17 maggio 2012
Qui, descriviamo una procedura rapida, semplice e affidabile per determinare la temperatura minima alla quale i ratti o topi mostrare un comportamento nocifensive, Ie Il Soglia termica nocicettiva (TNT). Questo metodo si applica uno stimolo lento aumento termico permettendo stima preciso e riproducibile di TNTs con minimo eventuali sollecitazioni agli animali.
L'obiettivo generale di questa procedura è determinare la soglia nocicettiva termica dei ratti di controllo e diabetici. Il primo passo è posizionare un animale sulla piastra riscaldante incrementale e sul misuratore di analgesia. Successivamente, la temperatura della piastra riscaldante viene gradualmente aumentata mentre la superficie si riscalda.
L'animale viene osservato per non avere comportamenti offensivi. Quando si osserva questo comportamento, il riscaldamento viene interrotto e viene registrata la temperatura della piastra in quel momento. In definitiva, si possono ottenere risultati che mostrano variazioni della soglia nocicettiva termica in animali trattati con analgesici o affetti da neuropatia diabetica dolorosa.
Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come la piastra riscaldante, che normalmente è impostata come temperatura di super soglia, è che i nostri metodi aumentano gradualmente la temperatura della piastra, consentendo la determinazione accurata della soglia nocicettiva termica. La soglia nocicettiva termica o TNT viene determinata utilizzando l'analgesia incrementale con piastra riscaldante, il misuratore o IH pam. I componenti di questo sistema includono una camera di osservazione in plexiglass, una piastra in alluminio a temperatura controllata, una tastiera utilizzata per la programmazione e un interruttore a pedale per il controllo remoto dell'unità.
I dati vengono raccolti utilizzando un software personalizzato su un computer nelle vicinanze. In alternativa, le copie cartacee possono essere stampate utilizzando una porta seriale situata sull'unità. Posiziona uno specchio dietro la camera in plexiglass per aumentare la visibilità del comportamento dell'animale.
Quindi, impostare le velocità di riscaldamento desiderate, nonché le temperature di standby iniziale e di interruzione finale. Premere l'interruttore a pedale per avviare e arrestare il sistema. Verificare che le temperature di standby iniziale e di interruzione finale siano registrate, nonché il tempo necessario per raggiungere la temperatura finale.
Se lo desidera, lo sperimentatore può testare il sistema su se stesso. Ritirare la mano dalla placca metallica al momento del dolore. La percezione non deve causare danni alla pelle, né produrre alcun disagio successivo.
Inizia l'acclimatazione la sera prima posizionando le gabbie sulla panca dove si svolgeranno i test. Due ore prima del test. Accendere la padella IH per familiarizzare gli animali con il rumore di fondo dell'unità.
A questo punto, il sistema può essere configurato e testato come visto in precedenza. Dopo che gli animali si sono acclimatati all'ambiente, posiziona delicatamente un topo nella camera di plexiglass sopra la superficie calda. Lascia che l'animale esplori la camera per alcuni minuti.
Inizia il test. Una volta che l'animale sembra a suo agio per iniziare la prova, premere l'interruttore a pedale per iniziare a riscaldare la piastra. Osserva il comportamento dell'animale mentre la piastra si riscalda.
In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché l'identificazione del comportamento offensivo di massa non è sempre semplice e richiede pratica. Nessun comportamento offensivo è caratterizzato dal leccare, scuotere o sollevare entrambi i pori posteriori. È utile notare che il primo comportamento osservato può essere il leccamento dei quattro pori, seguito da una reazione dei pori posteriori.
Quando si osserva un comportamento molto offensivo, premere l'interruttore a pedale per terminare la prova e riportare l'animale nella sua gabbia di casa. La temperatura che evoca questo comportamento è considerata come la soglia nocicettiva termica o TNT dell'animale di controllo. L'unità viene pulita e il test viene ripetuto per il prossimo animale visto.
Ecco le soglie nocicettive termiche di ratti e topi giovani adulti normali. I dati qui mostrano che il TNT dei ratti non variava quando sono stati testati per un periodo di quattro giorni. Allo stesso modo, il TNT dei topi era coerente tra le diverse età.
In questo esempio, la TN TS di ratti diabetici STZ giovani adulti è stata misurata ripetutamente. Una costante diminuzione delle soglie nocicettive termiche può essere osservata a partire da due settimane dopo l'induzione del diabete. Qui, l'IH pam è stato utilizzato per testare le proprietà antinocicettive acute del composto analgesico.
A, il composto ha prodotto un lieve effetto analgesico negli animali di controllo rispetto a quelli che ricevono i veicoli. Tuttavia, l'analgesia era più pronunciata negli animali diabetici che ricevevano il composto rispetto ai controlli del veicolo. Durante il tentativo di questa procedura, è molto importante ricordarsi di monitorare continuamente il comportamento dell'animale, in particolare quelli che si verificano vicino al punto T dell'animale.
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Questo articolo descrive una procedura semplice e affidabile per determinare la soglia nocicettiva termica (TNT) in ratti e topi. Il metodo prevede l'applicazione di uno stimolo termico progressivamente crescente per stimare con precisione la TNT con un minimo di stress per gli animali.
La misurazione accurata della soglia termica alla nocicezione (TNT) consente una valutazione oggettiva della sensibilità al dolore in modelli preclinici di neuropatia diabetica, supportando la validazione degli obiettivi terapeutici e la valutazione dell'efficacia degli analgesici. La riproducibilità del metodo e la sua sensibilità agli stati di iperalgesia forniscono un'attendibilità predittiva per ridurre i rischi associati ai candidati analgesici prima di procedere a studi di fase avanzata. Questo approccio affronta una sfida fondamentale nella ricerca sul dolore, offrendo un endpoint quantificabile e clinicamente rilevante per la valutazione meccanicistica e terapeutica.
Il metodo si inserisce nel percorso di scoperta che va dalla validazione del bersaglio all'identificazione del capostazione fino ai test di efficacia preclinica, in particolare per programmi sul sistema nervoso centrale e analgesici focalizzati sul dolore neuropatico.