Name: Preparazione del tessuto corneale dei donatori per Keratoplasty Endothelial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Impara la preparazione del tessuto corneale lamellare per trapianto endoteliale utilizzando il microcheratomo meccanico. Questa tecnica chirurgica garantisce innesti sottili e simmetrici con minima perdita di cellule endoteliali.

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1. Setup: una tecnica asettica 11 <ol><li> Accendere cappa a flusso laminare (LFH). </li><li> Accendere l&#39;unità di controllo Azoto. Assicurarsi che il tubo sia collegato tra l&#39;unità di console e il serbatoio di azoto. Girare a gas. Regolazione del gas deve essere impostata a 50-60 PSI su serbatoio regolatore. Pressione turbina su unità dovrebbe leggere da 3,3 a 3,4 bar. </li><li> Premere il pulsante di prova. Pressione atmosferica leggerà nei 700 e pompe 1 e 2 dovrebbe essere inferiore a 200. L&#39;unità emette un segnale acustico quando il test è completo. Maschera di Don con la protezione degli occhi, ove applicabile, e cap. Lavare le mani e indossano guanti non sterili. Posizionare kit sterili involucri all&#39;interno LFH e aperto per stabilire campo sterile. </li><li> Collocare una tazza sterile medicina e una vaschetta di plastica sterile con garza sterile accanto al campo stabilito sterile. Versare l&#39;alcool isopropilico sterile nella coppa medicina. Pulire la sonda pachimetria con tampone imbevuto di alcol / pad e sonda posto, punta verso il basso, nella coppa medicina. La punta della sonda deve immergere in alcol isopropilico per 10 minuti. Dopo che la sonda pachimetria è in ammollo per 10 minuti, sciacquare la sonda con acqua sterile da siringa preriempita per rimuovere l&#39;alcol e la sonda posto nella bacinella di plastica. </li><li> Usando una tecnica asettica, aprire e rilasciare gli elementi sterili (lama, guanti sterili, e corneali camere di visualizzazione) sul campo sterile se non è già parte del pre-made pack. </li><li> Ottenere tessuto corneale in mezzo di conservazione e posto all&#39;interno LFH (Figura 2). </li><li> Aprire flaconcino (s) e smaltire il coperchio (s) in un contenitore adeguato a rischio biologico. Gettare i guanti non sterili. </li><li> Munirsi di guanti sterili. Posizionare preconfezionata bacinella di plastica al lato del campo in cui si trova pachimetro. Collegare linea di infusione rubinetto e posto fine spike della linea di infusione esterna della cappa garantire la linea in modo tale da impedire la linea esterna della cappa dal rientrando nel cappuccio e toccando il campo sterile. </li><li> Eseguire il trasferimento del tessuto corneale. Delicatamente versare il tessuto e mezzo, in un SIngle movimento, dal flacone esistente in una camera sterile visualizzazione. Essere sicuri di mantenere il lato endoteliale up. Mettere il coperchio sulla camera. Tenere camere contenenti tessuti e dei media sul campo sterile. Estrarre la fiala (s) da LFH. Rimuovere e gettare i guanti sterili. </li><li> Spike soluzione salina bilanciata (BSS) bottiglia con linea di infusione. Hang bottiglia di sterili BSS circa quattro metri dalla superficie di lavoro. </li><li> Aprire due paia di guanti sterili e camice sterile con un asciugamano. </li><li> Eseguire sei minuti scrub chirurgico ed asciugarsi le mani. </li><li> Indossare camice sterile, allora entrambe le paia di guanti sterili. </li><li> Aprire le scatole di strumenti e posizionare il contenuto in campo sterile. </li><li> Dispensare 10-20 cc di soluzione BSS in metallo bacino o di coppa medicina. Riempire la pipetta sterile con soluzione BSS. Collegate rubinetto e la linea di infusione alla porta di infusione della camera anteriore e lavare con BSS modo che una piccola quantità è visibile sulla parte superiore del pistone. </li><li> Posizione della Camera artificiale LFH iltop di garza. Pistone inferiore ruotando la ghiera di serraggio innesto in senso antiorario. </li></ol> 2. Procedura <ol><li> Utilizzando pinze, afferrare delicatamente cornea da parte di RIM sclerale. Aperto rubinetto per lavare con sistema BSS mentre accuratamente centraggio cornea sulla sommità del pistone con il lato endoteliale basso. Se le bolle sono visibili sotto la cornea, infondendo continuare con BSS e spostando leggermente la cornea per rimuoverli. Interrompere infusione una volta bolle d&#39;aria vengono rimossi. Assicurarsi che la cornea sia centrato sul pistone (Figura 3a). </li><li> Posizione coperchio della camera anteriore, anello di bloccaggio di base in modo che le linguette della copertura in forma negli spazi aperti sulla base. Bloccare coprire nella base, ruotando in senso orario di copertura 15 °. Sollevare il pistone e serrare completamente (Figura 3b). </li><li> Con un dito guantato sterile, toccare