Name: Viral Tracciamento di geneticamente definito circuiti neurali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 6 s
Description: Impara a tracciare circuiti neurali geneticamente definiti usando un virus trans-sinaptico e il recettore TVA. Questo metodo ad alto rendimento permette di analizzare microcircuiti neuronali nel sistema nervoso centrale.

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Si desidera ringraziare Sean Whelan per l&#39;assistenza con il salvataggio varianti VSV ricombinanti, e Didem Goz e Ryan Chrenek per l&#39;assistenza tecnica. Questo lavoro è stato sostenuto da HHMI (CLC), e # NS068012-01 (KTB).

<ol><li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Marshel, J. H., Mori, T., Nielsen, K. J., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+single+neuronal+networks+for+gene+expression+and+cell+labeling+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeting single neuronal networks for gene expression and cell labeling in vivo.</a> Neuron. 67, 562-574 (2010).</li>
<li>Wall, N. R., Wickersham, I. R., Cetin, A., De La Parra, M., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+circuit+tracing+in+vivo+through+Cre-dependent+targeting+and+complementation+of+modified+rabies+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic circuit tracing in vivo through Cre-dependent targeting and complementation of modified rabies virus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21848-21853 (2010).</li>
<li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Yonehara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+asymmetric+reorganization+of+inhibition+establishes+a+motion-sensitive+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatially asymmetric reorganization of inhibition establishes a motion-sensitive circuit.</a> Nature. 469, 407-410 (2011).</li>
<li>Stepien, A. E., Tripodi, M., Arber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+rabies+virus+reveals+premotor+network+organization+and+synaptic+specificity+of+cholinergic+partition+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic rabies virus reveals premotor network organization and synaptic specificity of cholinergic partition cells.</a> Neuron. 68, 456-472 (2010).</li>
<li>Beier, K. T., Samson, M. E. S., Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+expression+of+the+TVA+receptor+allows+clonal+analysis+of+descendents+from+Cre-expressing+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Conditional expression of the TVA receptor allows clonal analysis of descendents from Cre-expressing progenitor cells.</a> Dev. Biol. 353, 309-320 (2011).</li>
<li>Seidler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Cre-loxP-based+mouse+model+for+conditional+somatic+gene+expression+and+knockdown+in+vivo+by+using+avian+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Cre-loxP-based mouse model for conditional somatic gene expression and knockdown in vivo by using avian retroviral vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 10137-10142 (2008).</li>
<li>Beier, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+or+retrograde+transsynaptic+labeling+of+CNS+neurons+with+vesicular+stomatitis+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Anterograde or retrograde transsynaptic labeling of CNS neurons with vesicular stomatitis virus vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15414-15419 (2011).</li>
<li>Whelan, S. P., Ball, L. A., Barr, J. N., Wertz, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+recovery+of+infectious+vesicular+stomatitis+virus+entirely+from+cDNA+clones%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Efficient recovery of infectious vesicular stomatitis virus entirely from cDNA clones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 8388-8392 (1995).</li>
<li>Fuerst, T. R., Niles, E. G., Studier, F. W., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+Transient-Expression+System+Based+on+Recombinant+Vaccinia+Virus+That+Synthesizes+Bacteriophage+T7+RNA+Polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic Transient-Expression System Based on Recombinant Vaccinia Virus That Synthesizes Bacteriophage T7 RNA Polymerase.</a> PNAS. 83, 8122-8126 (1986).</li>
<li>Young, J. A., Bates, P., Varmus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+chicken+gene+that+confers+susceptibility+to+infection+by+subgroup+A+avian+leukosis+and+sarcoma+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a chicken gene that confers susceptibility to infection by subgroup A avian leukosis and sarcoma viruses.</a> J. Virol. 67, 1811-1816 (1993).</li>
<li>Madisen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nat Neurosci. 13, 133-140 (2010).</li>
<li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+K+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1997).</li>
<li>van den Pol, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+strategies+for+studying+the+brain%2C+including+a+replication-restricted+self-amplifying+delta-G+vesicular+stomatis+virus+that+rapidly+expresses+transgenes+in+brain+and+can+generate+a+multicolor+golgi-like+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Viral strategies for studying the brain, including a replication-restricted self-amplifying delta-G vesicular stomatis virus that rapidly expresses transgenes in brain and can generate a multicolor golgi-like expression.</a> J. Comp. Neurol. 516, 456-481 (2009).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Usando virus per studiare circuiti neurali è un metodo relativamente elevata velocità di analizzare neuroni collegati. Tuttavia, generando sia VSV e virioni RABV non è banale. Anche se il protocollo di cui sopra per il salvataggio virus dal cDNA è fornito, è ancora una bassa probabilità dell&#39;evento. I livelli di ciascuna delle N, P, L e plasmidi bisogno di essere regolato con precisione, e molte prove e repliche deve essere fatto per garantire soccorso virale. La formazione della particella ribonucleotide incorpora ...