Isolamento e purificazione di glicoproteine oligodendrocitarie mieliniche ricombinanti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:59 min. • August 7th, 2025
MOGtag è una glicoproteina oligodendrocitaria mielinica ricombinante fusa con tag di solubilizzazione e purificazione per studi sperimentali di encefalomielite autoimmune.
Per isolare MOGtag, sospendere le cellule batteriche che esprimono MOGtag in un tampone di lisi e incubare.
Gli enzimi e i detergenti nel tampone distruggono i lipidi di membrana e degradano la parete cellulare.
Sonicare per lisare ulteriormente le cellule, rilasciando corpi di inclusione insolubili contenenti MOGtag.
Centrifuga per pellettare i corpi di inclusione. Scartare il surnatante, risospendere il pellet nel tampone e incubare.
Aggiungere la guanidina cloridrato, quindi incubare per solubilizzare il MOGtag.
Trasferire le proteine solubili su una resina di nichel carica, mescolare e incubare agitando per consentire a MOGtag di legarsi agli ioni di nichel.
Centrifuga per pellettare il MOGtag legato. Rimuovere il surnatante, risospendere il pellet in un tampone di eluizione e incubare agitandolo.
L'imidazolo nel tampone di eluizione rilascia MOGtag dalla resina.
Centrifugare di nuovo, raccogliere il surnatante purificato contenente MOGtag e conservarlo per ulteriori analisi.
Distribuire le colture in modo uniforme su
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