top della cornea per garantire che vi sia una pressione sufficiente per eseguire la procedura. </li><li> Controllare pachimetria ponendo la sonda sulla superficie of cornea per ottenere lettura di spessore (Figura 4). La deviazione standard deve essere inferiore a 10. In caso contrario, riprendere la misura. Con la mano guantata sterile che non è stato utilizzato per eseguire la pachimetria, passare il tubo turbina a mano che eseguito pachimetria e avvitare il tubo turbina nell&#39;unità di controllo. Far assistere record di lettura tecnico pachimetria. </li><li> Rimuovere i guanti contaminati. </li><li> Utilizzando sterile pennarello, tracciare una linea di 4 millimetri dal limbus verso il centro della cornea (o non segnare se il chirurgo preferisce non di marcatura). Utilizzare pipetta per posizionare cinque gocce di BSS sopra della cornea. </li><li> Salvo indicazioni specifiche fornite dal chirurgo, la testa di taglio 300 um verranno utilizzati se il pre-taglio misurazione pachimetria è inferiore a 600 um. Se più di 600 um, la testa di taglio 350 um verrà utilizzato. </li><li> Con filettatura rivolta verso di voi e il numero rivolto verso l&#39;alto, caricare lama nel lato destro della testa microcheratomo, ha prima estremità, evitando il contatto with la lama. </li><li> Tenendo testa a ogni lato, testa della vite sulla turbina. Stringere la camera artificiale con le dita. </li><li> Avvitare sul tubo turbina a turbina. </li><li> Testare l&#39;oscillazione lama premendo il pedale vuoto una volta, sommergendo la testa di taglio in acqua sterile e l&#39;impulso di turbina per 5 secondi. </li><li> Stringere pistone. </li><li> Microcheratomo posto sulla base con supporto di montaggio e la posizione a cinque ore. Premere e tenere premuto il pedale della turbina ad oscillare lama (figura 5a). </li><li> Utilizzo di indice e pollice, premuto a metà strada microcheratomo tra la base e la sommità della turbina. Ruotare il polso per fare un liscio, persino tagliare e in tutta la cornea. Turbine di rilascio del pedale e sollevare microcheratomo di getto unità. Premere pedale vuoto per spegnere vuoto (figura 5b). </li><li> Indossare un guanto sterile e ricontrollare la lettura pachimetria corneale dopo il tappo viene rimosso mettendo sonda sulla superficie della cornea per ottenere la seconda lettura dello spessore di essereconsapevoli del fatto che il tessuto è molto sottile e facilmente danneggiabili. Rimuovere guanti contaminati. Avere assistenza tecnico in seconda lettura pachimetria record. </li><li> Utilizzando sterile pennarello, inserire un segno di se richiesto dal chirurgo, il mid-periferica bordo del letto stromale residua nella camera artificiale. Mettete qualche goccia di sterile BSS sul letto stromale residua. </li><li> Rimuovere il tappo anteriore della cornea microcheratomo (Figura 6) e sostituirlo sulla cornea prima di rimuovere dalla cornea artificiale camera anteriore. Cap dovrebbe essere centrata sulla cornea periferica utilizzando la marcatura di allineare correttamente il tappo, se applicabile. Usa lancia tampone per riposizionare delicatamente il tappo sulla cornea. Usa lancia fresca per assorbire eventuali BSS sotto tappo anteriore. </li><li> Apri rubinetto, girare camera upside-down ed inferiore del pistone abbastanza lento per evitare la deformazione della cornea. Sblocca base e consentire la pressione dal flusso BSS per spingere la coppa artificiale camera dalla base. Con una pinza, tirare delicatamente unot il bordo corneale alle 9, 12 e ore 3 posizioni per allentare dalla tazza. Una volta sciolto, usare una pinza nella posizione delle ore 12 per rimuovere cornea. Posizionare la cornea nella camera di visualizzazione, il lato endoteliale (Figura 7). Mettere il coperchio sulla camera di visione. Rimuovere guanto sterile. </li><li> Stringere la visualizzazione coperchio della camera. </li><li> Eseguire una valutazione post-cut lampada a fessura e la microscopia speculare dei risultati cornea e record. </li><li> Luogo camera (s) nella apposita sezione del frigorifero. </li><li> Pacchetto per il trasporto di chirurgo (Figura 8). </li></ol> 3. Risultati rappresentativi La corretta dissezione microcheratomo meccanico dei risultati cornea del donatore liscia, uniforme tessuto lamellare della cornea del donatore. Questo è dimostrato da una tomografia di coerenza ottica (OCT) immagine della cornea in sezione trasversale (Figura 9). La finale del tessuto corneale posteriore deve essere di spessore adeguato, come misurato dalla pachymetry. Negli ultimi 6 mesi presso la Banca Eye Michigan, la media di pre-elaborazione spessore corneale era 558 micron, e post-elaborazione spessore del tessuto corneale posteriore era 158 micron. Ottantasette per cento del microcheratomo-sezionato