Somministrazione mirata di sostanze al cervello del topo tramite infusione nell'arteria carotide interna

Prendi un topo anestetizzato con un'arteria carotide comune esposta o CCA, che si biforca nell'arteria carotide esterna o ECA e nell'arteria carotide interna o ICA.

Suturare saldamente l'ECA distale, posizionare un nodo sciolto vicino alla biforcazione, quindi agganciare il CCA e l'ICA per limitare il flusso sanguigno.

Incidere l'ECA, quindi inserire un capillare collegato a una siringa contenente la sostanza in esame.

Far avanzare il capillare tra la biforcazione e la clip CCA, quindi fissarlo stringendo il nodo ECA prossimale.

Rimuovere la clip ICA e infondere la sostanza per una somministrazione mirata al cervello bypassando la circolazione sistemica.

La sostanza attraversa la barriera emato-encefalica per raggiungere il parenchima cerebrale.

Una volta che l'ECA e l'ICA sono esposti, utilizzare una pinza per posizionare un segmento di sutura di nylon da 1 centimetro sotto l'arteria carotide esterna, quindi posizionare un secondo segmento da 1 centimetro. Quindi fare un nodo permanente nel punto più alto possibile dell'ECA.

Nel punto più basso possibile dell'ECA immediatamente sopra la biforcazione CCA, fare un nodo rimovibile più allentato. Quindi utilizzare le clip del recipiente per chiudere il CCA nel punto più basso possibile e per chiudere l'ICA.

Chiudere correttamente l'arteria carotide interna prima di praticare un piccolo taglio nell'arteria carotide esterna previene il sanguinamento.

Ora, usando le forbici a molla per microdissezione, fai un taglio di 2 millimetri nell'ECA tra i due nodi.

È importante mantenere il taglio piccolo, poiché un taglio grande causerà la fuoriuscita della sostanza da infondere.

Assemblare il sistema di infusione collegando 6 pollici di tubo capillare a una siringa di tubercolina contenente 250 microlitri della sostanza da infuso. Quindi inserire delicatamente la punta del tubo capillare nell'incisione dell'ECA. Continua ad avanzare la punta fino a raggiungere la metà tra la biforcazione e la clip sul CCA.

Annodare il nodo ECA inferiore. Verificare che il nodo sia sufficientemente largo da consentire la fluidità dei capillari e sufficientemente stretto da evitare perdite. Quindi, rimuovere la clip dall'ICA. Applicare delicatamente una pressione sul pistone della siringa, consentendo l'infusione della sostanza a circa 10 microlitri al secondo.

Dopo l'infusione della sostanza in esame, riposizionare la clip sull'ICA. Rimuovere delicatamente il tubo capillare, quindi legare completamente il nodo ECA inferiore. Rimuovere la clip dall'ICA e dal CCA. Quindi rimuovere il divaricatore o i ganci per fazzoletti e il cuscino.

Pulire l'area da suturare con soluzione fisiologica sterile e quindi chiudere l'incisione utilizzando suture di nylon. Dopo aver somministrato un agente antinfiammatorio e analgesico approvato per alleviare il disagio postoperatorio, posizionare l'animale in una gabbia su un termoforo per almeno un'ora e monitorare il recupero.