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Cultura dei tessuti&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Cellule di rene di criceto neonato (BSRT7)</td><td>disponibili su richiesta</td><td></td><td></td></tr><tr><td>vaccinia (vTF7-3)</td><td>disponibili su richiesta</td><td></td><td></td></tr><tr><td>plasmidi pN, pP, pl</td><td>disponibili su richiesta</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Cellule HEK 293T</td><td>Open Biosystems</td><td>HCL4517</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di coltura da 60 mm trattato per colture cellulari (TC)</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>Flacone rettangolare inclinato da 75 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; con tappo ventilato</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo: DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)</td><td>Invitrogen</td><td>12491-015</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 1 M, pH 7,4</td><td>Gibo</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>FBS: siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>PKS</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>Reagente per trasfezione Lipofectamine 2,000</td><td>Invitrogen</td><td>11668-019</td><td></td></tr><tr><td>Siringa: siringa da 5 ml con attacco Luer-Lock</td><td>Sigma</td><td>Z248010-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>Filtri per siringa</td><td>Nalgene</td><td>190-2520</td><td></td></tr><tr><td>PEI: PEI lineare ad alta potenza</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Centrifugazione virale&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Sistema per filtrazione a vuoto con tubo da 150 ml Corning, poro 0,45 &amp;mu;m</td><td>Corning</td><td>430314</td><td></td></tr><tr><td>Provette sottili, ultra-trasparenti, da 38,5 ml, 25 x 89 mm per ultracentrifuga</td><td>Beckman-Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuga</td><td>Beckman-Coulter</td><td>optima XL-80K</td><td></td></tr><tr><td>Rotore SW28 per ultracentrifuga</td><td>Beckman-Coulter</td><td>342207</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Iniezione nei topi&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Micropipette capillari</td><td>Drummond</td><td>5-000-2005</td><td></td></tr><tr><td>Stereotasso</td><td>Narishige</td><td>SR-5M</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore</td><td>Narishige</td><td>SM-15</td><td></td></tr><tr><td>Iniettore Ump</td><td>World Precision Instruments</td><td>Sys-Micro4</td><td></td></tr><tr><td>Microcontrollore a quattro canali</td><td>World Precision Instruments</td><td>UMP3</td><td></td></tr><tr><td>Motore da banco M.TXB con controllo rotante C.EMX-1, 115 Volt</td><td>Foredom</td><td>M.TXB-EM</td><td></td></tr><tr><td>Manopola H.10, cambio rapido</td><td>Foredom</td><td>H.10</td><td></td></tr><tr><td>Trapano a gradini, 0,5 mm</td><td>Foredom</td><td>A-58005P</td><td></td></tr><tr><td>Portaelettrodo micr&amp;#8211;do</td><td>World Precision Instruments</td><td>MEH2S</td><td></td></tr><tr><td>Chetamina</td><td>Henry Schein</td><td>995-2949</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Henry Schein</td><td>4015809TV</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Henry Schein</td><td>1118217</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 1 ml</td><td>Becton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Ago per iniezione da 30 gauge</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Unguento oftalmico protettivo</td><td>Doctors Foster and Smith</td><td>9N-014748</td><td></td></tr><tr><td>Etilene</td><td>Sigma</td><td>493511</td><td></td></tr><tr><td>Iodio</td><td>Sigma</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Strumenti per chirurgia e dissezione&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Forbici</td><td>Fine Science Tools</td><td>91402-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette standard</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette fini</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Manico per bisturi</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lame per bisturi</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Materiali per sutura</td><td>Robbins Instruments</td><td>20.SK640</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Dissezione e colorazione con anticorpi&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata al fosfato</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Siero di asino</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Anticorpi&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Anticorpi</td><td>millipore</td><td>AB144P</td><td></td></tr><tr><td>Anti-gfp</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken Dylight 488</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>703-545-155</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken Alexa Fluor 647</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>705-605-147</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Montaggio del tessuto&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Vetrini microscopici Superfrost plus</td><td>Fisher</td><td>12-550-100</td><td></td></tr><tr><td>Vetrocopri da 22 x 22, spessore 0</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72198-10</td><td></td></tr><tr><td>Elastomero di silicone</td><td>Rogers Corp</td><td>HT-6220</td><td></td></tr><tr><td>Smalto trasparente per unghie</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Reagente antiossidante Prolong Gold</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_content"> &lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

