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DOI: 10.3791/3300-v
Hirotaka Shoji1,2, Hideo Hagihara1, Keizo Takao3, Satoko Hattori1,2,3, Tsuyoshi Miyakawa1,2,3
1Division of Systems Medical Science, Institute for Comprehensive Medical Science,Fujita Health University, 2Japan Science and Technology Agency, Core Research for Evolutionary Science and Technology (CREST), 3Center for Genetic Analysis of Behavior, National Institute for Physiological Sciences,National Institutes of Natural Sciences
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Questo articolo presenta un protocollo di T-labirinto test utilizzando un apparecchio modificato automatizzato per la valutazione delle funzioni di apprendimento e di memoria nei topi.
Viene mostrata l'app Compagni di squadra automatici modificata con sistema di tracciamento. Questa app è costruita su rotaie in plastica bianca con pareti alte 25 centimetri. La MA è suddivisa in sei aree da una filettatura automatica verso l'area A.One è un compartimento STA.
S due è una somiglianza dei compagni di squadra. A uno sotto A due sono rispettivamente il braccio sinistro sotto il braccio destro. Le aree P uno sotto P due confrontano i passaggi di collegamento dalle aree A uno o A due due A uno in modo che il mouse possa tornare al compartimento statico.
Le porte si aprono automaticamente verso il basso qui in questo film come dimostrazione, una con le porte è azionata manualmente. Questo miglioramento degli operatori ci consente di utilizzare INB micro SSIS nella fisiologia molecolare e nella tecnica genica durante le prestazioni dei compagni di squadra. La N, è con un periodo per il distributore come punto incrociato utilizzato come ricompensa per il cibo spinge una bottiglia del distributore di cibo seguita dalla bottiglia scartata.
È possibile vedere il periodo che viene scaricato dal distributore di cibo sul vassoio del cibo e quindi scartato sotto il periodo del terreno a da Il mouse viene rilevato dal sensore e viene registrato da un computer. In pratica, il programma del sistema di tracciamento video eroga automaticamente il periodo in modo da non dover fare nulla fino alla fine della sessione. La telecamera CCD è montata sopra l'operatore per causare il comportamento del mouse da parte del computer come un'immagine dfor, l'app Parus è illuminata a 100 sguardi dai diritti centesimi.
Abbiamo raccomandato che l'Appell sia collocare una stanza insonorizzata per ridurre le stanze etniche OID che circondano l'ambiente a partire da una settimana prima come sessioni operative peso massa ogni giorno e fornire a ciascun topo un punteggio velocità per habitate al periodo e sul set di allenamento piatto alimentare periodo standard a CHO per mantenere l'80% all'85% del peso 40 di alimentazione libera durante l'esperimento. Il giorno dopo aver raggiunto il trasferimento di peso target, tutte le gabbie contenevano i topi nella stanza insonorizzata almeno fino a 30 minuti prima dell'inizio della prima prova per evitare la luce diretta della stanza. Le luci recenti evitano di posizionare le gabbie sul ripiano superiore.
Prima di posizionare il mouse negli operatori, è necessario pulire gli operatori con una lingua, aprendo così l'acqua super ipoclorosa per evitare un pregiudizio basato su ProAct Cues. I sei di oggi chiudono gli spiriti per topo al centro, che con i sei Comandamenti e si dipingono a un punto in ogni vassoio dei distributori di cibo. Metti tutti i topi a gabbia singola nel Perus e lasciali liberi.
Esplora il Perù con tutte le cose da fare o prima di 30 minuti A partire da Un giorno dopo l'arbitrato, i topi saranno sottoposti a drenaggio quotidiano del sangue con tutta la porta chiusa e il deposito del pallet nel treno del cibo. Posiziona il mouse nel braccio sinistro se il mouse consuma il pallet che sono cinque minuti AOP, trasferisci il mouse sul braccio destro e ricomincia il pre-allenamento. Questa procedura di addestramento viene ripetuta cinque volte al giorno e continuata fino a quando il topo non li ha consumati.
Più dell'80% dei periodi ha posizionato il mouse nel compartimento statico. Le porte vengono aperte e la bocca viene data di prima scelta ad un braccio veloce e ritorna da sola al vano di partenza. Quindi al mouse viene data la scelta in futuro.
Ora il braccio opposto al quarto braccio è ora morso. Successivamente, il mouse ritorna da solo alla casella statica e la procedura viene ripetuta. Questo viene ripetuto a 10 volte al giorno quando il controllo e i topi sperimentali.
Con questo criterio è possibile testare ulteriormente i topi nell'attività di ritenzione ritardata inserendo ritardi di 3, 10, 30 o 60 secondi tra i nomi di prima scelta e di scelta completa. Questo è un foglio di lavoro per registrare le informazioni per questo compito, l'ID univoco del mouse, il genotipo, il modello di punzonatura dell'orecchio e lo spazio per la registrazione che porta fuori a mano Programma di applicazione terrestre. Seleziona l'ID del progetto di input online plug TM.
Ad esempio, la sessione di input del nome della linea master. Ad esempio, la data del test, i parametri di input come la formula con l'immagine catturata dalla telecamera C tagliano il tempo e le dimensioni dell'operatore. Prossimo input id di prova.
Ad esempio, il numero della stazione per fare riferimento al nome del file o a questa attività e deve essere nominato tramite il menu in basso, il numero di scelta dell'immissione, il limite di tempo per l'errore della macchina e il tempo di penalità. Quindi impostare i valori di ness e contrasto con l'immagine di acquisizione seguita da una speciale immagine binaria breve. Infine, dopo aver verificato che apprezzare le regioni di interesse sono raccolte potrebbe il modello completo in modo che il programma sia pronto per il test.
