Name: Seta Film per la cultura del sistema In vitro Analisi e Progettazione Biomaterial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 19 s
Description: Impara a preparare film di seta per colture cellulari in vitro. Questo metodo versatile consente di studiare le risposte cellulari e ottimizzare i biomateriali prima delle applicazioni in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Il finanziamento previsto dal NIH K08EY015829, R21EY019561, R24EY015656, P41 EB002520 e R01 EY020856 ricerca per prevenire Career Development Award cecità, e Tri-Istituzionale Stem Cell Initiative. Linea cellulare HCLE per gentile concessione del Dr. Ilene Gipson. Gli autori desiderano ringraziare il Dott. Liu Aihong al Weill Cornell Medical College per la sua assistenza tecnica e di orientamento con la coltura cellulare, Anthony Labissiere presso l&#39;Hospital for Special Ambulatori per la sua assistenza tecnica SEM imaging, il Tissue Engineering Resource Center (TERC) a Tufts University per l&#39;assistenza tecnica con lo sviluppo materiale, Cornell e il Centro per la scienza su nanoscala e MET (CNF) per l&#39;assistenza nella produzione di wafer di silicio.

1. Fabbricazione di stampi in gomma silicone <ol><li> Produrre o acquistare una superficie topografica desiderata per la fusione. Per questa pubblicazione un wafer di silicio standard 100 millimetri inciso verrà descritto (Figura 1). </li><li> Pesare polidimetilsilossano (PDMS) potting (componente A) e catalizzatore (componente B) soluzione in un rapporto 1:9 (9 g potting ed 1 g di catalizzatore), come fornito nel kit acquistato. </li><li> Mescolare accuratamente soluzioni per avviare il processo di polimerizzazione. </li><li> Posizionare wafer di silicio di superficie di un piatto di colata. </li><li> Pesare 4,5 g di soluzione PDMS su wafer di silicio. </li><li> Diffusione soluzione PDMS da coprire un&#39;area di 100 mm di diametro della superficie del wafer. </li><li> Inclinare wafer per diffondere la soluzione PDMS in modo uniforme. </li><li> Coprire wafer da 100 millimetri coperchio diametro del disco di Petri. </li><li> Luogo colata di installazione in forno a 60 ° C durante la notte, facendo attenzione che la cura si svolge su una superficie piana. </li><li> Luogo curato PDMS / wafer di silicio in etanolo al 70%bagno prima della rimozione. </li><li> Inizia la rimozione PDMS dal wafer utilizzando lama di rasoio per sollevare bordo (intera circonferenza) prima. </li><li> Estrarre delicatamente PDMS off con pinza all&#39;interno di un bagno di etanolo al 70% facendo attenzione a non strappare fusione in gomma siliconica. </li><li> Punch out singoli stampi di PDMS con 14 foratura mm. Questo diametro è progettato per adattarsi in un 24 e piastra di installazione. </li></ol> 2. Produzione di soluzione di seta <ol><li> Portare 2 L di acqua distillata (DH 2 O) a ebollizione all&#39;interno di un bicchiere di vetro 7. </li><li> Tagliare 5 g di bozzoli di bachi da seta Bombyx mori in tre parti. </li><li> Smaltire bozzoli estesamente contaminati come indicato dal rivestimento eccessiva particolato insetti la superficie interna bozzolo. </li><li> Misurare 4,24 g di carbonato di sodio. </li><li> Aggiungi carbonato di sodio lentamente ad ebollizione dH 2 volume O per evitare traboccamenti di acqua, e lasciare completa dissoluzione prima di continuare. </li><li> Aggiungere i pezzi di bozzolo ad ebollizione dH <sub&gt; 2 O per 40 min., e utilizzare un rivestito di Teflon di suscitare scalpore bozzoli durante il processo di ebollizione. </li><li> Dopo la bollitura, scolare con cura dH 2 O nel lavandino e risuonare l&#39;estratto di seta a mano per rimuovere l&#39;acqua in eccesso. </li><li> Lavare seta estratto tre volte per 20 min. ciascuna in 1 L di dH 2 O in un bicchiere di laboratorio, e utilizzare una barra di agitazione a circolare volume entro beaker. </li><li> Dopo il lavaggio, gridate, l&#39;estratto di seta a mano e seta estratto posto in fibra all&#39;interno di una cappa chimica per consentire l&#39;essiccazione per un hr 12. periodo. </li><li> Il giorno dopo, pesare le fibre di seta secchi, che in genere è ~ 3,5 g: ___________-g </li><li> Preparare una soluzione 9,3 M di LiBr 20% w / v soluzione di seta. Utilizzare le seguenti equazioni per calcolare il peso necessario e volumi: <ol class="lalpha"><li> (Estratto di seta peso dal punto 10) x (4) = ___________-mL di soluzione totale di 9,3 M LiBr </li><li> [(807,705) x (volume LiBr da parte 11.a)] / 1000 = ___________ g di LiBr da aggiungere a dH 2 O </li></ol> &lt;/ Li&gt; <li> Aggiungere peso LiBr misurato in un bicchiere di vetro delle seguenti dH O 2 Volume: <ol class="lalpha"><li> (0,8) x (volume calcolato dal punto 11.a) = ___________ ml di dH 2 O </li></ol></li><li> Versare questa soluzione in un cilindro graduato di dimensioni appropriate, e portare la soluzione a volume finale calcolata in parte 11.a. </li><li> Posizionare l&#39;estratto di seta in bicchiere e versare la soluzione LiBr negli fibre di seta assicurandosi che le fibre di seta sono immersi nella soluzione di bromuro di litio con una spatola di laboratorio. </li><li> Posizionare la seta disciolto in forno a 60 ° C per 4 ore: Ora di inizio: ___________ Ora di scadenza: ___________ </li><li> Utilizzando una siringa di dimensioni adeguate elaborare 12 mL della soluzione di seta. Inserire un ago 18G sull&#39;estremità della siringa, e poi iniettare la soluzione in un casette dialisi (3.500 MW coutoff, Slide-A-Lyzer, Thermo Scientific). Dopo aver riempito la cassetta, disegnare l&#39;aria residua fuori la cassetta con la siringa svuotata. </li><li> Luogo fidialisi cassette lled entro 1 L di dH 2 O. </li><li> Modificare dH 2 volume O dopo 1 ora, 4 ore, 8 ore e poi ogni 12 ore 3 volte per un totale di 6 modifiche: <ol class="lalpha"><li> Inizio: ___________ </li><li> 1 ora: ___________ </li><li> 4 ore: ___________ </li><li> 8 ore: ___________ </li><li> 12 ore: ___________ </li><li> 12 ore: ___________ </li><li> 12 ore: ___________ </li><li> Fine: ___________ </li></ol></li><li> Dopo la dialisi, lentamente raccogliere la soluzione di seta da cassette con la siringa. Soluzione Luogo in 10.000 g di provette nominali. </li><li> Centrifugare la soluzione per due volte a 10.000 g a 4 ° C per 20 minuti