Name: Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: Impara a creare un modello murino di Parkinson con lesione unilaterale 6-OHDA nel fascicolo mediale del prosencefalo. Questo metodo garantisce deplezione dopaminergica superiore al 95% con bassa mortalità.

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Questo lavoro è stato sostenuto dal Ministero degli Affari Esteri e del Commercio internazionale (Governo del Canada), University of Toronto Connaught Fondo, la Fondazione canadese per l&#39;innovazione, NSERC, la Fondazione Krembil and Trust di Parkinson Cure.

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<li>Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characterization+of+a+unilateral+6-OHDA-lesion+model+of+Parkinson%27s+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice.</a> Behav. Brain Res. 162, 1-10 (2005).</li>
<li>Tan, Y., Williams, E. A., Lancia, A. J., Zahm, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+altered+expression+of+tyrosine+hydroxylase+and+calbindin-D+28kD+immunoreactivities+and+viability+of+neurons+in+the+ventral+tegmental+area+of+Tsai+following+injections+of+6-hydroxydopamine+in+the+medial+forebrain+bundle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the altered expression of tyrosine hydroxylase and calbindin-D 28kD immunoreactivities and viability of neurons in the ventral tegmental area of Tsai following injections of 6-hydroxydopamine in the medial forebrain bundle in the rat.</a> Brain Res. 869, 56-68 (2000).</li>
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<li>Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+rodent+model+in+which+to+investigate+the+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+the+pathophysiology+of+L-dopa-induced+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a rodent model in which to investigate the molecular and cellular mechanisms underlying the pathophysiology of L-dopa-induced dyskinesia.</a> Adv. Neurol. 78, 53-61 (1998).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo protocollo descrive un metodo per la generazione di uno stabile unilaterale 6-OHDA lesionato modello murino della malattia di Parkinson, che è estremamente riproducibile, con un&#39;elevata percentuale di successo lesione, e un tasso di mortalità basso. Il successo di 6-OHDA chirurgia lesione può essere facilmente stimata misurando spontaneo comportamento a rotazione con rotazioni ipsiversive&gt; 70 sulla indicativi di&gt; deplezione dopamina 95% in lesionato striato 27. Quantificazione dei livelli di ...

<table border="1" &gt;<tbody&gt;<tr &gt;<td<strongNome&gt; del reagente</strong</td&gt;<td<strong&gt; Azienda</strong</td&gt;<td<strong&gt; Numero di catalogo</strong</td&gt;<td<strong&gt; Commenti (opzionale)</strong</td&gt;</tr&gt;<tr &gt;<td&gt; Desipramina HCl</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada</td&gt;<td&gt; D125</td&gt;<td&gt; 25mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pargilina HCl</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada</td&gt;<td&gt; P8013</td&gt;<td&gt; 5mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 6-OHDA HBr</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada</td&gt;<td&gt; H116</td&gt;<td&gt; 3 mg / mouse</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Frame stereotassico</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td&gt;<td&gt; Modello 900</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Il mouse orecchio tazze</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td&gt;<td&gt; Modello 921 coppe Zygoma</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Il mouse incisivo bar</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td&gt;<td&gt; Modello 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Il mouse anestesia maschera</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td&gt;<td&gt; Modello 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Kit di adescamento (siringa contenente 250 ml)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; PRMKIT 81120</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RN raccordo a compressione kit (1 mm)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 55750-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Tubi PEEK dalla RN kit raccordo a compressione<
 (1/16<sup&gt; °</sup&gt; Pollici)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 55751-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Dual piccolo hub RN Coupler</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 55752-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Luer ai piccoli hub RN adattatore</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 55753-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1 ml siringa modello 25S 7001KH</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 80.100</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; * 33G ago fisso (RN) confezione da 6. . Custom 1 pollice con 45 &lt;° smusso</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, NV, USA</td&gt;<td&gt; 7803-05</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Forbici</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Belle, Vancouver, BC, Canada.</td&gt;<td&gt; 14084-08</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Scalpel</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Arti, Vancouver, BC, Canada</td&gt;<td&gt; 10003-12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lame di bisturi</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Arti, Vancouver, BC, Canada</td&gt;<td&gt; 10035-20</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pinza</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Arti, Vancouver, BC, Canada</td&gt;<td&gt; 11608-15</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Hemostats</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Belle, Vancouver, BC, Canada.</td&gt;<td&gt; 13004-14</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurano</td&gt;<td&gt; Abbot</td&gt;<td&gt; 02241315</td&gt;<td&gt; 2-3%</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Suters (Vicryl 4,0)</td&gt;<td&gt; Syneture</td&gt;<td&gt; SS-683</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Sterilizzatore</td&gt;<td&gt; Strumenti Scienza Arti, Vancouver, BC, Canada</td&gt;<td&gt; 18000-45</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Infusion Pump</td&gt;<td&gt; Harvard Apparatus</td&gt;<td&gt; Dottorato di Ricerca 22/2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Aghi (27G)</td&gt;<td&gt; Becton Dickinson</td&gt;<td&gt; 305.109</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Aghi (25G)</td&gt;<td&gt; Becton Dickinson</td&gt;<td&gt; 305.127</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Siringhe (1 ml)</td&gt;<td&gt; BD siringa</td&gt;<td&gt; 309.692</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anestesia Carrello</td&gt;<td&gt; LEI medica</td&gt;<td&gt; M2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Baytril</td&gt;<td&gt; CDMV, St. Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 102.207</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lidocaina</td&gt;<td&gt; CDMV, St. Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 3914</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadine soluzione</td&gt;<td&gt; CDMV, St. Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 19.955</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-ohda modello murino della malattia di parkinson

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

Il unilateralmente lesionata 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesionato modello murino della malattia di Parkinson (PD) si è rivelato prezioso per avanzare la nostra comprensione dei meccanismi alla base dei sintomi parkinsoniani, poiché essa ricapitola i cambiamenti nei circuiti dei gangli della base e farmacologia osservata in pazienti parkinsoniani 1-4. Tuttavia, le modifiche precise cellulari e molecolari che si verificano a cortico-striatali sinapsi delle vie di uscita all&#39;interno del corpo striato, che è la zona di ingresso principale dei gangli basali rimanere sfuggente, e questo è ritenuto sito dove alterazioni patologiche sottostanti presentano sintomi parkinsoniani 3 , 5. Nel PD, la comprensione dei meccanismi alla base di cambiamenti nella degenerazione dei gangli basali circuito seguente del nigro-striatale è stata notevolmente migliorata con lo sviluppo del cromosoma batterico artificiale (BAC) in topi che esprimono proteine ​​fluorescenti verdi guidati da promuovere8, consentendo loro di essere valutati singolarmente:;: specifico per le due vie di uscita striatali (eGFP-D2 e eGFP-A2a via indiretta EGFP-D1 diretta via) rs. Ad esempio, studi recenti hanno suggerito che ci sono cambiamenti patologici nella plasticità sinaptica in topi parkinsoniani 9,10. Tuttavia, questi studi hanno utilizzato topi giovani e modelli acuti di parkinsonismo. Non è chiaro se le modifiche descritte in ratti adulti con stabili 6-OHDA lesioni si verificano anche in questi modelli. Altri gruppi hanno tentato di generare una stabile lesionato unilateralmente-6-OHDA modello di topo adulto del PD da parte la lesione del fascio mediale del proencefalo (MFB), purtroppo, il tasso di mortalità in questo studio è estremamente elevata, con solo il 14% sopravvive l&#39;intervento chirurgico per il 21 11 giorni o più. Studi più recenti hanno generato intra-nigral lesioni sia con un tasso di mortalità bassa perdita&gt; 80% dei neuroni dopaminergici, ma espressione di L-DOPA discinesia indotta da 11,12,13,14 era variabilein questi studi. Un altro modello di topo ben definito del PD è l&#39;MPTP-leso il mouse 15. Anche se questo modello si è dimostrato utile nella valutazione dei potenziali agenti neuroprotettivi 16, è meno adatto per la comprensione dei meccanismi alla base dei sintomi del morbo di Parkinson, in quanto questo modello spesso non riesce a indurre deficit motori, e mostra una grande variabilità nella misura di lesione 17, 18 . Qui abbiamo sviluppato una stabile unilaterale 6-OHDA lesionato modello murino di PD mediante somministrazione diretta di 6-OHDA nella MFB, che causa la perdita costante&gt; 95% della dopamina striatale (come misurato mediante HPLC), oltre a produrre il comportamento squilibri osservati nel ben caratterizzati unilaterale 6-OHDA-lesionato modello di ratto PD. Questo modello murino di recente sviluppo del PD si rivelerà un prezioso strumento per la comprensione dei meccanismi alla base della generazione dei sintomi parkinsoniani.

Un protocollo per l&#39;esecuzione unilaterale 6-OHDA lesioni del fascio proencefalo mediale è descritto nei topi. Questo metodo ha un basso tasso di mortalità (13,3%) con l&#39;89% degli animali sopravvissuti mostrano una perdita&gt; 95% della dopamina striatale e di 90,63 ± -4,02% pregiudizi ipsiversive rotazione verso il lato della lesione.

Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson

Il modello di ratto con lesione unilaterale da 6-idrossidopamina (6-OHDA) per la malattia di Parkinson (PD) si è rivelato prezioso nel far progredire la nostra ...

L'obiettivo generale di questa procedura è generare un modello murino di parkinsonismo. Questo viene ottenuto innanzitutto preparando i farmaci necessari per l'intervento chirurgico. Il passo successivo consiste nell'allestire l'apparato chirurgico, quindi si esegue un'operazione chirurgica lesiva unilaterale con sei idrossidopamina, seguita da un'adeguata assistenza postoperatoria.Gli animali lesi con la sestrossi-dopamina possono essere utilizzati per esperimenti comportamentali. Alla fine, i risultati mostrano una deplezione della dopamina superiore al 95% nel fascio mediale dei quattro nervi cerebrali in modo unilaterale. I due aspetti più importanti di questa procedura a cui gli sperimentatori devono prestare attenzione sono, in primo luogo, una corretta assistenza postoperatoria per garantire la sopravvivenza degli animali.E in secondo luogo, prestare attenzione alla preparazione dell'apparecchiatura per l'infusione di sei idrossi dopamina, per garantire un'erogazione completa della neurotossina. Per iniziare questa procedura, sterilizzare gli strumenti chirurgici in un autoclave. Successivamente, pulire tutte le superfici e l'apparecchiatura con alcol isopropilico.Quindi pre

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Parkinson malattia è causata dalla perdita di innervazione dopaminergica al corpo striato, che può essere indotta sperimentalmente dalla 6-OH-dopamina. Ci descrivono come eseguire una lesione stereotassica e per monitorare apomorfina comportamenti indotti nei topi di rotazione. Questo modello è utile ed affidabile per testare nuove terapie per il morbo di Parkinson.

Modello murino per la malattia di Parkinson: da 6-OH lesione dopamina a test comportamentali

Questo video mostra una procedura per creare un modello di ratto del morbo di Parkinson iniettando la neurotossina 6-idrossidopamina (6-OHDA) nel cervello. L'infusione di neurotossina nel fascio mediale del proencefalo (MFB) colpisce specificamente i neuroni dopaminergici responsabili del controllo motorio, portando alla loro distruzione e replicando i sintomi della malattia di Parkinson.