tessuto del donatore misurata tra 100-200 micron, 10,9%, misurato&gt; 200 micron, e 2,1%, misurato &lt;100 micron. Il tessuto corneale posteriore deve mantenere alta densità delle cellule endoteliali (ECD) per fornire un miglioramento della funzione endoteliale al ricevente il trapianto. Microscopia speculare viene utilizzato per misurare ECD. Negli ultimi 6 mesi, tutto il tessuto corneale considerato ammissibile cheratoplastica endoteliale dal Michigan Eye Bank ha avuto un ECD di&gt; 2200 cellule / mm 2. Il novantanove per cento del tessuto pretagliato DSAEK avuto un post-processing ECD&gt; 2400 cellule / mm 2, e il 19% ha avuto un ECD&gt; 3000 cellule / mm 2. Il cambiamento medio in pre-al post-processing ECD è stato trascurabile al 1,2% (p = 0,0003, abbinato a due code t-test).Le complicanze che possono verificarsi durante la procedura comprendono la perdita di pressione, dissezione asimmetrica, e il rientro del tessuto significativa (con conseguente perdita di cellule endoteliale corneale). Dissezione improprio può anche provocare la perforazione del tessuto. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig1.jpg" /> Figura 1. Schema generale di preparazione dei tessuti della cornea per Endothelial Keratoplasty figure 1a a 1e sono cross-section rappresentazioni della preparazione cornea del donatore. Figure 1F 1i sono cross-section rappresentazioni della cornea del ricevente il trapianto durante l&#39;intervento chirurgico DSAEK. <ol class="lalpha"><li> La cornea del donatore viene montato su una camera anteriore artificiale e sezionato con la testa microcheratomo. </li><li> Dopo la dissezione dei tessuti, i due lamelle sono separati, ma la lamella anteriore (cap) è posizionato sul letto è rimasto corneale per il trasporto al chirurgo. </li><li> Nelsala operatoria, il chirurgo utilizza un trapano per tagliare il tessuto corneale centrale verticalmente attraverso lamella anteriore che posteriore. </li><li> Dopo il taglio trapano, la cornea periferica viene rimosso dal campo. </li><li> La lamella posteriore viene delicatamente rimosso dalla lamella anteriore con una spatola. Il donatore lamella posteriore (tessuto DSAEK) sostituisce la parte malata della cornea ricevente (1i). </li><li> Il paziente ha una cornea malata posteriore da rimuovere. </li><li> La cornea malata posteriore è segnato con uno strumento intraoculare (reverse Sinsky gancio) in un cerchio di grande diametro. </li><li> Dopo aver segnato la cornea malata, la membrana posteriore corneale viene rimosso. </li><li> Il donatore lamella posteriore (tessuto DSAEK) si trova nell&#39;occhio del destinatario. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig2.jpg" /> Figura 2. Tessuto corneale in Media. Tessuto corneale è in mezzo di conservazione dopo harvesting dal donatore. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig3.jpg" /> Figura 3. Tessuto corneale in camera anteriore artificiale. <ol class="lalpha"><li> Tessuto corneale viene montato sul artificiale anteriore anello di base prima di bloccaggio camera o la dissezione dei tessuti. </li><li> Tessuto corneale è montato su artificiale camera anteriore con anello di bloccaggio base di sigillato sui tessuti. </li></ol><img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig4.jpg" /> Figura 4. Spessore del tessuto corneale Controllare. Lo spessore corneale viene controllata mediante pachimetria sonda ecografica sulla superficie della cornea. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig5.jpg" /> Figura 5. Dissection tessuto corneale. <ol class="lalpha"><li> Lama microcheratomo viene posizionato sulla base, con supporto di montaggio e la posizione alle cinque. </li><li> Microcheratomoviene fatto passare attraverso cornea per rendere la dissezione lamellare. </li></ol><img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig6.jpg" /> Figura 6. Cap anteriore della cornea dopo la dissezione. La calotta cornea anteriore è libero dopo la dissezione microcheratomo è completa. <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig7.jpg" /> Figura 7. Dissected cornea in Visualizzazione Sezione. Dopo dissezione è completato, la cornea viene restituito alla camera di osservazione per il trasporto. <img alt="Figura 8" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig8.jpg" /> Figura 8. Cornea in Packaging per il trasporto. La cornea nella camera di osservazione viene poi accuratamente imballati per il trasporto al chirurgo. <img alt="Figura 9" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig9.jpg" /> Figura 9. Aspetto ottobre della cornea. L&#39;ottobre delfinale cornea sezionato (in sezione) mostra che la cornea è divisa in due metà. L&#39;interfaccia è più intensamente riflettente rispetto al tessuto circostante, come indicato dalla freccia.

