Iniezione di vettori adeno-associati ricombinanti in un modello murino di atrofia muscolare spinale e bulbare

Inizia con un'atrofia muscolare spinale e bulbare contenuta o un topo affetto da SBMA.

Pulisci la coda e scaldala per dilatare la vena.

La SBMA è causata da un recettore degli androgeni mutato o da un gene AR che produce l'mRNA AR mutante.

Questo mRNA sintetizza proteine tossiche nei motoneuroni che compromettono la trasmissione del segnale e provocano debolezza muscolare.

Successivamente, prendi una siringa contenente virus adeno-associati ricombinanti o vettori AAV con un plasmide che codifica per microRNA terapeutico.

Inserire l'ago nella vena caudale e iniettare la soluzione.

Ora, applica pressione per fermare l'emorragia, quindi riporta il topo nella sua gabbia.

Una volta in circolazione, il vettore virale raggiunge i motoneuroni che controllano la funzione muscolare.

Il virus entra nella cellula attraverso l'endocitosi, rilasciando il plasmide.

Il plasmide produce microRNA maturo con sequenze complementari all'mRNA AR mutante.

Questi microRNA si legano agli mRNA AR, innescandone la degradazione.

Questo inibisce l'accumulo di proteine tossiche e aiuta a migliorare la funzione neuromuscolare.

Dividere lo stock di plasmidi di microRNA AAV in aliquote da 100 a 200 microlitri, contenenti una carica virale da 10 a 100 trilioni di genomi per millilitro. Quindi, caricare un'aliquota in una siringa e inserire un ago da 27 a 30 gauge.

Ora, utilizzando un sistema di ritenuta per mouse standard, fissare un mouse con la coda esposta. Pulire quindi la coda con alcool al 70% e posizionare un tampone caldo, sotto la coda per circa 30 secondi per aumentare la vasodilatazione. Ora, nella parte distale della coda, inserisci l'ago nella vena caudale con lo smusso rivolto verso l'alto e con un angolo poco profondo, circa 15 gradi.

Quindi iniettare il virus e attendere qualche secondo prima di rimuovere l'ago. Dopo aver rimosso l'ago, applicare una pressione moderata con due dita per fermare l'emorragia. Quindi riporta l'animale nella sua gabbia di casa.