Iniezione stereotassica di vettori virali per la riprogrammazione delle cellule gliali in un modello murino

Fissare un topo transgenico anestetizzato in una cornice stereotassica con il cranio esposto.

Questo topo esprime la Cre ricombinasi nelle cellule gliali.

Posizionare il braccio stereotassico che tiene il tubo capillare sopra il cranio e allinearlo sopra il bregma.

Regola gli assi stereotassici per un puntamento preciso.

Praticare un foro nel sito di destinazione, assicurandosi che la dura madre rimanga intatta. Rimuovere i frammenti ossei.

Lavare il tubo capillare con il tampone. Disegna una bolla d'aria, quindi carica il virus adeno-associato che trasporta la riprogrammazione neuronale inattiva e i geni delle proteine fluorescenti.

Abbassare il tubo capillare alla profondità target e iniettare la soluzione virale nella regione ricca di cellule gliali.

Ritrarre con cautela il tubo per evitare il riflusso.

Chiudere l'incisione e consentire il recupero.

I virus internalizzati forniscono geni inattivati fiancheggiati da loxP al nucleo gliale. La cre ricombinasi li capovolge, attivando i geni di riprogrammazione neuronale e guidando la conversione neuronale. Gli interneuroni riprogrammati esprimono la proteina fluorescente sotto il promotore neurone-specifico.

Per iniettare i fattori di riprog