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</ol>

Drs. Woodward e Shtein non hanno nulla da rivelare. Mr. Mavin e il signor Tito sono dipendenti delle banche degli occhi Midwest.

Lo strato più interno della cornea, l&#39;endotelio, mantiene la chiarezza ottica della cornea mantenendo disidratazione corneale. Numerosi stati patologici in particolare influenzano la salute e la vitalità dell&#39;endotelio corneale compresi distrofie, infezioni, processi infiammatori e degenerazioni. Fino a poco tempo, il trapianto di cornea per sostituire malato endotelio corneale necessario trapianto pieno spessore della cornea. Negli ultimi dieci anni, la sostituzione mirata della cornea posteriore da trapianto di cornea a spessore parziale, come la chirurgia DSAEK, è stato in grado di raggiungere lo stesso scopo con un tempo di recupero più breve. Indipendentemente dalla tecnica, tessuti trapiantati devono mantenere un endotelio corneale sano per mantenere la chiarezza ottica nella cornea trapiantata, di conseguenza, tutte le tecniche di lavorazione del tessuto devono passaggi aggiuntivi per proteggere l&#39;endotelio corneale. Automated dissezione microcheratomo è attualmente °di serie e per la preparazione del tessuto corneale per cheratoplastica endoteliale. L&#39;utilizzo del microcheratomo ha dimostrato di diminuire la perforazione dei tessuti del donatore e accelerare il recupero visivo rispetto alla dissezione manuale 5. Quando DSAEK stato inizialmente introdotto, alcuni chirurghi acquistato attrezzature e microcheratomo eseguita dissezione lamellare donatore in sala operatoria all&#39;inizio della chirurgia. Se preparazione del tessuto non, la chirurgia dovrebbe essere cancellati causando inconvenienti e costi per il paziente e il chirurgo. Nel 2006 le banche degli occhi ha cominciato ad effettuare la dissezione microcheratomo &quot;off site&quot; in condizioni controllate in laboratorio banca degli occhi un giorno prima dell&#39;intervento 12. Se la preparazione del tessuto non riesce in questa impostazione, c&#39;è tempo per eseguire un&#39;altra dissezione di tessuto fresco. Dissezione microcheratomo del donatore posteriore tessuto lamellare della cornea richiede tecnica dolce e precisa per ridurre al minimo le complicanze. La cornea deve essere posizionato gently sulla camera anteriore artificiale (AAC) per evitare danni alle delicate cellule endoteliali. Una volta che la cornea è montato e allineato sul AAC, l&#39;anello di bloccaggio deve essere posizionata e regolata per una tenuta perfetta per mantenere la pressione all&#39;interno della camera alta e diminuire le probabilità di collasso dei tessuti durante la dissezione microcheratomo. Per garantire dissezione uniforme, la testa microcheratomo dovrebbe essere ruotato in una costante, in modo agevole. Dopo la dissezione, il tessuto deve di nuovo essere maneggiato con cura per ridurre al minimo i danni delle cellule endoteliali. Inoltre, è critico per confermare che il taglio lamellare è centrato e completo per garantire che la lamella posteriore sarà adatto per l&#39;uso in chirurgia 13. Perforazione corneale del donatore è una complicazione terribile di questa procedura, ma diventa meno frequente con l&#39;esperienza. Se perforazioni ripetute verificarsi durante passaggi microcheratomo, è importante controllare i passaggi multipli nella procedura. Il granoEA ha bisogno di essere correttamente montato e allineato sul AAC. La tenuta stagna e la pressione alta deve essere ottenuta prima del passaggio microcheratomo e mantenuto durante tutta la procedura. In occasione, congiuntiva residua presente sul bordo sclera e deve essere sezionato off prima del montaggio. La lama microcheratomo deve essere forte e senza tacche. Il corretto spessore testa microcheratomo dovrebbe essere scelto sulla base della stima dello spessore corneale. La testa deve essere microcheratomo oscilla correttamente prima al passo. Con ulteriori problemi con questa tecnica, consultare il fornitore di microcheratomo per verificare che tutte le apparecchiature funziona correttamente. Anche quando ha funzionato alla perfezione, ci sono alcune limitazioni a questa tecnica. Microcheratomo teste sono disponibili per tagliare il tessuto corneale in vari spessori, tuttavia, il rapporto della testa microcheratomo allo spessore del tessuto finale è impreciso con la stessa testa che fornisce una vasta gamma di tessuti spessori finali7. Inoltre, un rilevante sussiste curva di apprendimento e le complicanze in corso di preparazione sono più frequenti per i nuovi utenti. Esecuzione della dissezione lamellare nella cornice banca degli occhi consente ai tecnici qualificati che svolgono questa procedura più volte al giorno per ottimizzare la loro tecnica, riducendo al minimo le complicazioni dovute a inesperienza. Modifiche della tecnica per microcheratomo-assistita dissezione corneale per cheratoplastica endoteliale esiste. Alcuni preferiscono utilizzare materiale viscoelastico o di supporti di memorizzazione corneali piuttosto che una soluzione salina bilanciata sotto il bottone corneale sulla camera anteriore artificiale con l&#39;intento di fornire una maggiore protezione per l&#39;endotelio corneale. Ci sono anche variazioni del metodo per determinare la posizione in cui l&#39;incisione microcheratomo deve essere iniziato. Banche degli occhi e differenti chirurghi corneali possono avere preferenze particolari di come la cornea è contrassegnato per l&#39;identificazione deiil tappo anteriore corneale o posteriore orientamento lamellare. Va notato che i costruttori rendano apparecchiatura simile a quello usato in questo protocollo. Le istruzioni del fabbricante particolare dovrebbe essere seguita con qualsiasi apparecchio viene utilizzato. Affidabile preparazione banca degli occhi di sezionato tessuto corneale per la chirurgia DSAEK sia stata vantaggiosa per la diffusa accettazione di questa tecnica chirurgica relativamente nuova. Una volta diventato chirurghi fiducia nelle banche degli occhi che effettuano il &quot;primo passo&quot; nel trapianto di cornea - vale a dire la preparazione dei tessuti, molti limiti pratici per DSAEK sono stati alleviati. Banche degli occhi sono stati in grado di tenere in modo affidabile con la domanda di tessuti trattati con alimentazione sicura, efficace e tempestiva del tessuto del donatore. Tessuti di alta qualità DSAEK possono ora essere ordinati in anticipo e sala tempo di funzionamento e le complicanze di preparazione dei tessuti sono diminuite 9, 14-15. Questo protocollo descrive Preparatisu di innesti DSAEK dal punto di vista del trattamento banca degli occhi di tessuto corneale del donatore, tuttavia, questa tecnica è direttamente applicabile ai chirurghi interessati a preparare il proprio tessuto lamellare della cornea del donatore, nonché coloro che sono interessati nello svolgimento di studi di laboratorio o clinici basati sulla cornea lamellare trapianto. Direzioni future per la preparazione della cornea lamellare comprendono l&#39;uso del laser a femtosecondi per la lavorazione dei tessuti, la creazione di &quot;ultra-thin&quot; DSAEK tessuto corneale, o la preparazione di rotoli corneali endoteliali di membrana di Descemet cheratoplastica endoteliale (DMEK) l&#39;intervento chirurgico. Cheratoplastica endoteliale è un campo chirurgico in evoluzione e il rapporto simbiotico tra la banca degli occhi e chirurgo corneale continuerà a cambiare le tecniche chirurgiche sono ottimizzate.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del Attrezzature </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Microcheratomo </td><td> Moria </td><td> 1021174 </td></tr><tr><td> Artificial base della camera anteriore </td><td> Moria </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> Artificial cap camera anteriore </td><td> Moria </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> Microcheratomo Testa 300 </td><td> Moria </td><td> O304 </td></tr><tr><td> Microcheratomo Testa 350 </td><td> Moria </td><td> N791 </td></tr><tr><td> Console </td><td> Moria </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

preparazione del tessuto corneale dei donatori per keratoplasty endothelial

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

Negli ultimi dieci anni, le tecniche di trapianto corneale chirurgiche hanno subito cambiamenti rivoluzionari 1,2. Fin dalla sua istituzione, tradizionale trapianto corneale a tutto spessore è stato il trattamento per ridare la vista in quelli limitati da una malattia della cornea. Alcuni svantaggi di questo approccio includono un elevato grado di post-operatorio astigmatismo, mancanza di rifrazione risultato prevedibile, e disturbo alla superficie oculare. Lo sviluppo di cheratoplastica endoteliale strippaggio Descemet (DSEK), trapiantando solo il posteriore stroma corneale, membrana di Descemet ed endotelio, ha cambiato radicalmente il trattamento di malattia corneale endoteliale. DSEK viene eseguito attraverso un&#39;incisione più piccola, questa tecnica evita l&#39;intervento chirurgico &#39;cielo aperto&#39; con il rischio di emorragia o di espulsione, diminuisce l&#39;incidenza di deiscenza della ferita post-operatoria, riduce gli esiti imprevedibili di rifrazione, e può diminuire il tasso del rigetto del trapianto 3-6. ove_content &quot;&gt; Inizialmente, donatore di dissezione cornea posteriore lamellare DSEK è stata eseguita manualmente 1 risultante di spessore innesto variabile e danni al delicato tessuto corneale endoteliale durante la lavorazione del tessuto. Automated dissezione lamellare (Descemet strippaggio cheratoplastica automatizzato endoteliale, DSAEK) è stato sviluppato per affrontare questi questioni. dissezione Automated utilizza la stessa tecnologia di creazione del flap LASIK corneale con una lama microcheratomo meccanico che aiuta a creare innesti di tessuto uniforme e sottile per la chirurgia DSAEK con una minima perdita di cellule endoteliali della cornea nella lavorazione dei tessuti. Banche degli occhi hanno fornito pieno spessore cornee per trapianto chirurgico per molti anni. Nel 2006, le banche degli occhi ha cominciato a sviluppare metodologie per la fornitura di pretagliate tessuto corneale per cheratoplastica endoteliale. Con l&#39;ingresso di chirurghi corneali, banche degli occhi hanno sviluppato protocolli approfonditi per preparare in modo sicuro ed efficace posteriore f tessuto lamellareDSAEK o chirurgia. Questo può essere eseguita prima dell&#39;intervento alla banca degli occhi. La ricerca mostra alcuna differenza significativa in termini di qualità dei risultati dei tessuti 7 o 8,9 paziente utilizzando banca dei tessuti dell&#39;occhio pretagliato rispetto chirurgo preparato dei tessuti per la chirurgia DSAEK. Per la maggior parte dei chirurghi corneali, la disponibilità di tessuto corneale pretaglio DSAEK risparmia tempo e denaro 10, e riduce la sollecitazione di eseguire la dissezione corneale donatore in sala operatoria. In parte a causa della capacità delle banche degli occhi per fornire alta qualità lamellare posteriore della cornea in modo tempestivo, DSAEK è diventato lo standard di cura per la gestione chirurgica della patologia endoteliale corneale. La procedura che stiamo descrivendo è la preparazione della cornea posteriore lamellare alla banca degli occhi per il trapianto in DSAEK chirurgia (Figura 1).

Endoteliale trapianto di cornea è una tecnica chirurgica per il trattamento di patologie corneali posteriori. Dissezione microcheratomo meccanico per preparare risultati in tessuto più sottili, innesti più simmetrici con minore perdita di cellule endoteliali ed i risultati migliori. Dissezioni può essere effettuata presso la banca degli occhi prima dell&#39;intervento trapianto di cornea.

Preparazione del tessuto corneale dei donatori per Keratoplasty Endothelial

Negli ultimi dieci anni, le tecniche chirurgiche di trapianto di cornea hanno subito cambiamenti rivoluzionari1,2. Fin dalla sua introduzione, il tradizionale trapianto a tutto spessore...

L'obiettivo generale di questa procedura è produrre in modo costante tessuto lamellare della cornea adatto al trapianto. Questo si ottiene innanzitutto creando un campo sterile all'interno della cappa a flusso laminare. Successivamente, la cornea viene fissata in una camera anteriore artificiale.Successivamente si utilizza un microcheratomo per effettuare un passaggio uniforme attraverso e lungo la cornea. L'ultimo passaggio consiste nel trasferire con attenzione la cornea dalla camera anteriore artificiale al mezzo di conservazione. Infine, la preparazione riuscita dell'innesto lamellare viene verificata mediante l'esame con lampada a fessura della cornea e la microscopia speculari delle cellule endoteliali.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la cheratoplastica penetrante, consiste nel fatto che con la DSEC viene sostituita soltanto la porzione posteriore della cornea, consentendo un intervento chirurgico con incisione ridotta, minor numero di punti di sutura, recupero più rapido e risultati refrattivi migliori. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale. Le fasi della dissezione lamellare per la cheratostria endoteliale sono difficili da apprendere.Sono necessarie precisione e attenzione durante il taglio del tessuto per preservare il tessuto corneale sano. Iniziare accendendo il gas azoto nella cappa a flusso laminare impostandolo su 50 a 60 PSI. La pressione della turbina sull'unità deve indicare da 3,3 a 3,4 bar.Assicurarsi che la pressione sul congegno Moria sia compresa tra i settecento sulle pompe uno e due. La pressione deve essere inferiore a 200 PSI. Utilizzando una tecnica asettica, preparare un campo sterile con kit sterilizzati aperti e il tessuto corneale del donatore, assicurandosi che la sonda per pachimetria sia stata sterilizzata e pulita con isopropanolo.Quindi, dopo aver rimosso il contenuto dal vassoio sterile, collegare la linea di infusione al rubinetto a tre vie ed estendere l'estremità con lo spike fuori dalla cappa. Posizionare la linea di infusione verso il basso e rimuovere il vassoio sterile. Successivamente, inserire lo spike in una bottiglia di soluzione salina equilibrata e appenderla a circa un metro e venti centimetri sopra l'area di lavoro.Ora eseguire una detersione chirurgica di sei minuti e asciugare con un telo sterile. Indossare una camice sterile e due paia di guanti sterili all'interno della cappa. Aprire le scatole degli strumenti e disporne il contenuto sul campo sterile.Versare da 10 a 20 cc di BSS in un bacile metallico o in un bicchiere da medicazione e riempire una pipetta sterile. Con questo BSS collegare il rubinetto di chiusura e la linea di infusione al porto di infusione della camera anteriore e lavare con BSS. Interrompere il lavaggio quando il BSS diventa visibile sulla sommità del pistone.Ora posizionare la camera artificiale sulla garza sterile e abbassare il pistone ruotando l'anello di serraggio dell'innesto in senso antiorario di circa cinque millimetri utilizzando pinzette. Centrare la cornea sopra il pistone con il lato endoteliale rivolto verso il basso, irrorando con soluzione BSS fino a quando non compaiono bolle d'aria al di sotto della cornea. Spostare delicatamente la cornea secondo necessità.Ora inserire il coperchio della camera anteriore negli spazi aperti dell'anello di bloccaggio di base e fissarlo ruotandolo di 15 gradi in senso orario. Successivamente, sollevare il pistone e completare il serraggio della camera alla base con un dito guantato in modo sterile. Toccare la parte superiore della cornea per verificare se vi sia una pressione sufficiente per eseguire la procedura.Ora posizionare la sonda del pachimetro