Condotti con semina cellulare di Schwann per la rigenerazione assonale dopo una lesione del midollo spinale

0 visualizzazioni3:58 min • August 7th, 2025

Prendete un ratto anestetizzato con vertebre esposte, con i processi spinosi e le lamine asportate dai livelli toracici da T7 a T9.

Taglia le radici dorsali e ventrali sopra e sotto T8.

Applicare soluzione salina per fermare l'emorragia e rimuovere il liquido con una spugna.

Sezionare il midollo spinale tra T8 e T9 per recidere le fibre nervose.

Posizionare la schiuma compressa nella fessura e applicare soluzione fisiologica.

Una volta che l'emorragia si ferma, rimuovere la schiuma ed eliminare il liquido residuo.

Far scorrere un condotto polimerico piezoelettrico pre-preparato, con le finestre aperte, sul moncone rostrale del midollo spinale.

Inserire il moncone caudale nell'estremità opposta del condotto.

Iniettare le cellule di Schwann, sospese in una matrice iniettabile, attraverso le finestre del condotto.

Chiudere bene le finestre.

Le cellule di Schwann popolano il condotto e secernono fattori neurotrofici che supportano la crescita degli assoni.

Il condotto fornisce una guida strutturale, mentre le sue proprietà piezoelettriche generano segnali bioelettrici per la crescita dei neuriti.

A poco a poco, gli assoni si rigenerano attraverso il ponte, ripristinando la continuità tra i monconi.

Quando tutte le lamine sono state rimosse, confermare che gli spazi tra i processi trasversali siano visibili, specialmente a T8, ed esaminare le ossa lungo entrambi i lati tra T7 e T9 per confermare che non ci sono frammenti ossei sporgenti verso l'esterno e che le radici dorsali dovrebbero diventare visibili. Usando le forbici a molla angolate, taglia le radici dorsali e ventrali sopra e sotto T8. E aggiungi soluzione salina al midollo spinale per aiutare a fermare l'emorragia.

Quindi, posiziona le forbici a molla angolate sopra il midollo spinale negli spazi tra i processi trasversali a T8 e fai un taglio per recidere completamente il tessuto nervoso. Posizionare un piccolo pezzo di schiuma compressa nello spazio risultante da 2 a 2,5 millimetri e aggiungere immediatamente soluzione salina all'area.

In attesa che i monconi del cordone mozzato raggiungano l'emostasi, tagliare i triangoli di assorbimento in pezzi sottili e lunghi e rimuovere un condotto dal deposito PBS. Posizionare alcuni triangoli nel condotto per rimuovere il PBS in eccesso e verificare che le finestre pretagliate siano aperte.

Quindi, rimuovere il terreno da un pellet di celle GFP Schwann e risospendere le cellule di Schwann in 10 microlitri di DMEM/F-12 freddo. Aggiungere 10 microlitri di gel iniettabile a freddo alla sospensione cellulare e mescolare bene con pipettaggio ripetuto. Quindi, posizionare la sospensione cellulare sul ghiaccio. Quando i monconi del cordone sono pronti, rimuovere la schiuma compressa e quindi utilizzare pezzi lunghi dei triangoli di assorbimento per rimuovere la soluzione salina e il sangue dall'area della laminectomia.

Quindi, utilizzare una micro spatola per sollevare delicatamente il moncone rostrale e far scivolare il condotto sopra il moncone con le finestre rivolte verso l'alto. Fare attenzione che l'intero moncone sia inserito e che non vi sia sanguinamento eccessivo nel condotto. Sollevare delicatamente il moncone caudale e farvi scivolare sopra l'altra estremità del condotto. Avendo cura che l'intero moncone sia inserito e che le finestre siano sulla superficie dorsale.

Quindi, utilizzare una micropipetta dotata di una punta di caricamento Western blot per iniettare 20 microlitri della miscela di matrice iniettabile con cellule GFP Schwann nel condotto attraverso una delle finestre pretagliate. E chiudi le finestre.

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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026