Imaging della dinamica subcellulare del calcio nei neuroni di Caenorhabditis elegans

Prendi due ceppi transgenici separati di Caenorhabditis elegans su vetrini con cuscinetti di agar. I cuscinetti contengono una soluzione di rotolamento con un agente paralitico che riduce al minimo il movimento.

Il cordone nervoso ventrale dei vermi, o VNC, contiene interneuroni eccitatori che esprimono indicatori citoplasmatici di calcio in un ceppo e indicatori di calcio mitocondriali nell'altro.

Posiziona un vetrino coprioggetti per far rotolare i vermi, orientando il VNC per la visualizzazione, quindi posizionali sotto un microscopio a fluorescenza.

Usa la luce visibile per localizzare i vermi, quindi passa alla modalità a fluorescenza.

Nei neuroni a riposo, un basso livello di calcio intracellulare mantiene gli indicatori non legati, con conseguente debole fluorescenza.

L'attività neuronale spontanea apre i canali del calcio voltaggio-dipendenti, consentendo l'afflusso di calcio.

Nel ceppo con indicatori citoplasmatici, il calcio si lega agli indicatori, migliorando la fluorescenza citoplasmatica.

L'eccesso di calcio citoplasmatico entra nei mitocondri attraverso i canali. Nel ceppo con indicatori mitocondriali, il legame con il calcio aumenta la fluorescenza mitocondriale.

Visualizza