viral tracciamento di geneticamente definito circuiti neurali

Viral Tracing of Genetically Defined Neural Circuitry

I metodi classici per studiare i circuiti neuronali sono velocità piuttosto bassa. Transsynaptic virus, in particolare la pseudorabbia (PRV) e del virus della rabbia (RABV), e più recentemente virus della stomatite vescicolare (VSV), per lo studio di circuiti, sta diventando sempre più popolare. Questi metodi di throughput superiori usare virus che trasmettono tra neuroni sia in direzione anterograda o retrograda. Recentemente, un RABV modificato per monosinaptico retrograda traccia è stata sviluppata. (Figura 1A). In questo metodo, la (G) gene glicoproteina viene eliminato dal genoma virale, e fornita solo in neuroni mirati. Specificità infezione si ottiene sostituendo un G chimerico, composto del dominio extracellulare del ASLV A-glicoproteina e il dominio citoplasmatico del RABV-G (A / RG), per il normale RABV-G 1. Questo G chimerico infetta specificamente le cellule che esprimono il recettore TVA 1. Il gene che codifica TVA può essere delivered con vari metodi 2-8. Dopo RABV-G infezione di un TVA che esprimono neurone, il RABV può trasmettere ad altri neuroni, sinapticamente collegate in senso retrogrado di natura della sua G privato, che era co-espresso con il recettore TVA. Questa tecnica etichetta un numero relativamente elevato di ingressi (5-10%) 2 su un tipo di cellula definito, fornendo un campione di tutti gli ingressi su un tipo di avviamento definito cella. Recentemente abbiamo modificato questa tecnica da utilizzare VSV come transsynaptic tracciante 9. VSV ha diversi vantaggi, tra cui la rapidità di espressione genica. Qui i dettagli di un nuovo sistema di tracciamento virale utilizzando utile per sondare microcircuiti con risoluzione maggiore VSV. Mentre le strategie originali pubblicati da Wickersham et al. 4 e Beier et al. 9 etichettatura permesso di eventuali neuroni che sul progetto inizialmente-infetti TVA esprimono cellule, qui VSV è stato progettato per trasmettere solo alla TVA-cellule esprimenti (Figura 1B). Il virus viene prima pseudotyped con RABV-G per consentire infezione di neuroni a valle di TVA-neuroni che esprimono. Dopo aver infettato questa prima popolazione di cellule, il virus rilasciato può infettare solo TVA-esprimenti cellule. Perché la diffusione transsynaptic virale è limitata a TVA-esprimenti cellule, presenza di assenza di connettività di tipi cellulari definiti può essere esplorato con alta risoluzione. Un diagramma di flusso sperimentale di questi esperimenti è mostrata in Figura 2. Qui mostriamo un modello di circuito, che di direzione selettività nella retina di topo. Esaminiamo la connettività di starburst cellule amacrine (ZSC) a cellule gangliari della retina (RGC).