Sollevare delicatamente il mouse e il mouse nello scomparto iniziale. Fare clic sul fondo iniziale e sull'opzione di forza. All'inizio, puoi vedere immagini dal vivo e binarie e lesioni di inte.
In questo caso, l'appello era ED in campo oggi con il braccio destro, il mouse è entrato nella pagina e la porta era aperta. La scelta completa verso il basso inizia il periodo è stato consegnato al braccio sinistro. Poiché il mouse è entrato nel braccio sinistro, la risposta è stata contrassegnata come corretta.
Il risultato delle risposte viene visualizzato nella finestra di luce inferiore del monitor. Qui, l'esempio di immagini dal vivo riprodotte agli uccelli di piombo mostrati allo spirito indica che le parole sono chiuse e il ciclo giallo indica il punto incrociato. Un topo viene sottoposto a 10 prove consecutive in una sessione al giorno.
Il mouse addestrato quotidianamente per condurre la media dell'80% di risposta corretta, la percentuale di risposta corretta, la latenza di risposta corretta per completare la sessione, la distanza dal livello e il numero di errori di remissione vengono calcolati automaticamente dal programma. Dopo ogni sessione, il viene riportato nella sua gabbia di casa. Pulisci la piastra per l'erogatore, pulisci il plaus con un tovagliolo di carta, quindi pulito, acqua super iper grossolana per evitare una distorsione basata sui tagli di fabbrica Se il controllo sotto i topi sperimentali, questi sono criteri e si desidera testare ulteriormente i topi nell'attività di ritenzione ritardata, è sufficiente selezionare il file ritardato nelle impostazioni del programma e iniziare la sessione successiva.
La procedura è in qualche modo simile all'attività di postazione, ma sia il braccio sinistro che quello destro, è sempre Ed Come nel programma di applicazione terrestre dell'attività di post conservazione. Seleziona il nome del file di deferenza per questa attività e il nome del mouse dal menu di messa giù, posiziona un mouse nel compartimento iniziale. Fare clic sul pulsante di avvio e la scelta del lead ora inizia.
In questo caso, selezionare il braccio viene sempre morso con il Periodo. Un topo è solitamente sottoposto a 10-20 prove consecutive in una sessione al giorno. I topi vengono addestrati quotidianamente a guidare i criteri che significano una risposta corretta dell'80%.
I risultati vengono calcolati automaticamente dopo i topi. Questi criteri, sessioni aggiuntive con i topi possono essere eseguite per valutare la memoria di detenzione e fatte inserendo il ritardo tra le sessioni o per valutare la vita comportamentale. Passando il fegato alla posizione del braccio opposto attraverso prove e sessioni, il video alla persona corregge questo processo con alfa etero M complicato e controllato dal tipo LI nel compito di automazione forzata.
Il risultato dimostrativo del risultato della memoria di lavoro con un mutante ma CBR compromesso nel compito del disco con un topo mutante che esegue questo compito è un problema e anche dopo un mese di ritardo, non hanno dimostrato alcuna compromissione nell'apprendimento del bus. Tuttavia, i mutanti hanno mostrato prestazioni compromesse. Teammates Test è uno dei test comportamentali più utilizzati per valutare la deambulazione e la memoria di riferimento.
Nel roditore, abbiamo migliorato l'apparato di prova, che presenta diversi vantaggi. Innanzitutto, le porte scorrevoli si aprono automaticamente e il mouse può entrare nella casella S da solo dopo ogni prova. Questa automazione dell'MA riduce il tempo e lo sforzo necessari per azionare manualmente i distributori di cibo e di guerra.
E nel nostro laboratorio, un esperimento gestisce fino a quattro compagni di squadra contemporaneamente. In secondo luogo, l'apparecchiatura ci consente di utilizzare tecniche che richiedono qualsiasi cablaggio dalla testa, come quella per la microdialisi, l'elettrofisiologia in vivo o l'optogenetica in vivo perché le porte scorrevoli si aprono verso il basso. Infine, il labirinto è progettato in modo che il mouse possa muoversi in avanti solo negli altri modi, non all'indietro, il che può consentire al mouse di muoversi senza intoppi.
In questo video, abbiamo presentato questo apparato automatico modificato per compagni di squadra e il nostro protocollo qui è il Dr.Hiro Pash. Nel nostro laboratorio, Hirotaka dimostrerà i protocolli utilizzando questo apparato automatizzato modificato in questo filmato. Hirotaka, qual è stata la tua prima impressione del test dei compagni di squadra con questo attrezzo migliorato?
La mia prima impressione è stata che l'apparecchio e il programma software erano molto facili da maneggiare e il test poteva essere eseguito facilmente. Pensi che chiunque possa manipolare questo operatore e quel programma o è necessario un qualche tipo di formazione speciale? Sono d'accordo in parte.
Chiunque può imparare a manipolare gli operatori. Non è necessaria alcuna formazione speciale per eseguire nessuna delle procedure di test. Ci sono suggerimenti o cose a cui dovresti prestare attenzione durante l'esecuzione del test?
Sì, sto attento a mantenere la motivazione per il cibo somministrato in massa controllando il peso corporeo ogni giorno. Le differenze individuali nella motivazione possono comportare variazioni nelle prestazioni dei compagni di squadra.
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