עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להדגים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור של מעיכה של העצב הסיאטי (sciatic nerve) וניתוח whole mount של עיצבוב מחדש של השריר לאחר מעיכת העצב הסיאטי. זאת מושגים תחילה על ידי חשיפת העצב הסיאטי, כולל סידור נכון של רטרקטורים כירורגיים להבטחת גישה טובה לעצב. לאחר מכן, יש למעוך את העצב באמצעות פינצטת המוסטט (hemostat forceps) ולסמן את העצב באמצעות פחם.

לאחר מכן, הסר שרירים בודדים המעצבבים על ידי עצב הסיאטיק (sciatic nerve) מהגפה האחורית. השלב האחרון הוא נתיחה של שרירים בודדים לצורך אנליזת whole mount לאחר צביעה אימונוהיסטוכימית. בסופו של דבר, התוצאות מדגימות שניתן לבצע מעיכה שמימה של עצב הסיאטיק באופן הדיר, וניתן להשתמש בדגימות שריר מסוג hole mounts כדי לנתח את ההתחדשות העוקבת.

היתרון המרכזי של הליך זה הוא שהוא מספק טכניקה פשוטה וניתנת לשחזור למעיכת העצב הסיאטיקה ולאחר מכן לדירוג של התחדשות אקסונית. התחל את ההליך על ידי הרדמת העכבר לניתוח באמצעות תערובת של 100 milligrams per kilogram של ketamine ו-10 milligrams per kilogram של xylazine בהזרקה תוך-peritoneal כדי למזער כאבים לאחר הניתוח. העכבר מקבל בנוסף הזרקה תת-עורית של 10 milligrams per kilogram של meloxicam.

בשלב הבא, גלחו את שתי הרגליים האחוריות בזהירות באמצעות מכסחת ניתוחית. לאחר מכן, מרחו קרם להסרת שיער מהנחיריים להסרה מלאה. נקו את העור באמצעות מקלוני צמר גפן סטריליים וסבון ניתוחי מסוג Betadine.

לאחר מכן, יש למרוח משחה אופתלמית על העיניים באמצעות מקלוני צמר גפן סטריליים. הנח את העכבר על פלטת נירוסטה נקייה מעל שמיכה תרמית (homeo themic blanket) שחוממה מראש, ושמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים ב-37 °C. לאחר מכן, הצמד את כל הגפיים בעזרת סרט דביק.

מקם את הגפה האחורית בזהירות ובסימטריה, כך שמפרק הברך ייצור זווית ישרה ביחס לגוף. לאחר מכן, כסה את השטח הכירורגי בסביבת המיקרוסקופ באמצעות כיסוי סטרילי. בצע חתך חצי-מעגלי לרוחב קו האמצע.

הפרידו בעדינות את העור מהשרירים שמתחתיו וקפלו אותו מדי פעם. מרססו כ-0.1 milliliters של תמיסת סליין סטרילית כדי לשמור על לחות אתר הניתוח במהלך הפרוצדורה. לאחר מכן, פתחו את מישור הפסציה שבין ה-gluteus maximus לבין הראש הקדמי של ה-biceps femoris.

לחשיפת העצב הסיאטי עבור ביקורת כירורגית. יש לחשוף ולנייד את העצב הסיאטי בצד נגדי, אך להשאירו שלם. לאחר מכן, יש להחזיר למקומם ולתפור את שרירי העכוז.

חשוף את עצב הסיאטיקה (sciatic nerve) הניסויי באותה צורה באמצעות מסיטים. כדי להקל על הוויזואליזציה, שחרר בעדינות את עצב הסיאטיקה מרקמת החיבור הסובבת באמצעות מספרי אירידקטומיה.

לאחר מכן, השתמש בפינסטה דקה 5 45 כדי להניח את העצב בלסת התחתונה של פינסטת העצירה העדינה ביותר, וסדר את שלוש הפסציות אחת לצד השנייה ולא אחת על גבי השנייה. על פינסטת העצירה חרוט סימון במרחק של 1.5 מילימטרים מהקצה שלה. הנח את החלק החיצוני ביותר של העצב הסיאטי בקו אחד עם סימון זה לפני המעיכה.

דבר זה מבטיח מעיכה ברוחב אחיד ושעצב לא יבלוט מעבר ללסנפירים של המלקחיים ההמוסטטיים כאשר הוא נשטח כתוצאה מכוח המעיכה. אם העצב בולט מעבר לקצות המלקחיים, הוא יימעך באופן חלקי בלבד. השתמש בזוג שני של מלקחיים המוסטטיים שטבלו מראש בפחמן בתוך אבקה כדי לסמן את אתר המעיכה.

