone di stabilizzazione, catturare magneticamente le perle e rimuovere i contaminanti.
Risospendere in un tampone proteinasi-K per digerire le proteine,
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici