Name: Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Impara l'isolamento di cellule T CD4+ da linfonodi murini mediante purificazione MACS Miltenyi con selezione negativa. Questo metodo garantisce purezza ≥96% per studi immunologici avanzati.

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Ringraziamo Rebecca Paquett per la preparazione del tampone MACS.

Si prega di leggere e seguire il protocollo incluso nel kit Miltenyi oppure online su <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purif...

<table><tbody><tr><td>Tampone MACS</td><td>Reagente</td><td>None</td><td>None</td><td>Preparare come descritto da Miltenyi.</td></tr><tr><td>Kit per l'isolamento di cellule T CD4+: Isolamento Untouched</td><td>Reagente</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Da utilizzare con il sistema Miltenyi.</td></tr><tr><td>Soluzione salina fosfato sterile (PBS)</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Da utilizzare nella preparazione del tampone MACS.</td></tr><tr><td>Piastra per colture da 35 mm Corning non trattata per adesione cellulare (TC-Treated)</td><td>Altro</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Utilizzata nella preparazione di una sospensione di singole cellule.</td></tr><tr><td>Filtro cellulare da 70 micron</td><td>Strumento</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Utilizzato nella preparazione di una sospensione di singole cellule.</td></tr><tr><td>Siringa da 6 mL</td><td>Strumento</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Utilizzata nella preparazione di una sospensione di singole cellule.</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (DPBS) 10x di Dulbecco&amp;rsquo;s</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Da utilizzare nella lisi dei globuli rossi.</td></tr><tr><td>Acqua sterile</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Da utilizzare nella lisi dei globuli rossi.</td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule t cd4 + da linfonodi mouse utilizzando miltenyi purificazione macs

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

L&#39;isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purificare le cellule CD4 che sono ≥ 96% puro + / CD3 +. Questo protocollo è utilizzato in combinazione con il protocollo di dissezione e 2-Photon Imaging dei linfonodi periferici in topi pubblicato nel numero 7 di Giove, per la purificazione delle cellule T e altri tipi di cellule per trasferire adoptively per scopi di imaging. Anche se non ha dimostrato l&#39;analisi FACS in questo video protocollo, si consiglia vivamente di verificare la purezza complessivo di cellule isolate utilizzando gli anticorpi adeguati tramite FACS. Inoltre, dimostrare la non-sterili metodo di isolamento delle cellule T. Se le cellule sterili sono necessari per il vostro particolare end-user, essere sicuri di fare tutte le procedure dimostrato nel cofano coltura tissutale riferiti alle seguenti condizioni sterili. Grazie per la visione e buona fortuna con i vostri esperimenti!

Isolamento dei linfociti utilizzando il kit di Miltenyi MAC è un modo affidabile per purificare le cellule da tutta omogenati di tessuto linfoide. Cellule purificate utilizzando il sistema Miltenyi sono tipicamente ≥ 96% puro. Qui, le misure prese per isolare cellule T CD4 +, uno dei tanti kit offerto da Miltenyi.

Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS

L'isolamento delle cellule dalla fonte primaria è un passaggio necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule da diverse...

Questo è un magnete Max MIDI. Riporta la seguente avvertenza: attenzione, campi magnetici estremamente potenti. Ciao, sono Melanie Matthew del laboratorio di Mike Collins presso il Dipartimento di Fisiologia e Biofisica dell'Università della California, Irvine.Oggi vi mostreremo la preparazione mediante selezione negativa di cellule T CD4 positive utilizzando i kit della Milton Biotechnology. Qui abbiamo il Minimax e i magneti Minimax: il Minimax viene utilizzato per separazioni su larga scala. È possibile far passare fino a 10^9 cellule attraverso una colonna inserita nel Minimax, mentre i magneti Minimax sono impiegati per volumi cellulari molto più ridotti.Pertanto, a seconda che si esegua una separazione positiva o negativa, si etichettano le cellule con l'anticorpo appropriato. Questi anticorpi presentano una microsfera magnetica che si attacca al magnete. Nel caso di una selezione negativa, le cellule di interesse passeranno attraverso la colonna e sarà possibile raccogliere l'effluente, che conterrà le cellule di interesse.Vorrei precisare che le tecniche che vi sto mostrando stasera non sono sterili. Pertanto, se desiderate utilizzare queste cellule per colture cellulari, d

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Una preparazione altamente purificato di cellule dendritiche del polmone del mouse è descritto. Particolare enfasi è data l'isolamento delle tradizionali sottoinsieme delle cellule dendritiche.

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Arricchimento delle cellule T: una tecnica per isolare le cellule T da una popolazione di cellule miste mediante separazione magnetica

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Dettagli Questo protocollo un metodo per isolare le cellule presentanti l'antigene da timo umano attraverso diverse fasi di digestione enzimatica del tessuto seguita dalla densità centrifugazione della sospensione di cellule singole e smistamento finalmente magnetico e / o FACS delle popolazioni cellulari di interesse.

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Le cellule T CD4+ ingenue si polarizzano in vari sottoinsiemi a seconda dell'ambiente al momento dell'attivazione.  La differenziazione delle cellule T CD4+ naive in vari sottogruppi di effettori può essere ottenuta in vitro attraverso l'aggiunta di stimoli recettoriali delle cellule T e segnali specifici delle citochine.

Mouse Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento T cellulare e<em&gt; In vitro</em&gt; Differenziazione in T sottopopolazioni cellulari

Esistono sottogruppi distinti di cellule dendritiche come popolazioni rare negli organi linfoidi, e quindi sono difficili da isolare in numero e purezza sufficienti per esperimenti immunologici. Qui descriviamo un metodo ad alta efficienza e ad alta resa per l'isolamento di tutti i principali sottogruppi attualmente noti di cellule dendritiche spleniche di topo.

Un metodo del rendimento efficiente e di alta per l&#39;isolamento di mouse dendritiche sottopopolazioni cellulari

Qui descriviamo un protocollo dettagliato per l'isolamento dei linfociti dai siti induttivi tra cui il tessuto linfoide associato all'intestino di Peyer ed i linfonodi mesenterici drenanti e i siti di effettrici tra la lamina propria e la epitelio intestinale del piccolo sistema immunitario intestinale.

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Impara l'isolamento di cellule T CD4+ da linfonodi murini mediante purificazione MACS Miltenyi con selezione negativa. Questo metodo garantisce purezza ≥96% per studi immunologici avanzati.

Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS

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