Somministrazione intratecale di un composto di prova al sistema nervoso centrale del ratto

Inizia con un ratto anestetizzato con una cannula guida impiantata nel canale spinale lombare.

Inserire un gruppo catetere-filo attraverso la cannula guida ad angolo nello spazio intratecale, dove circola il liquido cerebrospinale o liquido cerebrospinale.

Rimuovere la cannula guida e far avanzare lentamente il catetere più in profondità.

Quindi, rimuovere completamente il filo e collegare il catetere a un sistema di rilascio.

Iniettare soluzione fisiologica sterile nel canale spinale, garantendo un passaggio libero.

Somministrare lentamente una soluzione di composto di prova nel liquido cerebrospinale, seguita da un lavaggio con soluzione fisiologica sterile.

Staccare il sistema di rilascio, tagliare il catetere e sigillarne a caldo l'estremità.

Sutura il catetere termosaldato al tessuto connettivo, quindi chiudere la pelle sopra il catetere. Pulisci il sito e lascia che il topo si riprenda.

Il composto in esame si diffonde attraverso il liquido cerebrospinale al midollo spinale e al cervello, che comprendono il sistema nervoso centrale o SNC.

All'interno del SNC, entra nei neuroni e offre un potenziale terapeutico.

Per il posizionamento del catetere e l'iniezione del composto, identificare le due fosse naturali tra i muscoli sopra il bacino rasato. E con una mano che tiene le fosse, usa l'altra mano per premere delicatamente e sentire la colonna vertebrale dalla direzione caudale a quella rostrale per individuare la prima rientranza importante tra le vertebre. Dopo aver identificato lo spazio intervertebrale tra le vertebre S1 e L6, spostarsi leggermente rostralmente per identificare lo spazio intervertebrale tra le vertebre L5 e L6.

Utilizzare un bisturi per praticare un'incisione lunga non più di 2 centimetri nella pelle e nella capsula muscolare in questo sito, lungo la linea mediana dalla direzione rostrale a quella caudale, in modo che il sito di iniezione sia al centro dell'incisione. Usa le forbici da dissezione per sezionare il tessuto connettivo fino a quando lo strato muscolare non può essere visualizzato. Praticare un'incisione di 1 centimetro nella capsula muscolare, immediatamente lateralmente al processo spinale dorsale della vertebra lombare L6.

Posizionare il gruppo dell'ago della cannula guida vicino alla faccia anteriore della sesta vertebra lombare e spingere il gruppo nello spazio intervertebrale lungo la faccia anteriore della sesta vertebra, in modo che l'estremità dell'ago penetri nel canale spinale.

Usa una pinza smussata per localizzare i processi spinali dorsali della vertebra lombare L6. Quindi spingere l'ago lungo la faccia anteriore della sesta vertebra nello spazio intervertebrale.

Spingere la cannula guida in posizione lungo l'ago. Rimuovere l'ago e inserire il gruppo del filo del catetere nella cannula guida. Inclinando il catetere con un angolo di circa 45 gradi rispetto al canale spinale, forzare l'estremità del catetere di circa 0,3 centimetri nel canale.

Rimuovere il filo dello stiletto a circa 2,5 centimetri dalla punta intratecale del catetere e far avanzare il catetere nel canale spinale fino a quando il segno di 2 centimetri sul catetere è appena visibile sotto il muscolo. Quando il catetere è in posizione, rimuovere la cannula guida per lasciare il catetere e il filo dello stiletto in posizione.

Far avanzare il catetere nel canale spinale fino a raggiungere il segno di 2 centimetri all'ingresso del canale e ritirare completamente il filo dello stiletto. Il liquido cerebrospinale può essere visualizzato entrando nel catetere impiantato. Quindi collegare il gruppo del catetere di erogazione all'estremità distale del catetere impiantato tramite l'estremità dell'ago calibro 30.

Quindi, caricare 60 microlitri di soluzione fisiologica sterile in una siringa da 100 microlitri e caricare un bolo di 30 microlitri del composto in esame in una seconda siringa. Collegare la siringa di soluzione salina all'estremità dell'adattatore del tubo del gruppo catetere di erogazione e versare 20 microlitri di soluzione fisiologica sterile nello spazio intratecale.

Quando tutta la soluzione salina è stata lavata, sostituire la siringa di soluzione salina con la siringa caricata in bolo e iniettare 30 microlitri del composto in esame nello spazio intratecale per un periodo di 30 secondi. Quando tutto il bolo è stato erogato, sostituire la siringa caricata con bolo con un'altra siringa caricata con soluzione fisiologica e lavare il catetere con altri 40 microlitri di soluzione fisiologica.

Quando il secondo volume di soluzione fisiologica è stato erogato, staccare il gruppo del catetere di erogazione dal catetere impiantato e utilizzare un paio di pinze di dissezione sterilizzate con perline molto calde per bloccare il tubo per tagliare e sigillare a caldo in modo asettico il catetere impiantato. Utilizzare suture monofilamento riassorbibili per fissare il catetere termosaldato al tessuto connettivo, quindi utilizzare suture non assorbibili per chiudere la pelle. Quindi usa una garza e una soluzione salina per lavare il sangue dalla pelle e metti il ratto in un'incubatrice riscaldata con monitoraggio fino alla completa decubito.