JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:47 min. • August 7th, 2025
Metti un topo anestetizzato con una zampa posteriore rasata sotto un microscopio chirurgico.
Incidere la pelle sulla gamba rasata, quindi tagliare gli strati di tessuto connettivo per esporre i muscoli sottostanti.
Usando i divaricatori, separare i muscoli per esporre il nervo peroneale comune.
Il nervo contiene motoneuroni, i cui terminali assonici si collegano alle fibre muscolari per formare giunzioni neuromuscolari o NMJ.
Individua l'intersezione del nervo con il tendine del muscolo gastrocnemio nel ginocchio.
Tenere il nervo con una pinza e applicare pressione per provocare lesioni.
Un sito di lesione traslucido indica un danno assonale, che porta a una compromissione della NMJ.
Assicurarsi che lo strato esterno dell'epinevrio del nervo sia intatto per guidare la rigenerazione assonale.
Rimuovere i divaricatori e riallineare i muscoli. Sutura il sito dell'incisione e consenti al topo di riprendersi.
I segnali provenienti dagli assoni danneggiati reclutano i macrofagi per eliminare i detriti assonali, il che supporta la rigenerazione assonale e il ristabilimento delle NMJ.
Posizionare il mouse sulla tavola chirurgica e confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi. Allineare gli arti all'interno dei vincoli, con l'arto posteriore bersaglio in una posizione anatomicamente naturale e l'articolazione del ginocchio leggermente estesa senza rotazione interna o esterna.
Quindi trasferire l'animale sotto un microscopio operatorio. E regola la tavola fino a quando l'articolazione ossea del ginocchio e la cresta tra i muscoli tibiale anteriore e gastrocnemio sono visibili attraverso l'obiettivo. Usando un bisturi e una pinza, praticare un'incisione di circa tre centimetri attraverso la pelle perpendicolare al decorso sottostante del nervo peroneale comune. Continuare l'incisione attraverso la fascia superficiale, esponendo i muscoli bicipite femorale e vasto laterale, seguita da un'incisione da 1 a 2 centimetri attraverso la fascia profonda di collegamento per separare i muscoli.
Successivamente, utilizzare divaricatori meccanici per arretrare il muscolo bicipite femorale caudalmente per rivelare il nervo peroneale comune. Tracciare il nervo prossimalmente fino a quando non si trova la sua intersezione con il tendine della testa laterale del muscolo gastrocnemio. Quindi utilizzare una pinza fine per afferrare il nervo, allineando le punte parallelamente al bordo laterale del tendine del gastrocnemio. E applicare una pressione concentrata costante per 5 secondi per schiacciare il nervo peroneale comune.
Tenendo la pinza perpendicolare alla fibra, afferrare il tessuto con l'area appena dietro la punta della pinza. E applica una pressione decisa ma delicata per uno schiacciamento pulito e lineare del nervo lungo il bordo del tendine.
Ispezionare visivamente il nervo attraverso il microscopio operatorio per confermare un completo schiacciamento del tessuto. Il nervo apparirà traslucido nel sito della lesione. Se il nervo è stato sufficientemente danneggiato, rimuovere i divaricatori. E riallineare i muscoli nelle loro posizioni anatomiche. Quindi utilizzare suture di seta 6-0 per chiudere il sito di incisione con una o tre suture semplici e interrotte e posizionare il mouse su un termoforo in una gabbia pulita con monitoraggio fino a quando non si è completamente ripreso.