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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:25 min • August 7th, 2025
Assumere un microiniettore con un microago contenente un vettore virale HiRet o di trasporto retrogrado altamente efficiente.
Le glicoproteine nell'involucro del virus HiRet facilitano il suo ingresso nei neuroni attraverso le sinapsi. Il virus trasporta anche un gene che codifica per una proteina fluorescente.
Prendi un ratto anestetizzato con un midollo spinale lombare esposto da 1 a 4.
Utilizzando la linea mediana del midollo spinale come riferimento, posizionare l'ago sopra il sito di iniezione.
Abbassare l'ago nel midollo spinale.
Inizia a somministrare il virus a una velocità controllata.
Attendere un tempo sufficiente per la diffusione virale prima di ritirare l'ago.
I recettori neuronali si legano alle glicoproteine virali, facilitando l'ingresso del virus attraverso la sinapsi e il trasporto attraverso l'assone al soma, un processo chiamato trasporto retrogrado.
Il gene virale si integra con il genoma ospite, consentendo l'espressione di proteine fluorescenti.
Questi virus viaggiano anche attraverso i neuroni connessi, consentendo il tracciamento dei percorsi neuronali.
Posizionare l'ago sulla linea mediana del midollo spinale e utilizzare la scala Vernier sul micromanipolatore per dirigere l'ago lateralmente di 0,8 millimetri. Quindi abbassare l'ago sul midollo spinale fino a quando non si infiltra, ma non perfora la dura dura. E usa un rapido movimento di torsione per perforare la dura madre con l'ago fino a quando la punta dell'ago non è affondata a una profondità di 1,5 millimetri.
Una volta posizionato l'ago, programmare l'iniettore in modo che eroghi il virus a una velocità di 400 nanolitri al minuto e confermare che il virus stia entrando nel midollo spinale osservando l'andamento del fronte del colorante. Una volta terminata l'iniezione, lasciare riposare l'ago nel midollo spinale per due-cinque minuti per facilitare la diffusione del virus, prima di ritirare lentamente l'ago per posizionarlo nel sito di iniezione successivo.