Consegna del gene subpiale nel midollo spinale del topo per valutare l'espressione genica

Prendi un topo anestetizzato, rasagli la schiena e disinfetta la pelle.

Incidere la pelle, staccare i muscoli dalle vertebre e ritrarli con le pinze.

Perforare le lamine vertebrali per creare crepe, quindi rimuovere i frammenti ossei per esporre la dura madre, la membrana esterna del midollo spinale.

Usando un ago, crea un'apertura durale e perfora la pia madre sottostante per entrare nello spazio subpiale per l'accesso diretto al tessuto spinale.

Prendere un ago di somministrazione contenente una sospensione di virus adeno-associato ricombinante che trasporta un gene che esprime la proteina fluorescente e iniettare la sospensione.

Estrarre l'ago, suturare i muscoli e la pelle e lasciare che il topo si riprenda.

Il virus si lega ai recettori dei neuroni e delle cellule gliali e viene endocitosizzato.

Una volta all'interno del nucleo, il virus innesca l'espressione genica per produrre proteine fluorescenti.

Il modello di consegna genica subpial è ora pronto per valutare l'espressione genica target nel midollo spinale.

Inizia anestetizzando correttamente l'animale per l'intervento chirurgico. Qui viene utilizzato l'isoflurano. Assicurarsi che non ci sia una risposta di pizzicamento della zam