JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
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Inizia con topi anestetizzati con suture sull'arteria carotide esterna, o ECA, e sull'arteria carotide interna, o ICA, e un filamento sottile che occlude l'arteria cerebrale media, o MCA.
Posizionare una sonda laser Doppler per misurare il flusso sanguigno cerebrale relativo nell'MCA. Una diminuzione del flusso sanguigno conferma l'occlusione dell'MCA.
Fissare il filamento nell'ICA per mantenere l'occlusione MCA.
Questa occlusione limita l'afflusso di sangue ossigenato al cervello, portando alla morte neuronale e alla formazione di tessuto morto o di un infarto.
Dopo il periodo di occlusione, ritirare il filamento per ripristinare il flusso sanguigno.
Sutura l'incisione e lascia che i topi si riprendano.
Dividere i topi in due gruppi e somministrare un composto di prova tramite sonda orale al gruppo trattato, mentre il gruppo di controllo rimane non trattato.
Il composto entra in circolo, raggiunge il cervello, limita l'apoptosi neuronale e inibisce ulteriormente la morte neuronale rispetto al gruppo di controllo non trattato.
Un infarto più piccolo nel gruppo trattato rispetto al gruppo di controllo conferma l'effetto neuroprotettivo del composto.
Per impostare un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media di topo, o MCAO, confermare una mancanza di risposta allo stimolo del racconto in un topo maschio C57 nero 6 anestetizzato di sei settimane, da 22 a 25 grammi. E posiziona il mouse su una coperta di tenuta della temperatura corporea di 36,5 gradi Celsius collegata a un termometro.
Dopo aver rimosso tutti i peli dal petto e dal collo del topo con la rasatura e la crema depilatoria, posizionare il topo sotto uno stereomicroscopio e praticare un'incisione cutanea di due centimetri al centro del collo. Isolare con cura l'arteria carotide comune sinistra, l'arteria carotide esterna e il ramo dell'arteria carotide interna dai tessuti connettivi circostanti. E usa la sutura di seta 4-0 per legare l'arteria carotide esterna e l'arteria carotide comune, con un nodo a mezzo nodo per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno nell'arteria carotide interna.
Inserire un inserto da 0,1 a 0,12 millimetri di spessore, 11 millimetri di lunghezza, rivestito in silicone, 8-0 Monofilamento, sutura di seta 4-0 zero attraverso l'arteria carotide interna fino all'origine dell'arteria cerebrale media sinistra. E usa un flussometro laser Doppler per misurare la diminuzione del flusso sanguigno cerebrale relativo. Fissare il filamento inserito al vaso sanguigno per due ore, mentre l'arteria cerebrale è occlusa.
Al termine del periodo di occlusione, prelevare con cautela il filamento per ripristinare il flusso sanguigno per 22 ore di riperfusione. E usa suture di seta 3-0 per suturare la pelle in cinque punti con due nodi a mezzi nodi. Quindi, rimetti il topo nella sua gabbia per il recupero dell'anestetico. Un'ora dopo la fine della riperfusione, somministrare 300 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo di G-Rex agli animali da esperimento solo per via orale.