Riproducibile nervo sciatico Crush mouse e successiva valutazione da parte della Rigenerazione intera analisi Muscle Monte

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare un metodo semplice e riproducibile di schiacciamento del nervo sciatico e analisi dell'intera montatura della reinnervazione muscolare dopo lo schiacciamento del nervo sciatico. Ciò si ottiene esponendo prima il nervo sciatico, compresa la corretta disposizione dei divaricatori chirurgici per garantire un buon accesso al nervo. Quindi, schiaccia il nervo con una pinza emostatica e segna il nervo con il carbone.

Quindi rimuovere i singoli muscoli innervati dal nervo sciatico dall'arto posteriore. La fase finale consiste nel sezionare i singoli muscoli per l'analisi dell'intera montatura dopo l'immunocolorazione. In definitiva, i risultati dimostrano che lo schiacciamento riproducibile del nervo sciatico può essere semplicemente eseguito e che i supporti del foro muscolare possono essere utilizzati per analizzare la successiva rigenerazione.

Il vantaggio principale di questa procedura è che fornisce una tecnica semplice e riproducibile per schiacciare il nervo sciatico e successivamente segnare la rigenerazione assonale. Inizia questa procedura anestetizzando il topo per l'intervento chirurgico utilizzando un cocktail di 100 milligrammi per chilogrammo di ketamina e 10 milligrammi per chilogrammo di xilazina tramite iniezione intraperitoneale per ridurre al minimo il dolore postoperatorio. Il topo riceve anche un'iniezione sottocutanea di 10 milligrammi per chilogrammo di meloxicam.

Quindi, radere accuratamente entrambi i quarti posteriori utilizzando un tagliacapelli chirurgico. Quindi applicare la crema depilatoria nare per un completo esaurimento. Pulire la pelle con un applicatore sterile in cotone e uno scrub chirurgico Betadine.

Successivamente, applicare l'unguento oftalmico sugli occhi con un applicatore sterile con punta di cotone. Posiziona il mouse su una piastra di acciaio inossidabile pulita sopra una coperta omeotemica preriscaldata e mantieni la temperatura dell'animale a 37 gradi Celsius. Quindi fissa tutti gli arti con del nastro adesivo.

Posizionare con cura l'arto posteriore simmetricamente in modo che l'articolazione del ginocchio formi un angolo retto con il corpo. Successivamente, coprire il campo operatorio con un telo sterile al microscopio. Fai un'incisione semicircolare lungo la linea mediana.

Separare delicatamente la pelle dalla muscolatura sottostante e piegarla di tanto in tanto. Applicare circa 0,1 millilitri di soluzione fisiologica sterile per mantenere umido il sito chirurgico durante la procedura. Successivamente, aprire il piano fasciale tra il grande gluteo e la testa anteriore del bicipite femorale.

Rivelare il nervo sciatico per un controllo chirurgico. Il nervo sciatico controlaterale deve essere esposto e mobilizzato, ma lasciato intatto. Quindi riposare e suturare la muscolatura glutea.

Esporre il nervo sciatico sperimentale allo stesso modo con i divaricatori. Per facilitare la visualizzazione. Libera delicatamente il nervo sciatico dal tessuto connettivo circostante usando un paio di forbici per iridectomia.

Quindi utilizzare la pinza fine 5, 45 per posizionare il nervo nella mascella inferiore della pinza emostatica super fine, allineare le tre fasciali adiacenti, non una sopra l'altra. Le pinze emostatiche sono state incise con un segno a 1,5 millimetri dalla punta. Posizionare la parte più esterna dello sciatico in linea con questo segno prima di schiacciare.

Ciò garantisce uno schiacciamento di larghezza uniforme e che il nervo non si estenda oltre le ganasce della pinza emostatica quando viene appiattito a causa della forza di schiacciamento. Se il nervo si estende oltre le punte del forcipe, il nervo verrà schiacciato solo parzialmente. Utilizzare un secondo paio di pinze emostatiche che sono state pre-immerse e in polvere di carbonio per contrassegnare il sito di schiacciamento.

Schiaccia il nervo nello stesso sito di schiacciamento per 15 secondi a tre clic. Nessuna marcatura del carbonio dovrebbe estendersi oltre il limite dello schiacciamento iniziale. Ciò è particolarmente importante se è necessaria una marcatura precisa del sito di schiacciamento per immergere la pinza nel carbonio ed evitare la diffusione del carbonio nel sito chirurgico.

Aprire la pinza in polvere di carbonio. Quindi chiuderli delicatamente. Utilizzare una garza sterile per rimuovere il carbonio all'esterno degli emostatici.

Controllare le pinze con un ingrandimento di almeno tre x per verificare che le superfici di frantumazione siano uniformemente rivestite di carbonio in polvere. Se necessario, vengono immersi e asciugati e suturano la muscolatura glutea allo stesso modo del lato controlaterale. Infine, chiudere l'incisione cutanea utilizzando le clip riflesse da nove millimetri.

Se si scopre che le clip riflesse da nove millimetri limitano il movimento, è possibile utilizzare clip riflesse più piccole o sei suture automatiche. Invece, dopo aver sacrificato il topo, rimuovi quattro muscoli. Le tibie dell'estensore lungo delle dita anteriori, del peroneo lungo e del soleo nell'arto posteriore si fissano attentamente attraverso i loro tessuti connettivi su un piatto rivestito di sard nero.

Quindi sciacquarli in PBS. Successivamente, fissarli in aldeide paraforme al 4% per 30 minuti. Per sezionare ogni muscolo su una capsula di Petri rivestita di sard nera, rimuovere i tendini da essa usando le forbici per iridectomia.

Successivamente, assottigliare i muscoli staccando le fibre muscolari interne Preservare con cura la superficie esterna del muscolo, comprese le bande della placca terminale. Quindi montare i muscoli risultanti su vetrini plus con scudo vettoriale e vetrini coprivetri da 22 x 40 millimetri sigillare due lati con smalto trasparente. Quando sono montati correttamente sulla guida, le bande nplate devono essere a contatto con i vetrini coprioggetto.

Ecco un esempio di un sito di schiacciamento in situ all'arto posteriore sinistro. Il sito di schiacciamento è indicato dal carbonio nero. L'asterisco segna un ramo del nervo tibiale che innerva la muscolatura della coscia e funge da utile punto di riferimento.

Durante l'intervento chirurgico di schiacciamento, la divisione tibiale del nervo sciatico è delineata in blu, il peroneo e il verde e lo srel e il giallo. Questa sezione semisottile dimostra uno schiacciamento completo eseguito con la pinza emostatica. Le punte di freccia indicano qui le fibre schiacciate.

Uno schiacciamento incompleto eseguito con la pinza angolata è indicato in un'altra sezione di semipinna. La punta della freccia indica ancora una volta le fibre schiacciate mentre le frecce indicano gli assoni conservati. Queste sono le immagini renderizzate da tutti i muscoli della montatura.

Dopo la rimozione del tessuto connettivo e il successivo assottigliamento, le bande nplate sono delineate su ciascun muscolo. Qui è mostrato il muscolo della monta intero sotto. 14 giorni dopo lo schiacciamento del nervo sciatico.

Le frecce indicano le aree della giunzione neuromuscolare che sono state reinnervate da un assone. Ecco la dimostrazione della giunzione neuromuscolare denervata. Il gap 43 processi positivi delle cellule di Schwan sono indicati dalle punte di freccia.

Non si vedono assoni in questa giunzione neuromuscolare denervata. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come schiacciare in modo riproducibile il nervo statico e preparare le montature ormonali muscolari per l'analisi della rigenerazione.