ciascuna. Dopo ogni supernatante centrifugazione posto in una nuova provetta. </li><li> Conservare thr soluzione di seta in 4 ° C frigorifero. </li><li> Pipettare 2 campioni di 0,5 ml di soluzione di seta in piccoli pesano piatto, e il luogo pesano i piatti all&#39;interno di un forno a 60 ° C a secco per 12 ore o fino a quando si asciuga la soluzione di seta. </li><li> Pesare il film restante seta solido da both campioni per misurare soluzione seta percento in peso di concentrazione in volume di proteine: <ol class="lalpha"><li> Peso dei campioni di seta combinate 2 pellicole: ___________ mg </li><li> (Peso da 23.A) x (100) = seta ___________% </li></ol></li></ol> 3. Preparazione di film Seta e sistema cultura <ol><li> Preparare le superfici di colata PDMS pulendo con del nastro adesivo trasparente per rimuovere la polvere. </li><li> Clean PDMS substrati immergendo nel 70% EtOH e lavare tre volte con dH 2 O. </li><li> Luogo 14 mm stampi PDMS sulla piastra di supporto, che è tipicamente un coperchio piatto ben 24. </li><li> Per produrre un film spesso 50 micron, si sviluppa 70 μls di soluzione di seta 8% su stampi PDMS utilizzando uno strumento di diffusione di liquido che è tipicamente una siringa da 1 ml punta 2. </li><li> Lasciare le pellicole di seta ad asciugare scoperti su un banco pulito esegue un flusso di aria pressione di 150 Pa per un periodo di 90 minuti o fino pellicole siano asciutte. </li><li> Una volta che i film sono luogo asciutto intero set di film, tra cui PDMS molds, in una camera d&#39;acqua-&gt; ricottura per 4 ore per produrre una pellicola insolubile in acqua. Questo è tipicamente una camera vuota essiccatore con acqua sul fondo del bacino tirato a vuoto 25 kPa 15. </li><li> Rimuovere film di seta da acqua ricottura camera e posto su un banco pulito. </li><li> Preparare un bagno di EtOH 70% entro una capsula Petri 35 millimetri, e substrati di controllo posto (cioè vetro o superfici in plastica) e gli anelli in acciaio inox all&#39;interno di pozzetti per almeno 10 minuti per sterilizzare. </li><li> Rimuovere film di seta dalle muffe PDMS con una pinzetta, immergerli in 70% EtOH, e campione posto in piastra da 24 pozzetti pre-riempita con 1 ml di EtOH 70% assicurandosi lato modellato è rivolto verso l&#39;alto per consentire l&#39;adesione delle cellule. </li><li> Dopo aver posizionato ciascun campione di pellicola di seta in un corrispondente e pesi in acciaio inox ad anello posto (11,65 mm di diametro interno, 15,45 mm di diametro esterno e spessore 1,18 mm) sulla parte superiore. </li><li> Lasciare che i campioni con anelli ad incubare per 10 minuti per garantire la sterilità. </li><li> Remove EtOH e lavare ciascun campione 3x con 1 ml di PBS. Lasciate ogni lavaggio riposare per 5 minuti per consentire la diffusione completa. </li><li> Rimuovere PBS utilizzando pipetta di vetro aspirazione, facendo attenzione a rimuovere la maggioranza di bolle sotto campioni di film di seta. </li><li> Preparare linea cellulare per la semina. Come esempio, Tripsinizzare umano corneale-limbare epiteliale (HCLE) linea cellulare con tripsina 0,25% e di acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) soluzione 7-min. Disattivare tripsina usando 01:01 volume di Eagle modificato da Dulbecco (DMEM) con mezzi passaggio 10% FBS aggiunto. Centrifugare tripsinizzate cellule HCLE, aggiungere 8 mL di media liberi cheratinociti-siero (K-SFM) a pellet, agitare delicatamente per disperdere HCLEs, e generare conta delle cellule. </li><li> Campione 500 microlitri di sospensione HCLE per pozzetto in genere utilizzando un 10.000 cellule / cm 2 densità. </li><li> Luogo culture all&#39;interno incubatore a 37 ° C e 5% CO 2 ed eseguire desiderato protocollo sperimentale. </li></ol> 4. Risultati rappresentativi &lt;class p = &quot;jove_content&quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig1.jpg" /> Figura 1. Diagramma di flusso illustrante sintesi 10-fasi della produzione della seta film e sistema di preparazione della cultura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig2.jpg" /> Figura 2. (A) 21-colorante array di topografie linea superficie modellata prodotte su un wafer di silicio diametro 90 mm ​​impiegando normali tecniche di incisione fotolitografiche e secca. (B), film di seta mantenere le caratteristiche originali linee parallele modellate dopo la fusione sulle superfici di stampaggio PDMS. (C) Schema dimostrando di progettazione dimensione del tratto scelto per promuovere l&#39;allineamento cellulare. (D) Sezione di film seta illustrare mantenuto superficie parallela foderato fantasia. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig3.jpg" /> Figura 3. Scansione micrografie elettroniche di linea cellulare HCLE aderendo (A) modellatoe (B) film di seta piatte giorno 2 nella cultura. Culture HCLE continuano a proliferare a confluenza in (C) decorato e (D), superfici piane in 8 giorni in coltura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig4.jpg" /> Figura 4. (A, D, G) Patterned e (B, E, H) piatti film sericoltura HCLE cellule relativamente a (C, F, I) substrati di vetro a controllo (AC) giorno 1, (DF) il giorno 4, e (GI) 8 giorno in cultura. (J) contenuti CyQuant acido nucleico e (K) (3 - (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) attività metabolica dati del saggio dimostrano vitalità HCLE sia modellato e substrati piatti pellicola seta rispetto alle superfici vetrose di controllo nel corso del tempo (barre di scala = 100 micron). Video 1. Dopo un po &#39;di imaging a contrasto di fase di cellule HCLE migrazione su una superficie di seta fantasia del film durante un hr 18. periodo di tempo. Le cellule sono state seminate a 10k/cm 2 densità e coltivate per 2 h. prima della creazione dell&#39;immagine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3646/3646movie1.MOV" target="_blank">Clicca qui per vedere il film</a> . Video 2. Dopo un po &#39;di imaging a contrasto di fase di cellule HCLE migrazione su una superficie piana di controllo TCP durante un hr 18. periodo di tempo. Le cellule sono state seminate a 10k/cm 2 densità e coltivate per 2 h. prima della creazione dell&#39;immagine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3646/3646movie2.MOV" target="_blank">Clicca qui per vedere il film</a> .

<ol><li>Rockwood, D., Preda, R. C., Yucel, T., Wang, X., Lovett, M. L., Kaplan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Materials+Fabrication+from+Bombyx+mori+Silk+Fibroin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Materials Fabrication from Bombyx mori Silk Fibroin.</a> Nature protocols. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Lawrence, B., Omenetto, F., Chui, K., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+methods+to+control+silk+fibroin+film+biomaterial+features%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+materials+science%22%5BJournal%5D)">Processing methods to control silk fibroin film biomaterial features.</a> Journal of materials science. 43, 6967-6985 (2008).</li>
<li>Altman, G., Diaz, F., Jakuba, C., Calabro, T., Horan, R., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk-based+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Silk-based biomaterials.</a> Biomaterials. 24, 401-416 (2003).</li>
<li>Hofmann, S., Wong, P. o, Foo, C., Rossetti, F., Textor, M., Vunjak-Novakovic, G., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk+fibroin+as+an+organic+polymer+for+controlled+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Silk fibroin as an organic polymer for controlled drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 111, 219-227 (2006).</li>
<li>Demura, M., Asakura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+glucose+oxidase+with+Bombyx+mori+silk+fibroin+by+only+stretching+treatment+and+its+application+to+glucose+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+bioengineering%22%5BJournal%5D)">Immobilization of glucose oxidase with Bombyx mori silk fibroin by only stretching treatment and its application to glucose sensor.</a> Biotechnology and bioengineering. 33, 598-603 (1989).</li>
<li>Cebe, P., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+enzymatic+degradation+of+beta-sheet+crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Mechanism of enzymatic degradation of beta-sheet crystals.</a> Biomaterials. , (2010).</li>
<li>Lawrence, B., Cronin-Golomb, M., Georgakoudi, I., Kaplan, D., Omenetto, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+silk+protein+biomaterial+systems+for+optical+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Bioactive silk protein biomaterial systems for optical devices.</a> Biomacromolecules. 9, 1214-1220 (2008).</li>
<li>Meinel, L., Hofmann, S., Karageorgiou, V., Kirker-Head, C., McCool, J., Gronowicz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+responses+to+silk+films+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The inflammatory responses to silk films in vitro and in vivo.</a> Biomaterials. 26, 147-155 (2005).</li>
<li>Vepari, C., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk+as+a+biomaterial%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Silk as a biomaterial.</a> Progress in Polymer Science. 32, 8-9 (2007).</li>
<li>Li, M., Ogiso, M., Minoura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+degradation+behavior+of+porous+silk+fibroin+sheets%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enzymatic degradation behavior of porous silk fibroin sheets.</a> Biomaterials. 24, 357-365 (2003).</li>
<li>Arai, T., Freddi, G., Innocenti, R., Tsukada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradation+of+Bombyx+mori+silk+fibroin+fibers+and+films%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Biodegradation of Bombyx mori silk fibroin fibers and films.</a> Journal of Applied Polymer Science. 91, 2383-2390 (2004).</li>
<li>Lawrence, B., Marchant, J., Pindrus, M., Omenetto, F., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk+film+biomaterials+for+cornea+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Silk film biomaterials for cornea tissue engineering.</a> Biomaterials. 30, 1299-1308 (2009).</li>
<li>Ma, X., Cao, C., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biocompatibility+of+silk+fibroin+films+containing+sulfonated+silk+fibroin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+B%3A+Applied+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The biocompatibility of silk fibroin films containing sulfonated silk fibroin.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 78, 89-96 (2006).</li>
<li>Patel, A., Thakar, R., Chown, M., Ayala, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+mechanisms+of+single-cell+interactions+with+microtopographical+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical%22%5BJournal%5D)">Biophysical mechanisms of single-cell interactions with microtopographical cues.</a> Biomedical. , (2010).</li>
<li>Jin, H., Park, J., Karageorgiou, V., Kim, U., Valluzzi, R., Cebe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-Stable+Silk+Films+with+Reduced+%CE%B2-Sheet+Content%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Water-Stable Silk Films with Reduced β-Sheet Content.</a> Advanced Functional Materials. 15, 1241-1247 (2005).</li>
<li>Lawrence, B., Wharram, S., Kluge, J., Leisk, G., Omenetto, F., Rosenblatt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Hydration+on+Silk+Film+Material+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Effect of Hydration on Silk Film Material Properties.</a> Macromolecular Bioscience. 10, 393-403 (2010).</li>
<li>Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+silk+fibroin+as+a+support+for+enzyme+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Natural silk fibroin as a support for enzyme immobilization.</a> Biotechnology Advances. 16, 961-971 (1998).</li>
<li>Cebe, P., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+enzymatic+degradation+of+beta-sheet+crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Mechanism of enzymatic degradation of beta-sheet crystals.</a> Biomaterials. , (2010).</li>
<li>Shaw, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractionation+of+the+fibroin+of+Bombyx+mori+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Fractionation of the fibroin of Bombyx mori with trypsin.</a> Biochemical Journal. 93, 45(1964).</li>
<li>Rice, W., Firdous, S., Gupta, S., Hunter, M., Foo, C., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+characterization+of+structure+and+morphology+of+silk+fibroin+biomaterials+using+non-linear+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Non-invasive characterization of structure and morphology of silk fibroin biomaterials using non-linear microscopy.</a> Biomaterials. 29, 2015-2024 (2008).</li>
<li>Chirila, T., Barnard, Z., Harkin, D., Schwab, I., Hirst, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bombyx+mori+silk+fibroin+membranes+as+potential+substrata+for+epithelial+constructs+used+in+the+management+of+ocular+surface+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Bombyx mori silk fibroin membranes as potential substrata for epithelial constructs used in the management of ocular surface disorders.</a> Tissue Engineering Part A. 14, 1203-1211 (2008).</li>
<li>Hu, X., Shmelev, K., Sun, L., Gil, E. -S., Park, S. -H., Cebe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Silk+Material+Structure+by+Temperature-Controlled+Water+Vapor+Annealing%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Regulation of Silk Material Structure by Temperature-Controlled Water Vapor Annealing.</a> Biomacromolecules. 12, 1686-1696 (2011).</li>
<li>Omenetto, F., Kaplan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+route+for+silk%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Photonics%22%5BJournal%5D)">A new route for silk.</a> Nature Photonics. 2, 641-643 (2008).</li>
<li>Bray, L. J., George, K. A., Ainscough, S. L., Hutmacher, D. W., Chirila, T. V., Harkin, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+corneal+epithelial+equivalents+constructed+on+Bombyx+mori+silk+fibroin+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Human corneal epithelial equivalents constructed on Bombyx mori silk fibroin membranes.</a> Biomaterials. 32, 5086-5091 (2011).</li>
<li>Wang, N., Tytell, J. D., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanotransduction+at+a+distance%3A+mechanically+coupling+the+extracellular+matrix+with+the+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanotransduction at a distance: mechanically coupling the extracellular matrix with the nucleus.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 75-82 (2009).</li>
<li>Jaalouk, D. E., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanotransduction+gone+awry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanotransduction gone awry.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 63-73 (2009).</li>
</ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

