Trasfezione mediata da elettroporazione dei gangli della radice dorsale di topo per promuovere la rigenerazione sensoriale degli assoni

Prendi un topo anestetizzato con gangli della radice dorsale L4 e L5 esposti contenenti corpi cellulari neuronali sensoriali.

Caricare una pipetta per microiniezione con costrutti di RNA marcati con fluorofori che regolano la rigenerazione degli assoni e un colorante tracciante.

Iniettare la miscela nei DRG.

Utilizzando elettrodi di elettroporazione, applicare impulsi elettrici ai DRG.

Questo distrugge le membrane dei corpi cellulari dei neuroni sensoriali, creando pori che consentono ai costrutti di entrare nel citoplasma, facilitando la trasfezione.

Sutura l'incisione e lascia che il topo si riprenda.

Dopo alcuni giorni, anestetizzare nuovamente e fissare il mouse.

Fai un'incisione laterale alla linea mediana a sinistra. Sezionare i muscoli per esporre il nervo sciatico.

Schiacciare il nervo per ferire gli assoni dei neuroni sensoriali. Segna il sito con un nodo di sutura.

Sutura l'incisione e lascia che il topo si riprenda.

I costrutti trasfettati mirano agli mRNA bersaglio nei corpi cellulari dei neuroni sensoriali DRG, modulando transitoriamente la produzione di proteine per migliorare la rigenerazione sensoriale degli assoni dopo la lesione.

Per l'iniezione di DRG, caricare i plasmidi