JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:58 min. • August 7th, 2025
Prendi un microago di quarzo con fori personalizzati, attaccato a una siringa piena d'acqua e collegato a una micropompa per controllare la velocità di erogazione.
Prendi un ratto anestetizzato e protetto con il sito di iniezione esposto.
Posizionare il microago e posizionare una pellicola di paraffina sotto. Metti una goccia della soluzione iniettabile su di esso.
Ritrarre l'acqua per creare una bolla d'aria, quindi abbassare il microago per aspirare la soluzione.
Lasciare che si formi una goccia, garantendo un passaggio libero.
Usa un ago affilato per perforare la membrana del cervello.
Inserire il microago mentre è impostato a una velocità di erogazione bassa per evitare la penetrazione di frammenti di tessuto nell'ago.
Una volta posizionato, vai leggermente più in profondità. Interrompere l'erogazione e sollevarla nuovamente per evitare il riflusso.
Avvia la consegna con maggiore velocità. I fori nell'ago garantiscono una distribuzione ottimale della soluzione iniettata.
Attendere un tempo sufficiente prima di estrarre l'ago per facilitare la diffusione.
Taglia un pezzetto di pellicola di paraffina di plastica e posizionalo sul cranio. Utilizzando la pipetta da 10 microlitri, fare una goccia della soluzione da applicare sul film plastico di paraffina. Arrestare la pompa. Recuperare leggermente lo spingitore della pompa e creare una piccola bolla d'aria nel capillare tirando delicatamente il pistone della siringa per microiniezione.
Abbassare la punta dell'ago fino a raggiungere la goccia. Prelevare il campione tirando molto lentamente il pistone della siringa per microiniezione, evitando la formazione di bolle. Sostituire lo spingipompa a contatto con il pistone e accendere la pompa ad una portata di 0,3 microlitri al minuto.
Quindi attendere la formazione di una goccia prima di procedere al passaggio successivo. Successivamente, abbassare il flusso a 0,1 microlitri al minuto. Intacca la dura madre con un ago a punta smussata in acciaio inossidabile e abbassa lentamente l'ago per entrare nel tessuto cerebrale. Quando viene raggiunta la posizione desiderata, scendere di altri 0,1 millimetri, quindi arrestare la pompa.
Sollevare il braccio stereostatico di 0,1 millimetri e riavviare la pompa a 0,3 microlitri al minuto. Successivamente, avviare il timer e l'iniezione. Monitorare il movimento della bolla durante l'iniezione. Al termine, arrestare la pompa e attendere cinque minuti prima di recuperare lentamente l'ago.