L&#39;uso di pellicole di seta rigenerata come substrato per la coltura cellulare ha guadagnato in popolarità nel corso degli ultimi due decenni a causa di caratterizzazione estensiva delle proprietà del materiale di questa proteina e una maggiore comprensione della sua utilità biomateriale 3,8. Il sistema di coltura qui descritto rappresenta un nuovo sistema di test in vitro per valutare le interazioni cellulari di superficie su seta fantasia film di biomateriale substrati 7. Il sistema permette di analisi in profondità di interazioni cellulari nel tempo che può essere facilmente adottati per l&#39;alta velocità di raccolta dati. Questo è in gran parte attivata perché i film di seta in possesso di un certo numero di sintonizzabili proprietà biomateriale che può essere modificato per incidere direttamente la funzione delle cellule 8,9,12, tra cui: il controllo della superficie micro / nano-topografia di superficie 7; chimiche superficiali diversi attraverso la modificazione covalente o adsorbimento di molecole biologicamente attive 13; robusta mechproprietà anical 15,16: controllo delle idrofilia materiale / idrofobicità 16; caricamento di massa di composti biologici per il rilascio 4,8,17, e dissoluzione controllata / tassi di degradazione enzimatica attraverso il controllo della struttura secondaria (contenuto foglietto beta) 11,18,19 . La trasparenza dei film di seta viene raggiunto attraverso ricottura dei film per un periodo di tempo sotto vuoto in presenza di vapore acqueo 7,15. Questo approccio consente di elaborazione per la formazione di β-sheet struttura secondaria, favorendo l&#39;insolubilità del materiale in acqua pur consentendo diffrazione minimo di luce 15. La trasparenza dei film è fondamentale per consentire la diretta live-cell imaging che può essere assunto con un certo numero di modalità di imaging (cioè wide-field e fluorescenza) con qualsiasi numero di sistemi microscopio 12,20. Oltre a live-cella di imaging, seta film può essere facilmente rimosso dal thcultura del sistema e per consentire fissaggio e analisi supplementari. Così, la grande varietà di diretti valutazioni sperimentali che possono essere eseguiti su questo sistema sono applicabili ad un&#39;ampia varietà di cellule / tessuti fonti per molti settori tecnici 3,8,9,12,13,21. I time lapse risultati delle immagini illustrano come dati in tempo reale di coltura possono essere raccolti, e come esempio sono stati utilizzati per illustrare come la topografia delle superfici sulle interazioni cellulari. I risultati rappresentativi dimostrano come biomateriali pellicola seta può essere utilizzato per sostenere la crescita HCLE cultura, e sono modificabili a un certo numero di standard di proliferazione cellulare e saggi metabolici (Fig. 4). Inoltre, le colture sono fissati e trattati per la scansione di immagini di elettroni o altri protocolli (Fig. 3). Substrati di film di seta sono prodotte in laboratorio con l&#39;alta fedeltà, coerenza, e con costi relativamente bassi (Fig. 1). Ciò consente riproducibilitàlità sia configurazione cultura del sistema e dei risultati sperimentali. È stato dimostrato che l&#39;acqua-ricottura elaborazione produce un materiale stabile seta cinematografico all&#39;interno di coltura che ha definito velocità di degradazione in attesa della concentrazione di proteasi in soluzione 2,15,22. Come risultato di questi materiali possono essere utilizzati per lunghi periodi di tempo a lungo termine di coltura cellulare, o restare impiantato per mesi o anni a seconda della posizione fisiologica 8. Inoltre, studi recenti hanno dimostrato che sia la struttura della proteina e delle proprietà materiali di acqua ricotto film di seta sono coerenti da lotto a lotto che consente risultati della coltura riproducibili, come mostrato attraverso vari metodi di prova meccanici e biofisici 15,16. Inoltre, la superficie del materiale ha dimostrato grande fedeltà tra i lotti di film come indicato dalla SEM, micrscopy a forza atomica (AFM), e studi su colture cellulari {Lawrence: 2008wr, Omenetto: 2008tc, Bray: 2011kq} 7,23,24. Materiale stabillità e coerenza è un fattore importante per come la cellula rileverà il substrato coltura attraverso i percorsi meccanotrasduzione varie, e infine produrre un desiderato / indesiderato risposta cellulare 25,26. Standard Storiche substrati di coltura, come la plastica di coltura di tessuti trattati o di vetro, di fornire adeguati supporti per il fissaggio delle cellule. Tuttavia, questi materiali non sono modificabili per l&#39;ulteriore utilità in vivo. Può essere previsto che una seta cinematografico biomateriale potrebbe essere adattato in vitro, e una volta aspettative sperimentali sono stati raggiunti il film può essere personalizzato direttamente tradotto in un modello in vivo. Tale disegno accoppiamento tra in vitro e in vivo sperimentazione offre un grande vantaggio per tali biomateriali seta impiantabili oltre altri substrati che vengono abitualmente utilizzati in vitro.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Bozzoli di seta </td><td> Tajima Shoji Co., LTD. </td><td> NA </td></tr><tr><td> PDMS monomero e cross-linker </td><td> Momentive </td><td> RTV615A 01P </td></tr><tr><td> Carbonato di sodio </td><td> Sigma </td><td> S2127 </td></tr><tr><td> Bromuro di litio </td><td> Sigma </td><td> 213225 </td></tr><tr><td> Slide-A-Lyzer </td><td> Thermo Scientific </td><td> 66110 </td></tr><tr><td> Siringa da 1 ml </td><td> Becton-Dickenson </td><td> 309602 </td></tr><tr><td> Rondella in acciaio inox </td><td> Rondella Superior </td><td> 81610 </td></tr><tr><td> Piastra da 24 pozzetti </td><td> VWR </td><td> 353047 </td></tr></tbody></table>

seta film per la cultura del sistema in vitro analisi e progettazione biomaterial

Silk Film Culture System for in vitro Analysis and Biomaterial Design

Pellicole seta sono promettenti biomateriali a base di proteine ​​che possono essere fabbricate con alta fedeltà ed economico in un ambiente di 1,2 ricerche di laboratorio. Questi materiali sono desiderabili perché possiedono caratteristiche dimensionali e materiale altamente controllabile, sono biocompatibili e promuovere l&#39;adesione cellulare, possono essere modificate attraverso patterning topografico o chimicamente alterare la superficie, e può essere utilizzato come un deposito di molecole biologicamente attive per applicazioni di consegna droga 3-8. Inoltre, i film di seta sono relativamente facili da design personalizzato, può essere progettato per sciogliere in pochi minuti o degradare anni in vitro o in vivo, e si produce con il vantaggio di essere trasparente in natura e quindi particolarmente adatto per applicazioni di imaging 9 - 13. La metodologia sistema di coltura qui presentato rappresenta un approccio scalabile per la rapida valutazione della cella-seta superficie del filminterazioni. Di particolare interesse è l&#39;uso di pellicole superficie seta fantasia per studiare le differenze nella proliferazione cellulare e le risposte di cellule per l&#39;allineamento 12,14. Le colture seminate sono state coltivate su entrambi i micro-fantasia e il fondo piatto substrati di film di seta, e quindi valutate attraverso time-lapse a contrasto di fase imaging, microscopia elettronica a scansione, e la valutazione biochimica di attività metabolica e contenuto di acido nucleico. In sintesi, il film seta sistema di coltura in vitro offre una configurazione sperimentale personalizzabile adatto allo studio di interazioni di superficie cellulare su un substrato biomateriale, che possono poi essere ottimizzati e poi tradotto in modelli in vivo. Osservazioni che utilizzano il sistema cultura qui presentate sono attualmente utilizzate per aiutare in applicazioni che vanno dalle interazioni cellulari di base per la progettazione di dispositivi medici, e quindi sono rilevanti per una vasta gamma di settori biomedici.

