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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:11 min • August 7th, 2025
Inizia con un tubo contenente una sospensione di esosomi, che sono nanovescicole extracellulari a base di lipidi.
Aggiungere soluzione salina tamponata con fosfato o PBS alla provetta per ottenere una dispersione uniforme degli esosomi.
Aspirare la soluzione di esosoma e filtrarla utilizzando un filtro a membrana per rimuovere i contaminanti residui.
Trasferire questa sospensione di esosomi filtrati in una nuova provetta.
Aggiungere alla sospensione dell'esosoma una soluzione contenente dopamina, un agente neuroterapeutico, seguita da saponina, un tensioattivo.
Incubare la miscela a temperatura fisiologica per migliorare la permeabilità della membrana esosomiale.
La saponina rimuove selettivamente i colesterolo legati alla membrana dalla membrana dell'esosoma, creando pori nei doppi strati lipidici esosomiali.
La dopamina si diffonde attraverso questi pori negli esosomi.
Nel tempo, i lipidi nella membrana esosomiale si ridistribuiscono e i pori si chiudono, incapsulando la dopamina all'interno degli esosomi.
Successivamente, ultracentrifugare la soluzione della miscela per pellettare gli esosomi caricati con dopamina.
Rimuovere il surnatante contenente dopamina e saponina libere.
Il pellet contenente gli esosomi caricati con dopamina è pronto per ulteriori studi.
Aggiungere 3 millilitri di PBS alla sospensione esosomiale raccolta in precedenza mediante ultracentrifugazione e sterilizzare la sospensione diluita mediante filtrazione utilizzando un filtro da 0,22 micron.
Quindi trasferire 500 microlitri della sospensione di esosomi sterilizzata in un'altra provetta.
Successivamente, aggiungere in sequenza 500 microlitri di soluzione di dopamina da 0,5 milligrammi per millilitro e saponina nella sospensione sterilizzata. Dopo l'incubazione, ultracentrifugare la sospensione.