Iniezione di vettori adeno-associati ricombinanti in un modello murino di atrofia muscolare spinale e bulbare
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:44 min. • August 7th, 2025
Inizia con un'atrofia muscolare spinale e bulbare contenuta o un topo affetto da SBMA.
Pulisci la coda e scaldala per dilatare la vena.
La SBMA è causata da un recettore degli androgeni mutato o da un gene AR che produce l'mRNA AR mutante.
Questo mRNA sintetizza proteine tossiche nei motoneuroni che compromettono la trasmissione del segnale e provocano debolezza muscolare.
Successivamente, prendi una siringa contenente virus adeno-associati ricombinanti o vettori AAV con un plasmide che codifica per microRNA terapeutico.
Inserire l'ago nella vena caudale e iniettare la soluzione.
Ora, applica pressione per fermare l'emorragia, quindi riporta il topo nella sua gabbia.
Una volta in circolazione, il vettore virale raggiunge i motoneuroni che controllano la funzione muscolare.
Il virus entra nella cellula attraverso l'endocitosi, rilasciando il plasmide.
Il plasmide produce microRNA maturo con sequenze complementari all'mRNA AR mutante.
Questi microRNA si legano agli mRNA AR, innescandone la degradazione.
Questo inibisce l'accumulo di proteine tossiche e aiuta a migliorare la funzione neuromuscolare.
Dividere lo stock di plasmidi di microRNA AAV in aliquote da 100 a 200 microlitri, contenenti una
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