Film di seta sono una nuova classe di biomateriali facilmente personalizzabili per una serie di applicazioni biomediche. Il sistema presentato pellicola sericoltura è altamente adattabile ad una varietà di<em&gt; In vitro</em&gt; Analisi. Questo sistema rappresenta un biomateriale offerta piattaforma di progettazione<em&gt; In vitro</emOttimizzazione&gt; prima della traduzione diretta<em&gt; In vivo</em&gt; Modelli.

Seta Film per la cultura del sistema In vitro Analisi e Progettazione Biomaterial

Le pellicole di seta sono biomateriali a base proteica promettenti, che possono essere fabbricati con alta fedeltà e in modo economico all'interno di un ambiente di laboratorio di ricerca...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di allestire un sistema di coltura in vitro di film di seta. Questo viene raggiunto innanzitutto producendo la soluzione di seta necessaria per ottenere il film desiderato. Il secondo passaggio consiste nel versare la soluzione di seta sulla superficie di stampo in gomma siliconica e lasciare asciugare il film.Il film di seta viene successivamente processato per la coltura cellulare. Successivamente, il sistema di coltura viene assemblato utilizzando una tecnica sterile. L'ultimo passaggio consiste nell'inoculare i film di seta con il tipo cellulare desiderato.Infine, le superfici di coltura a base di film di seta possono essere direttamente osservate al microscopio o sottoposte a saggio direttamente all'interno della coltura. Le piastre o i campioni possono essere rimossi per la fissazione e ulteriori lavorazioni, secondo necessità. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la coltura su plastica standard per colture cellulari, è che i biomateriali a base di film di seta sono altamente biocompatibili e possono essere facilmente trasferiti dai ricercatori a successive applicazioni in vivo e in vitro.Questo metodo può essere utilizzato per rispondere a domande fondamentali nei campi della biologia cellulare e dei biomateriali, ad esempio in che modo la topografia superficiale può essere sfruttata per influenzare la risposta cellulare? Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla risposta dell'epitelio corneale, può essere applicato anche ad altri sistemi in cui esperimenti iniziali in vitro possono fornire risposte preliminari a sistemi più complessi in vivo. Per iniziare la fabbricazione di stampi in gomma siliconica, procurarsi la superficie topografica desiderata per la colata. Per questa dimostrazione.Viene utilizzato un wafer standard in silicio inciso da 100 millimetri. Soluzione di resina e catalizzatore in PDMS in rapporto nove a uno, come forniti da un kit acquistato. Mescolare accuratamente le soluzioni per avviare il processo di polimerizzazione.Dopo aver posizionato la superficie della wafer di silicio all'interno di un contenitore per colata, pesare 4,5 grammi di soluzione di PDMS sulla wafer di silicio. Una volta che la soluzione di PDMS si è distribuita uniformemente sulla wafer, coprire la wafer con un coperchio di una piastra di Petri da 100 millimetri di diametro e porla sotto vuoto a 10 millimetri di mercurio per due ore. Per rimuovere le bolle d'aria dalla soluzione di PDMS, posizionare l'intero sistema di colata su una superficie piana in un forno a 60 gradi Celsius per tutta la notte; il giorno successivo, immergere la wafer di silicio con PDMS polimerizzato in un bagno di etanolo al 100%.Prima della rimozione del PDMS, iniziare a staccare il PDMS dalla wafer utilizzando una lametta per sollevare il bordo periferico con una pinzetta. Staccare delicatamente il PDMS all'interno del bagno di etanolo al 100%. Fare attenzione a non strappare il silicone; utilizzare un perforatore da 14 millimetri per ricavare singoli stampi in PDMS. Questo diametro è stato progettato per adattarsi ai pozzetti di una piastra a 24 pozzetti.Per preparare la soluzione di seta, portare a ebollizione due litri di acqua distillata. In un becher di vetro, tagliare cinque grammi di bozzoli del baco da seta Bombex mori in terzi, eliminando i bozzoli fortemente contaminati, come indicato dalla presenza eccessiva di particelle di insetto sulla superficie interna del bozzolo. Aggiungere lentamente 4,24 grammi di carbonato di sodio all'acqua bollente per evitare schiumature.Dopo che il carbonato di sodio si è sciolto, aggiungere i pezzi di bozzolo nell'acqua bollente e mescolare con un agitatore rivestito in teflon per 40 minuti. Dopo l'ebollizione, versare con attenzione l'acqua distillata nel lavandino e strizzare a mano l'estratto di seta per rimuovere l'acqua in eccesso. Successivamente, lavare l'estratto di seta ponendolo in un becher di plastica contenente un litro di acqua distillata e mescolando per 20 minuti.Ripetere questo processo di lavaggio due volte con acqua fresca. Strizzare a mano l&#39;estratto di seta lavato e collocare l&#39;estratto di fibra di seta all&#39;interno di una cappa chimica per farlo asciugare per un periodo di 12 ore. Il giorno successivo, pesare le fibre di seta essiccate, che tipicamente sono di circa 3,5 grammi.Quindi preparare una soluzione di bromuro di litio 9,3 molare per una soluzione al 20% peso/volume di seta seguendo il protocollo scritto. Dopo aver posizionato l'estratto di seta nel becher, versare la soluzione di bromuro di litio sulle fibre di seta.Assicurarsi che le fibre di seta siano immerse nella soluzione. Utilizzando una spatola da laboratorio, versare quindi la seta disciolta in un forno a 60 °C per quattro ore. Dopo quattro ore, utilizzare una siringa di dimensioni adeguate per prelevare 12 millilitri della soluzione di seta.Dopo aver posizionato un ago da 18 gauge, all'estremità della siringa, iniettare la soluzione in una cassetta per dialisi. Successivamente al riempimento della cassetta, aspirare con la siringa vuota l'aria rimanente all'interno della cassetta.Posizionare la cassetta per dialisi riempita in un litro di acqua distillata. Cambiare l'acqua dopo un'ora, quattro ore, otto ore e poi tre volte ogni 12 ore per un totale di sei cambi. Dopo la dialisi.Prelevare lentamente la soluzione di seta dalle cassette con la siringa e trasferirla in provette per centrifuga. Centrifugare la soluzione a 10.000 g e a quattro gradi Celsius per 20 minuti dopo la centrifugazione. Trasferire il soprannatante in una nuova provetta.Dopo aver ripetuto questo processo una seconda volta, pipettare due campioni da 0,5 millilitri di soluzione di seta in due piccole capsule di vetrino separate. Posizionare le capsule di vetrino all'interno di un forno asciutto a 60 gradi Celsius per 12 ore o fino a quando la soluzione di seta non si è asciugata. La soluzione di seta in bulk può essere conservata a quattro gradi Celsius.Pesare il film di seta solido rimanente di entrambi i campioni per misurare la densità di concentrazione della proteina della seta nella soluzione. Preparare le superfici di colata in PDMS utilizzando nastro trasparente per rimuovere qualsiasi polvere. Successivamente, pulire i substrati in PDMS immergendoli in etanolo al 100% per un minuto.Quindi rimuoverli e lasciarli asciugare. Per produrre un film spesso 50 micrometri, distribuire 70 microlitri di soluzione di seta all'8% su stampi in PDMS. Utilizzando uno strumento per la distribuzione del liquido, come la punta di una siringa da un millilitro, lasciare asciugare i film di seta scoperti su un banco pulito a flusso laminare, applicando una pressione di flusso d'aria di 150 pascal per un periodo di 90 minuti o fino a quando i film non sono completamente asciutti.Una volta asciutti i film, posizionare l'intero set di film, inclusi gli stampi in PDMS, in una camera contenente acqua e vapore acqueo per più di quattro ore per produrre un film insolubile in acqua. Solitamente si tratta di una camera disidratata vuota con acqua sul fondo del bacino, sottoposta a un vuoto di 25 kilopascal dopo aver rimosso i film di seta dalla camera con acqua e vapore acqueo. Lavorare in una cappa a flusso laminare per preparare un bagno di etanolo al 70% in una piastra di Petri da 35 millimetri.Quindi posizionare nel piatto qualsiasi substrato di controllo e anelli in acciaio inossidabile per almeno 10 minuti, al fine di sterilizzarli. Successivamente, rimuovere i film di seta dagli stampi in PDMS utilizzando pinzette. Immergerli nell'etanolo al 70% e posizionare ogni film in un singolo pozzetto di una piastra a 24 pozzetti precedentemente riempita con un millilitro di etanolo al 70%.Assicurarsi che il lato con il motivo sia rivolto verso l'alto per consentire l'adesione cellulare. Per garantire il successo di questo passaggio, è importante che i film di seta siano posizionati correttamente e in modo sterile all'interno delle pozzette. Posizionare gli anelli in acciaio inossidabile sopra i film di SILT e lasciarli incubare per 10 minuti. Dopo il lavaggio del film come indicato nel testo, preparare la linea cellulare per l'adesione come indicato. In questa dimostrazione, viene utilizzata una linea di cellule epiteliali limbali corneali umane come passaggio finale. Campionare 500 microlitri di sospensione HCLE per pozzetta, utilizzando tipicamente una densità di 10.000 cellule per centimetro quadrato, quindi procedere con il protocollo sperimentale desiderato. Qui sono mostrati micrografie al microscopio elettronico a scansione della linea cellulare HCLE, aderente a film di seta stampati e lisci al secondo giorno.In coltura HCLE, le colture continuano a proliferare fino alla confluenza su superfici strutturate e piane entro il giorno otto. In questa coltura, le cellule HCLE su film di seta strutturati e piani vengono confrontate con i substrati di controllo in vetro al giorno uno, giorno quattro e giorno otto. La quantificazione della coltura mediante contenuto di acido nucleico SQU e dati del saggio di attività metabolica MTT dimostra la vitalità delle cellule HCLE su entrambi i substrati di film di seta strutturati e piani rispetto alle superfici di controllo in vetro nel tempo.Qui viene mostrata un'immagine in contrasto di fase a intervalli di tempo di cellule HCLE che migrano su una superficie di film di seta stampata. Durante un periodo di 18 ore, le cellule sono state seminate a una densità di 10.000 cellule per centimetro quadrato e coltivate per due ore prima dell'acquisizione delle immagini; per confronto, viene mostrata un'immagine in contrasto di fase a intervalli di tempo di cellule HCLE che migrano su una superficie di controllo piatta durante un periodo di 18 ore nelle stesse condizioni di coltura. Una volta preparata la soluzione di seta e il modulo in silicone, questa tecnica può essere eseguita in otto ore se effettuata correttamente seguendo questa procedura.Altri metodi come la scansione mediante immunofluorescenza, la microscopia elettronica e tecniche di biologia molecolare come i blotting western e gli immunoassay, insieme a saggi chimici come la vitalità cellulare, la proliferazione cellulare e il tasso metabolico, possono essere valutati per comprendere meglio la risposta cellulare a questi diversi servizi di progettazione personalizzata. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come preparare una soluzione di seta, creare un modello personalizzato, film di seta e colture. Qualsiasi tipo cellulare su questi substrati.

