KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Bu prosedürün amacı, kolayca inşa edilebilen bir cihaz kullanarak sıvı nitrojenle dolu duo tanklardaki kriyobox ve kriyotüpler içindeki örneklerin geri alınmasını kolaylaştırmaktır. Bu işlem, öncelikle manevra alanı sağlamak için duo tanktan bir veya iki dondurucu rafın çıkarılması ve ardından cihazın dikey olarak duo tanka yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, cihazla duo tankın tabanı boyunca nazikçe sıyırma işlemi yapmaktır.

Ardından, cihazı dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için duvarlar boyunca dik bir şekilde çekin. Son adım, dondurucunun tabanından çıkarılan kutuyu yakalamak ve çıkarılan dondurucu raflarını yerine yerleştirmektir. Bu tekniğin, dekantasyon gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, numune bütünlüğünü koruyan ve tek bir operatör tarafından gerçekleştirilebilen kolay, güvenli ve hızlı bir alternatif sunmasıdır. Kriyotoleranslı cihazın montajına başlamak için, üç tarafı olan güçlü bir bağın bir tarafını pense yardımıyla düzleştirerek LHA tipi güçlü bir bağ oluşturun.

Burada görüldüğü gibi, güçlü bağın boyutları, operatörün boyun çapına bağlı olarak seçilebilir. Cihazın 5,5 x 5,5 inçlik kriyokutuları geri alabilmesini sağlamak için bu tür iki güçlü bağ yapılmalıdır. Kriyoskopun tabanını oluşturmak için bunları bir kron cıvata, somun pulu ve vida kullanarak güçlü bir bağ TST kayışıyla sabitleyin.

Cihaz şimdi burada görüldüğü şekilde görünmelidir. Şimdi, kanallı bir plaka kullanarak, güçlü bağlama T-şeridindeki kanalları kanallı plakanın bir ucundaki kanallarla hizalayın. Ardından ikisini Hillman somun ve civatalarla birbirine sabitleyin.

Yarıklı plaka ve güçlü bağlarda önceden delinmiş delikler yoksa, sabitleme için delikler açın. Arzu edilirse, yarıklı plakanın diğer ucu bükülerek ve süngerle sarılarak bir tutamak oluşturulabilir. Cihazı daha iyi kavrayabilmek için, suyla temizlemeden önce süngeri çıkardığınızdan emin olun.

Kriyotoleranslı DIY geri alma cihazı, kriyo tüplerinin geri alınması için de uyarlanabilir. Bu işlem, düz tabanın, tüpleri sıvıdan kepçeyle çıkarmak için değiştirilmiş paslanmaz çelik bir süzgeçle değiştirilmesini içerir. Montaja başlamak için öncelikle taç somunları ve cıvataları sökün ve güçlü lastik T-kayışı kanallı plakaya takın.

Ardından, paslanmaz çelik süzgeci yarıklı plakaya takmadan önce, tabanı bir kepçeye benzeyecek şekilde açılı hale getirmek için süzgecin boyun kısmını bir pense yardımıyla nazikçe bükün. Eğer kullanılan süzgeç kenarlıklıysa, kenarlığı aşağı doğru bükmek için pense kullanın. Bu işlem, cihazla çalışmayı kolaylaştıracaktır.

Süzgecin sapındaki deliği, delikli plaka üzerindeki deliklerle hizalayın ve süzgeci Hillman somun ve civatalar kullanarak sabitleyin. Süzgeç önceden delinmiş şekilde gelmemişse delikler açın. Bir dondurucudan kriyojenik kutuları çıkarmaya başlamadan önce, mutlaka kriyojenik eldivenlerinizi giydiğinizden emin olun.

Ardından, cihazla manevra yapabilmek için dondurucudan bir veya iki dondurucu rafını çıkarın. Sonra, güçlü bağlayıcı ttra tabanlı dik kriyotoleranslı DIY geri kazanım cihazını kullanarak, dondurucu tankının tabanına düşen kutuyu toplamak için taban boyunca nazikçe kazıyın. Ardından, dondurucu kutusunu tanktan çıkarmak için cihazı duvarlar boyunca dik bir şekilde yukarı çekerek kutuyu alın.

Kutunun tekrar hazneye kaymasını önlemek için cihazın dikey tutulması ve düz bir şekilde yukarı çekilmesi gerektiğini unutmayın. Kriyo tüplerini geri almak için, süzgeçli kriyo kepçesini kullanarak, kriyo kutusunun geri alınmasına benzer şekilde haznenin tabanını nazikçe kazıyın, cihazı dik konuma getirin ve süzgeçte toplanan tüpleri alın. Gen ekspresyon çalışmalarındaki temel zorluklardan biri, RNA kalitesinin hem dondurulmuş doku örnekleri hem de ekstrakte edilen RNA için saklama koşullarına bağlı olmasıdır.

Bu şekil, örnek hazırlama ve taşıma işlemlerinin toplam RNA bütünlüğü üzerindeki etkisini göstermektedir. Aynı doku kaynağından elde edilen toplam RNA'lar, deneyden önce farklı örnekleme işlemlerine tabi tutulmuştur; bozulmamış toplam RNA preparatı, 28 S ribozomal RNA bandının 18 S ribozomal RNA bandından yaklaşık iki kat daha yoğun olduğu belirgin 28 S ve 18 S ribozomal RNA bantları göstermektedir. Bu durum, RNA'nın bütünlüğünün korunduğunun bir göstergesidir. Üçüncü ve dördüncü hatlar, dondurucudan kısa süreli geri alımlar nedeniyle tekrarlanan kısmi çözülmelere bağlı olarak önemli düzeyde degradasyona uğramış örnekleri tasvir ederek, kutulardaki tüplerin geri alınması gerekliliği nedeniyle periyodik olarak çözülmelerin yaşandığı uzun süreli depolama koşullarını modellemektedir.

Ancak, DIY cihazı kullanılarak doer servisinde saklanan ve dolayısıyla kısmi çözünme gerçekleşmeyen örnekler, ikinci şeritte sağlam RNA içermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, sıvı azot dolu dvar içeriğini boşaltmaya gerek kalmadan örneklerin nasıl geri alınacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.