מעכו את העצב באותה נקודת מעיכה למשך 15 שניות בשלוש לחיצות. סימון הפחמן לא יעלה על גבולות המעיכה הראשונית. הדבר חשוב במיוחד אם נדרש סימון מדויק של נקודת המעיכה, כדי לטבול את הפינצטה בפחמן מראש ולמנוע פיזור נרחב של פחמן באתר הניתוח.

פתחו את הפינצטה בתוך פחמן בתוך אבקה. לאחר מכן, סגרו אותן בעדינות. השתמשו בגזה סטרילית כדי לנגב את הפחמן מהחלק החיצוני של התופסנים (hemostats).

בדקו את הפינצטה תחת הגדלה של לפחות פי שלושה כדי לוודא שמשטחי המעיכה מצופים באופן אחיד בפחמן במיגב. במידת הצורך, טבלו אותה שוב ונגבו אותה, והחזירו ותפרו את שרירי העכוז באותו אופן כבצד הנגדי. לבסוף, סגרו את חתך העור באמצעות קליפסים רפלקס של תשעה מילימטרים.

אם נמצא כי קליפי רפלקס של תשעה מילימטרים מגבילים את התנועה, ניתן להשתמש בקליפי רפלקס קטנים יותר או בתשאי תפירה אוטומטיים של שישה. במקום זאת, לאחר הקרבת העכבר, הסר בזהירות ארבעה שרירים מהגפה האחורית: ה-tibias anterior extensor digitorum longus, ה-peroneus longus וה-soleus, על ידי קיבוע רקמות החיבור שלהם לצלחת מצופה בשריון שחור באמצעות סיכות.

לאחר מכן, שטפו אותם ב-PBS. לאחר מכן, קבעו אותם ב-4% Paraform aldehyde למשך 30 דקות. כדי לבצע דיסקציה של כל שריר על צלחת פטרי מצופה בפיח שחור, הסירו ממנו את הגידים באמצעות מספרי אירידקטומיה.

לאחר מכן, דללו את השרירים על ידי קילוף סיבי שריר פנימיים. יש לשמור בזהירות על פני השטח החיצוניים של השריר, כולל פסי ה-endplate. לאחר מכן, הצמידו את השרירים שהתקבלו לשקופיות פלוס באמצעות vector shield וכיסויי זכוכית של 22 על 40 מילימטר, ואטמו שני צדדים בעזרת לק שקוף. כאשר הם מורכבים כראוי על השקופית, פסי ה-endplate צריכים להיות במגע עם כיסויי הזכוכית.

כאן מוצגת דוגמה לאתר מעיכה in situ בגפה האחורית השמאלית. אתר המעיכה מסומן בפחם שחור. הכוכבית מסמנת ענף של עצב הטיביאלי (tibial nerve) המעצב את שרירי הירך ומשמש כנקודת ציון יעילה.

במהלך ניתוח המעיכה, הענף השוקי של עצב הסיאטיק מסומן בכחול, הענף הפרונאלי בירוק והענף הסוראלי בצהוב. חתך דק-חלקית זה מדגים מעיכה מלאה שבוצעה באמצעות מלקחיים המוסטטיים. ראשי חצים מצביעים כאן על סיבים מעוכים.

מעיכה חלקית שבוצעה באמצעות פינצטה זוויתית מוצגת בחתך רוחבי נוסף. ראשי חצים מצביעים שוב על סיבים מעוכים בעוד שחצים מצביעים על אקסונים שנשמרו. אלו הן התמונות המרונדרות של השרירים בשיטת whole mount.

לאחר הסרת רקמת החיבור ודילול עקבי, סימנו את גבולות רצועות ה-nplate בכל שריר. מוצגת כאן דגימה שלמה של שריר ה-sous, 14 ימים לאחר מעיכה של עצב הסקיאטיקה.

החצים מצביעים על אזורים במעבר העצבי-שרירי שעוברו שוב על ידי אקסון. כאן מוצג מעבר עצבי-שרירי שעבר דנרוואציה. שלוחות של תאי שוואן חיוביים ל-gap 43 מסומנות על ידי ראשי החצים.

לא נראים אקסונים במפגש עצבי-שרירי מנוירון זה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן למעוך באופן הדיר באופן עקבי עצב סטטי ולהכין דגימות של שריר והורמונים לצורך ניתוח של התחדשות.