silk-film-culture-system-for-in-vitro-analysis-and-biomaterial-design

Research

Ricerca

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingegneria

Riportiamo un dispositivo ed un nuovo metodo per studiare le cellule ed embrioni. celle singole sono proprio ordinati in array microcavità. Il loro confinamento 3D è un passo verso ambienti 3D incontrate in condizioni fisiologiche e permette l'orientamento organelli. Controllando la forma delle cellule, questa configurazione riduce al minimo la variabilità riportata nei test standard.

Ordinazione di singole cellule e singola embrioni in 3D confinamento: Un nuovo dispositivo per l&#39;alta Screening contenuti

La comprensione delle complesse azioni del cervello richiede strumenti di ricerca avanzati. Qui dimostriamo un nuovo modello ingegnerizzato in 3D basato su collagene di seta di tessuto neurale che assomiglia a un'architettura simile a un cervello. Il modello può essere utilizzato per studiare l'assemblaggio della rete neuronale, la guida assonale, le interazioni cellula-cellula e l'attività elettrica.

A base di seta-collagene Engineered Modello 3D del tessuto neurale polarizzata

Dimostriamo un metodo per generare surrogati 3D del cancro al seno, che possono essere coltivati utilizzando un sistema di bioreattori di perfusione per fornire ossigeno e sostanze nutritive. Dopo la crescita, i surrogati vengono fissati e trasformati in paraffina per la valutazione dei parametri di interesse. Viene spiegata la valutazione di uno di questi parametri, la densità cellulare.

Preparazione e analisi di<em&gt; In Vitro</em&gt; Tridimensionale carcinoma mammario mondo dei replicanti

Questo articolo descrive la metodologia dettagliata per preparare una matrice Multiplexed artificiale microambiente cellulare (MACME) per manipolazione di alto-rendimento di fisica e chimica di stecche che imita in vivo cellulare microambienti e a identificare l'ambiente cellulare ottima per le cellule staminali pluripotenti umane (hPSCs) con l'analisi di singole cellule.

Fabbricazione di una matrice di multiplex artificiale microambiente cellulare

Un protocollo per il processo di fabbricazione di strutture in composito polimerico pellicola sottile che possiede di diversi giovani moduli o spessori è presentato. Film sono prodotti per studi su colture cellulari avanzati o come adesivi di pelle.

Thin Film composito silicone elastomeri per colture cellulari e applicazioni della pelle: produzione e caratterizzazione

Questo documento presenta un protocollo di fabbricazione per un nuovo tipo di substrato di coltura con centinaia di microcontenitori per mm2, in cui gli organoidi possono essere coltivati e osservati utilizzando la microscopia ad alta risoluzione. Anche i protocolli di semina cellulare e immunocolorazione sono dettagliati.

Una piattaforma ad alto rendimento per la coltura e l'imaging 3D di organoidi

Qui, descriviamo in dettaglio un protocollo semplice, veloce e affidabile di citometria a flusso multiparametrica e tumor-on-a-chip per monitorare e caratterizzare le fasi che costituiscono il ciclo cancro-immunità. In effetti, una comprensione approfondita delle interazioni tra cancro e cellule immunitarie fornisce informazioni critiche per superare in astuzia i tumori e guidare l'assistenza clinica.

Sistemi in vitro di co-coltura per riprodurre il ciclo cancro-immunità

Questo protocollo descrive le metodologie per stabilire un modello di impianto embrionale in vitro semplice ed efficiente per valutare le molecole rilevanti che influenzano il processo di impianto dell'embrione.

Istituzione di un modello di impianto embrionale in vitro

Gli inserti per colture tissutali con membrane in plastica sono lo standard d'oro nei laboratori di coltura cellulare come supporti permeabili per stabilire strati cellulari e modelli di tessuti barriera. Qui, presentiamo un metodo semplice per sostituire la membrana di plastica con una membrana biologicamente più rilevante costituita da una proteina di seta di ragno funzionalizzata ricombinante.

Mimic della membrana basale nanofibrillare in seta di ragno funzionalizzata ricombinante in inserti di coltura tissutale su misura

Un nuovo metodo per l'incapsulamento follicolo ovarico in una rete di fibrina-alginato 3D compenetrano è descritto. Questo sistema combina un sostegno strutturale con degradazione proteolitica per sostenere lo sviluppo dei follicoli immaturi per la produzione di ovociti maturi. Questo metodo può essere applicato agli aggregati di coltura cellulare per mantenere la cellula-cellula contatti senza limitare l'espansione.

Un metodo per l&#39;incapsulamento follicolo ovarico e la cultura in un proteoliticamente degradabile 3 Sistema dimensionale

Impara a preparare film di seta per colture cellulari in vitro. Questo metodo versatile consente di studiare le risposte cellulari e ottimizzare i biomateriali prima delle applicazioni in vivo.

Seta Film per la cultura del sistema In vitro Analisi e Progettazione Biomaterial

Esplora altri video