JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:31 min. • August 7th, 2025
Prendi un ratto anestetizzato e applica del lubrificante per gli occhi.
Radere l'arto mirato, sterilizzare la pelle e posizionare il ratto in modo da garantire un accesso ottimale al muscolo mirato.
Sollevare e incidere la pelle per esporre il muscolo.
Fare riferimento alle fotografie delle placche terminali motorie o MEP, le regioni in cui i terminali dell'assone del motoneurone si sinapsi con le fibre muscolari per formare giunzioni neuromuscolari.
Mappare mentalmente la regione MEP sul muscolo esposto.
Prendi una micropipetta di vetro contenente un tracciante fluorescente.
Iniettare il tracciante per via intramuscolare in più punti lungo la regione MEP.
Rimuovere il tracciante in eccesso, chiudere l'incisione e somministrare un soppressore del dolore.
L'iniezione migliora la disponibilità di traccianti alle giunzioni neuromuscolari, facilitandone l'endocitosi ai terminali degli assoni.
I traccianti racchiusi all'interno delle vescicole vengono quindi trasportati retrogradamente ai corpi cellulari dei motoneuroni nel midollo spinale.
La presenza di motoneuroni marcati con traccianti nel midollo spinale suggerisce il potenziale neuroterapico della somministrazione mirata alla MEP.
Per iniettare il muscolo vivo alle piastre terminali del motore, utilizzare prima un estrattore per micropipette per estrarre micropipette in vetro graduato dotate di stantuffi. Quindi, utilizzando un microscopio da dissezione, rompere le punte delle micropipette con un paio di pinze in modo che il diametro interno di ciascun lume sia di circa 0,5 millimetri. Quindi, riempire le pipette estratte con oro fluorescente.
Ora, applica il lubrificante per gli occhi su un animale anestetizzato e rade l'arto da iniettare. Usa una garza per pulire l'area rasata con tre scrub alternati di clorexidina e alcol al 70%. Quindi, posiziona l'animale su un sottocuscinetto pulito per consentire l'accesso al muscolo mirato. Quando l'animale è in posizione, usa un paio di pinze con impugnature per i denti per sollevare la pelle sopra il muscolo mirato lontano dalla muscolatura sottostante e usa le forbici chirurgiche per praticare un'incisione nella pelle.
Fare attenzione che l'incisione sia abbastanza grande da esporre completamente il muscolo di interesse, con un'interruzione minima della fascia. Quindi, utilizzando le fotografie della piastra terminale del motore per trasporre mentalmente la posizione e la forma della regione di interesse della piastra terminale del motore sul muscolo, e somministrare da 3 a 4 iniezioni da 1 a 2 microlitri di fluoro-oro lungo l'intera lunghezza della regione della piastra terminale del motore.
Dopo l'ultima iniezione, strofinare delicatamente il muscolo per rimuovere eventuali infiltrazioni. Quindi utilizzare una pinza smussata per avvicinare le due estremità della pelle incisa. Chiudere la ferita con clip chirurgiche e infiltrarsi per l'intera estensione della ferita con l'anestetico locale appropriato.