Valutazione dell'integrità della barriera emato-encefalica in un modello di ratto con lesione cerebrale indotta dal laser
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:01 min. • April 28th, 2025
Prendi un ratto di controllo anestetizzato e un modello di ratto con lesione cerebrale indotta dal laser.
L'applicazione laser sull'emisfero destro ha danneggiato le cellule e la barriera emato-encefalica, o BBB, che separa il sangue dal tessuto cerebrale.
Inietta un colorante tracciante nella vena caudale cannulata che viaggia attraverso la circolazione sistemica per raggiungere il cervello.
Il colorante si lega alle proteine plasmatiche e fuoriesce nel tessuto cerebrale attraverso la BBB danneggiata.
Eutanasia i topi.
Perfondi i ratti attraverso il cuore per eliminare il colorante dalla circolazione.
Estrai e affetta il cervello, isola le fette dall'emisfero ferito e omogeneizzale.
Tratta con una soluzione acida per denaturare le proteine, rilasciando il colorante legato alle proteine.
Centrifuga e isola il surnatante contenente colorante. Aggiungere alcol per migliorare la fluorescenza del colorante.
Trasferisci la soluzione in una micropiastra. Dopo l'eccitazione, una maggiore intensità di fluorescenza nel cervello danneggiato indica un danno alla BBB indotto dal laser.
Per valutare l'incidenza della rottura della barriera emato-encefalica, 24 ore dopo la lesione indotta dal laser, car
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