sulla superficie della cornea e far registrare la lettura da un assistente. Se la deviazione standard è superiore a 10 micron, ripetere la misurazione con una mano guantata sterile. Passare il tubo della turbina all'altra mano e avvitare il tubo della turbina nell'unità di controllo.Dopo aver smaltito i guanti contaminati, applicare alcune gocce di BSS sulla superficie della cornea, a meno che non venga specificato diversamente dal chirurgo. In caso contrario, selezionare una lama da taglio in base allo spessore della cornea, con il filo rivolto verso di sé e il numero rivolto verso l'alto. Inserire la lama nel lato destro della testa del microcheratomo, inserendola prima con l'estremità appuntita.Evitare sempre il contatto con la lama tenendo la testa da entrambi i lati. Avvitare la testa sulla turbina e avvitare la turbina sul tubo della turbina. Verificare l'oscillazione della lama premendo una volta il pedale del vuoto con la testa tagliente in BSS, quindi azionare la turbina per cinque secondi.Ora stringere il pistone fino a renderlo ben fermo. Successivamente, montare il microcheratomo sulla base del supporto e posizionarlo alle cinque in punto. Quindi premere e tenere premuto il pedale della turbina per far oscillare la lama.Utilizzando l'indice e il pollice, tenere il microcheratomo a metà strada tra la base e la sommità della turbina. Con un movimento rotatorio del polso, effettuare un taglio uniforme e continuo attraverso e lungo la cornea. Assicurarsi che il passaggio del microcheratomo sia uniforme e regolare mantenendo una velocità costante; in caso contrario, si potrebbe ottenere uno spessore della graft non uniforme.Rilasciare il pedale della turbina e sollevare il microcheratomo verticalmente dal dispositivo. Quindi spegnere. Indossare un guanto sterile sotto vuoto e, con l'aiuto di un assistente, verificare nuovamente la lettura della pachimetria, avendo cura che il tessuto è molto sottile e facilmente danneggiabile.Quindi, applicare alcune gocce di BSS sterile sul letto stromale residuo. Successivamente, riposizionare il cappuccio anteriore sulla cornea all'interno della camera. Utilizzare una sfera di cotone per centrare il cappuccio avvalendosi dei segni disponibili e per assorbire qualsiasi BSS presente al di sotto del cappuccio anteriore.Ora aprire il rubinetto, ruotare la camera lateralmente e abbassare lentamente il pistone in modo da evitare deformazioni della cornea. Sbloccare la base e lasciare che la pressione del flusso di BSS spinga la coppa della camera artificiale per allentare la cornea dalla coppa. Utilizzare la pinzetta per tirare delicatamente sul bordo in corrispondenza delle posizioni alle ore 9, 12 e 3.Dopo aver allentato, afferrare il bordo nella posizione delle 12 e trasferire con attenzione la cornea nella camera di visione, con il lato endoteliale rivolto verso l'alto. Quindi chiudere la camera di visione. Permettere lentamente al cappuccio di separarsi dalla camera anteriore.Questo garantirà che la cornea non collassi, il che potrebbe causare danni all'endotelio. Infine, eseguire una valutazione con lampada a fessura e un esame di microscopia specular della cornea. Successivamente, refrigerare le camere e imballare la cornea per il trasporto al chirurgo.Una corretta dissezione meccanica del cheratomo microchirurgico della cornea donatrice produce un trapianto corneale lamellare uniforme e liscio; nei sei mesi di registrazioni effettuate, lo spessore corneale medio pre-trattamento è stato di 558 micron e lo spessore post-trattamento del tessuto corneale posteriore è stato di 158 micron. Il tessuto corneale posteriore deve mantenere un’elevata densità di cellule endoteliali per garantire una migliore funzionalità endoteliale al ricevente del trapianto. Questo parametro è stato misurato mediante microscopia speculari negli ultimi sei mesi.Tutti i tessuti corneali ritenuti idonei per la cheratoplastica endoteliale presentavano più di 2.200 cellule endoteliali per millimetro quadrato. La variazione media della densità cellulare endoteliale (ECD) da pre a post-processamento è risultata trascurabile, pari all'1,2%. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come preparare il tessuto di LA melo per l'intervento chirurgico daic. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 20 minuti se effettuata correttamente.

