Mouse enucleazione degli occhi per Remote ad alta velocità Fenotipizzazione
19 novembre 2011
La tecnica di dissezione illustra enucleazione dell'occhio mouse per il fissaggio del tessuto per eseguire fenotipizzazione in alto throughput schermi.
Questo video illustrerà l'occhio del topo e la nucleazione o la rimozione del bulbo oculare dall'orbita. Il bulbo oculare è delimitato dal margine inferiore della palpebra. Ecco il canto mediale o nasale.
Nella parte posteriore si trova il canto temporale o laterale. Sopra c'è il margine superiore della palpebra. Ecco un campione chirurgico.
L'ago punta verso la cornea chiara. Possiamo vedere un po' della lente che spunta oltre l'iride. L'iride è qui in marrone, coprendo l'obiettivo.
Il punto di riferimento chirurgico più importante è questa linea bianca, altrimenti il limbus farà una ferita da puntura proprio dietro di essa. La metà posteriore del globo si trova dietro il limbus e stiamo indicando un'inserzione muscolare. Qui si può vedere il muscolo che giace contro il globo, e poi il tessuto connettivo che riempie l'orbita e include la ghiandola ariana.
E infine, questa è la lunga striscia bianca di nervo ottico da una dissezione smussata. Utilizzando una pinza da medicazione curva, personalizzata con una punta affilata, inizia separando le palpebre. Questo tende a sostenere l'occhio tostato fuori e lontano.
Usa con attenzione la pinza per entrare nell'orbita e dietro il bulbo oculare, comprimila delicatamente dietro il bulbo oculare senza schiacciarlo e tiralo in avanti. Dovresti essere in grado di afferrare il tessuto connettivo e non il bulbo oculare. Se si gira il bulbo oculare di lato, è possibile vedere il tessuto orbitale insieme al nervo ottico bianco.
Questa è una seconda dissezione solo per mostrare che, ancora una volta, si entra nel canto, si spinge la pinza dietro il bulbo oculare, si afferra il tessuto connettivo e lo si tira in avanti senza premere sul bulbo oculare stesso. Ancora una volta, puoi vedere il tessuto connettivo nella lunga striscia di nervo ottico bianco. Per fare una ferita da puntura, afferra il bulbo oculare con un'inserzione muscolare e inserisci un ago dietro il limbus proprio accanto a dove stai tenendo l'occhio per stabilizzarlo.
Ciò consentirà al fissativo di entrare nell'occhio. Se fai la puntura lontano da dove stai tenendo l'occhio, il bulbo oculare sarà molto instabile e sarà difficile fare quella ferita finché non comprimi l'occhio o applichi una pressione eccessiva. Puoi anche afferrare tutto il tessuto connettivo appena dietro il bulbo oculare stesso.
Alcuni fissativi non richiedono una ferita da puntura. In generale, mettiamo l'occhio in una fiala a scintillazione da cinque cc con almeno tre cc di fissativo per assicurarci che l'occhio sia sommerso. Per gli animali fissati a profusione, è necessaria una dissezione acuta.
Usiamo una pinza calibri curva e forbici wescott curve. Afferrare il coperchio inferiore con la pinza calibri. Inserisci le forbici contro l'osso orbitale e inizia a tagliare il tessuto connettivo.
Usiamo la curva lontano dal bulbo oculare ed evitiamo nel dimensionamento. Qualsiasi occhio lavorerà lungo tutto il margine inferiore della palpebra da un canto all'altro. A un certo punto, la maggior parte del tessuto connettivo verrà rimossa e potrai far scorrere le forbici dietro il globo e tirarlo via.
Ecco un altro esempio, inserendo le forbici nell'orbita, ma contro l'osso orbitale piuttosto che contro il bulbo oculare e tagliando via il tessuto connettivo. Questo inizierà a liberare il bulbo oculare, che è come una palla da basket in un canestro. Usa le pinze per ritrarre le palpebre e fare delicati tagli corti intorno al bulbo oculare.
Qui afferriamo il tessuto connettivo o un'inserzione muscolare con il Collibra e finiamo di tagliare via il bulbo oculare dal tessuto connettivo orbitale. Dopo che i bulbi oculari sono stati opportunamente fissati e se devono essere trasportati, posizioniamo un po' di pellicola para. Noi intorno alla fiala di sione.
L'imballaggio deve essere conforme alle normative universitarie e governative. Di solito li mettiamo in un contenitore con un po' di cotone Per catturare qualsiasi liquido, questo contenitore deve essere sigillato molto ermeticamente. Questo contenitore di spedizione viene quindi inserito in un sacchetto di pluriball.
Questo viene inserito in un pacco di spedizione per liquidi da laboratorio, insieme a tutta la documentazione.
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Panoramica
Questo video illustra la tecnica di enucleazione dell'occhio del topo, che è cruciale per la fissazione dei tessuti negli schermi di fenotipizzazione ad alto rendimento. La procedura prevede la rimozione del bulbo oculare dalla sua orbita, evidenziando punti di riferimento anatomici per chiarezza.
Componenti chiave dello studio
Area della scienza
- Neuroscienza
- Biologia
Sfondo
- L'enucleazione è una tecnica critica in vari studi biologici.
- Comprendere l'anatomia dell'occhio aiuta nelle procedure chirurgiche precise.
- Questo metodo è essenziale per applicazioni di screening ad alto rendimento.
- Una corretta fissazione dei tessuti è necessaria per una fenotipizzazione accurata.
Obiettivo dello studio
- Dimostrare la tecnica di enucleazione a scopi educativi.
- Fornire una guida visiva per i ricercatori che eseguono procedure simili.
- Migliorare la comprensione dei punti di riferimento anatomici durante la chirurgia.
Metodi utilizzati
- Dimostrazione video del processo di enucleazione.
- Identificazione delle caratteristiche anatomiche chiave dell'occhio del topo.
- Guida passo-passo per l'esecuzione della procedura.
- Aiuti visivi per supportare l'apprendimento e l'applicazione.
Principali risultati
- Chiara visualizzazione della tecnica di enucleazione.
- Identificazione del canto mediale e laterale.
- Dimostrazione del campione chirurgico post-enucleazione.
- Migliore comprensione della procedura per schermi ad alto rendimento.
Conclusioni
- Il video serve come efficace strumento educativo per i ricercatori.
- Comprendere il processo di enucleazione è vitale per una fissazione dei tessuti di successo.
- Una tecnica corretta può migliorare i risultati negli studi di fenotipizzazione.
Domande frequenti
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
