JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:15 min • June 17th, 2025
Iniziare con le cellule di Schwann o SC, cellule gliali mielinizzanti del sistema nervoso periferico, coltivate in terreno.
Trasferire le celle in un piatto colorimetrico dotato di elettrodi su entrambi i lati.
Posizionare la parabola su un campo elettrico pulsato a nanosecondi o su un dispositivo nsPEF e impostare l'intensità del campo elettrico desiderata.
Applicare gli impulsi nsPEF ruotando con cautela gli elettrodi fino alla comparsa di scintille.
Immediatamente dopo la stimolazione, separare gli elettrodi e continuare a coltivare le cellule.
nsPEF distrugge le membrane SC, creando nanopori transitori che consentono l'afflusso di calcio. Le membrane alla fine si richiudono.
Il calcio intracellulare attiva le proteine leganti il calcio, innescando vie di segnalazione che sovraregolano i geni coinvolti nella progressione del ciclo cellulare.
La segnalazione sostenuta del calcio attiva anche fattori di trascrizione che guidano la dedifferenziazione delle SC in un fenotipo di riparazione, seguito dalla proliferazione.
Inoltre, aumenta la secrezione di fattori neurotrofici che supportano la sopravvivenza e la crescita neuronale.
Il modello è ora pronto per studiare il ruolo delle SC stimolate da nsPEF nella rigenerazione dei nervi periferici post-infortunio.
Per iniziare, risospendere le cellule RSC96 coltivate in 1 millilitro di terreno di coltura DMEM e trasferirle su piastre colorimetriche con elettrodi su entrambi i lati. Accendere l'interruttore di alimentazione dello strumento e ruotare la manopola per impostare le intensità del campo elettrico. Con attenzione, ruotare gli elettrodi fino a quando non compaiono scintille, consentendo alle celle di ricevere 5 impulsi di campi elettrici pulsati a nanosecondi in base alle intensità di campo preimpostate. Separare immediatamente i due elettrodi dopo il trattamento.