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Il documento descrive una tecnica semplificata per corneale accise e di sviscerare i tessuti della retina dal globo oculare di donatori cadaveri umani. La tecnica qui descritta aiuterà a accise tessuti di buona qualità da usare per il trapianto, a fini chirurgici o di ricerca senza danneggiare altri tessuti del globo oculare.

Una tecnica semplificata per<em&gt; In situ</emEscissione&gt; della cornea e l&#39;eviscerazione del tessuto retinico dal globo oculare umano

I topi sono stati utilizzati come modello per studiare molte forme di trapianto, incluso il trapianto di cornea.  In questo rapporto descriviamo un modello murino sia per il trapianto di cornea acuto che per quello tardivo.

Murini trapianto di cornea: Un modello per studiare la forma più comune di trapianto di organi solidi

Cheratoplastica endoteliale è una tecnica chirurgica in continua evoluzione come risultato progressi nel trapianto di innesti sottili con ogni successione 1. Qui vi presentiamo una tecnica per la dissezione dei tessuti manuale controllato per consentirne la sicura separazione e ripetibile di endotelio e la membrana di Descemet da donatori pulsanti corneosclerale per il trapianto 2.

Corneale Preparazione donatore di tessuti per di Descemet Membrane Endothelial Keratoplasty

Nel trapianto endoteliale viene proposta una procedura completamente laser. La tecnica chirurgica si basa sull'utilizzo di un laser a femtosecondi per preparare il tessuto donatore. La tecnica di saldatura laser viene quindi utilizzata per fissare l'endotelio del donatore nella posizione corretta.

Un &quot;All-laser&quot; Endothelial Transplant

Un esempio di terapia genica adenovirale nelle cornee umane in coltura di organi diabetici viene presentato verso la normalizzazione della guarigione ritardata delle ferite e l'espressione marcatamente ridotta dei marcatori delle cellule staminali epiteliali in queste cornee. Descrive anche l'ottimizzazione di questo processo in colture epiteliali limbari arricchite con cellule staminali.

Adenovirale Terapia genica per diabetici cheratopatia: Effetti sulla guarigione delle ferite e Stem Cell Marker Expression in Human Organ cornee-coltura e le cellule epiteliali Limbal

Questo protocollo descrive un romanzo tridimensionale in vitro modello, cui sono coltivate cellule stromal corneale e cellule neuronali differenziate insieme per assistere nell'esame e nella comprensione delle interazioni tra i due tipi cellulari.

Ingegneria tissutale corneale: Un In Vitro modello delle interazioni Stromal-nervo della Cornea umana

Descriviamo l'uso della microscopia a coerenza ottica a campo completo come metodo per la valutazione di alta qualità dello stroma del donatore corneale. Questo protocollo può essere utilizzato per identificare caratteristiche indicative di salute o malattia e mira a migliorare lo screening e la selezione dei tessuti donatori e quindi i risultati della cheratoplastica.

Microscopia a coerenza ottica a campo intero per l'analisi istologica delle caratteristiche stromali negli innesti corneali

Un protocollo per un ex vivo modello di cultura di organo corneale utile per studi di guarigione della ferita è descritto. Questo sistema modello può essere utilizzato per valutare gli effetti degli agenti per promuovere la guarigione rigenerativa o tossicità della droga in un ambiente organizzato di pluricellulare 3D.

Ex Vivo modello di cultura di organo corneale per la guarigione delle ferite studi

Qui, presentiamo un protocollo per staccare le cellule endoteliali corneali (CEC) dalla membrana di Descemet (DM) utilizzando un laser neodymium:YAG (Nd:YAG) come modello di malattia ex vivo per la cherata toropatia (BK).

Sviluppo di un modello sperimentale non invasivo e assistito dal laser della perdita di cellule endoteliali corneale

Questo protocollo descrive i passaggi critici necessari per stabilire e coltivare colture di cellule endoteliali corneali da espianti di tessuto umano o o novino. Viene inoltre presentato un metodo per la subcultura delle cellule endoteliali corneali su biomateriali membranosi.

Crescita degli strati cellulari endoteliali umani e ovini sulle membrane biomateriali

Descemet's Stripping Only è una procedura sperimentale in cui i pazienti con guttae corneale centrale derivanti dalla distrofia corneale endoteliale di Fuchs hanno la membrana di Descemet spogliata per le cellule periferiche per rigenerare lo strato endoteliale. Presentiamo una nuova metodologia che simula il DSO nelle cornee umane distrofiche ex vivo con guarigione accelerata stimolata da eFGF1 (NM141).

Un modello di coltura di organi corneali umani dello stripping di Descemet solo con guarigione accelerata stimolata dal fattore di crescita dei fibroblasti ingegnerizzato 1

Impara la preparazione del tessuto corneale lamellare per trapianto endoteliale utilizzando il microcheratomo meccanico. Questa tecnica chirurgica garantisce innesti sottili e simmetrici con minima perdita di cellule endoteliali.

Preparazione del tessuto corneale dei donatori per Keratoplasty Endothelial

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