Generazione del modello di ratto 6-idrossidopamina del morbo di Parkinson

Nella malattia e dei disordini del movimento di Parkinson, in generale, le analisi comportamentali sensibili e affidabili sono essenziali per testare nuove potenziali terapie. Qui, descriviamo una batteria gestibile di prove sensomotorie per i topi che sono sensibili a vari gradi di lesioni al sistema nigrostriatal e utile per gli studi preclinici.

Valutazione della Sensorimotor funzione in modelli murini di malattia di Parkinson

Descriviamo la istituzione di un modello murino per la malattia di Parkinson utilizzando MPTP e valutazioni comportamentali mediante cilindro e campo aperto test per misurare la funzione motoria. Usiamo quindi l-dopa come un esempio per mostrare come applicare questo modello nello studio delle droghe di PD.

Valutazioni del comportamento di locomozione spontanea in un modello murino indotto MPTP del morbo di Parkinson

Il protocollo presenta la riprogrammazione delle cellule mononucleari del sangue periferiche per indurre le cellule staminali neurali mediante l'infezione da virus Sendai, la differenziazione degli iNSC in neuroni dopaminergici, il trapianto di precursori DA nei precursori unilateralmente Modelli murini del morbo di Parkinson e valutazione della sicurezza e dell'efficacia dei precursori DA derivati da iNSC per il trattamento con LA PD.

Generazione di cellule staminali neurali indotte da cellule mononucleari periferiche e differenziazione verso i precursori dei neuroni dopaminergici per gli studi di trapianto

Qui descriviamo il sistema RatWalker, costruito riprogettando l'apparato MouseWalker per adattarsi alle maggiori dimensioni e peso dei ratti. Questo sistema utilizza la riflessione interna totale frustrata (FTIR), l'acquisizione video ad alta velocità e il software di analisi ad accesso aperto per tracciare e quantificare i parametri dell'andatura.

Applicazione del sistema RatWalker per l'analisi dell'andatura in un modello genetico di ratto della malattia di Parkinson

Il modello 6-idrossidopamina (6-OHDA) è stato utilizzato per decenni per far progredire la comprensione della malattia di Parkinson. In questo protocollo, dimostriamo come eseguire lesioni nigrostriatali unilaterali nel ratto iniettando 6-OHDA nel fascio proencefalico mediale, valutare i deficit motori e prevedere le lesioni utilizzando il test di stepping.

Il modello di ratto 6-idrossidopamina della malattia di Parkinson

I modelli di roditori di discinesie indotte da L-DOPA sono strumenti preziosi per identificare interventi terapeutici per attenuare lo sviluppo o alleviare le manifestazioni che emergono a causa della somministrazione ripetuta di L-DOPA. Questo protocollo dimostra come indurre e analizzare movimenti di tipo discinetico nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson.

Valutazione delle discinesie indotte da L-DOPA nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson

Questo articolo descrive i metodi per indurre e valutare le discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto di malattia di Parkinson. Il protocollo offre informazioni dettagliate sull'intensità e la frequenza di una serie di comportamenti discinetici, sia distonici che ipercinetici, fornendo uno strumento affidabile per testare trattamenti mirati a questo bisogno medico insoddisfatto.

Induzione e valutazione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson

Questo lavoro analizza la dose vettoriale e il tempo di esposizione necessari per indurre neuroinfiammazione, neurodegenerazione e compromissione motoria in questo modello preclinico di malattia di Parkinson. Questi vettori che codificano la α-sinucleina umana vengono consegnati nella substantia nigra per ricapitolare la patologia sinucleina associata al morbo di Parkinson.

Analisi del modello murino della malattia di Parkinson indotto da vettori virali adeno-associati che codificano la α-sinucleina umana

Impara a creare un modello murino di Parkinson con lesione unilaterale 6-OHDA nel fascicolo mediale del prosencefalo. Questo metodo garantisce deplezione dopaminergica superiore al 95% con bassa mortalità.

Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson

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