Un metodo di tracciare neuroni sinapticamente collegate è descritto. Usiamo specificità TVA di una cella a monte per sondare se una popolazione di cellule riceve input sinaptico da tipi di cellule geneticamente definiti.

Viral Tracciamento di geneticamente definito circuiti neurali

I metodi classici per lo studio dei circuiti neuronali presentano una produttività piuttosto bassa. I virus transsinaptici, in particolare il virus della pseudorabbia (PRV) e il virus della rabbia...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è sviluppare una nuova tecnica per analizzare la microcircuitazione nel sistema nervoso centrale. Questo risultato si ottiene innanzitutto definendo una popolazione di neuroni per l'infezione mediante l'espressione del recettore TVA. Come secondo passaggio, il virus transsinaptico viene iniettato nel sistema nervoso centrale, infettando i neuroni primari prescelti.Successivamente, il virus si diffonderà in modo tras-sinaptico solo ai neuroni connessi che esprimono il recettore TVA. Per verificare se questi neuroni sono connessi, si ottengono risultati che dimostrano come questa tecnica possa essere utilizzata per analizzare la microcircuitazione, sulla base della validazione dell'etichettatura di microcircuiti noti e connessi. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'elettrofisiologia e la microscopia, è che si tratta di un metodo ad alto rendimento per l'analisi della circuitazione neuronale.L'idea per questo metodo ci è venuta leggendo il primo studio sul tracciamento virale mono-sinaptico limitato condotto da Wickersham e colleghi. Abbiamo ritenuto che i virus potessero essere ulteriormente ingeg

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Rivelando Topografia Neural Circuit in Multi-Color

Il tracciamento transsinaptico è diventato un potente strumento per analizzare gli efferenti centrali che regolano i bersagli periferici attraverso circuiti multisinaptici. Qui presentiamo un protocollo che sfrutta il virus della pseudorabbia transsinaptica per identificare e localizzare un circuito cerebrale funzionale, seguito da tecniche classiche di tracciamento del tratto per convalidare connessioni specifiche nel circuito tra gruppi di neuroni identificati.

Transsynaptic Tracing da obiettivi periferiche con Pseudorabies virus seguito da tossina colerica e Biotinilato Dextran ammine doppia etichettatura

Capitalizzando su una strategia genetica binaria, forniamo un protocollo dettagliato per il tracciamento dei circuiti neurali nei topi che esprimono traccianti transsinaptici complementari dopo la ricombinazione mediata da Cre. Poiché la produzione di traccianti cellulo-specifici è geneticamente codificata, il nostro approccio sperimentale è adatto per studiare la formazione e la maturazione dei circuiti neurali durante lo sviluppo del cervello embrionale murino con una risoluzione di una...

Condizionale genetica Transsynaptic Tracing nel cervello embrionali di topo

Qui descriviamo una procedura basata sull'uso di particelle lentivirali per la modificazione genetica a lungo termine delle cellule staminali neurali e/o delle loro cellule ependimali adiacenti nella nicchia neurogenica ventricolare-subventricolare adulta che consente l'analisi separata degli effetti autonomi e non autonomi delle cellule staminali neurali.

Stabile ed efficiente Modificazione genetica di cellule nel topo adulto V-SVZ per l&#39;analisi di cellule staminali neurali autonoma ed effetti non autonomi

Descriviamo una tecnica per etichettare i neuroni ei loro processi tramite iniezioni anterograda o traccianti retrogradi in nuclei cerebrali con una preparazione in vitro. Abbiamo modificato un metodo esistente di i n vitro tracciante elettroporazione sfruttando fluorescente mutanti di topo attrezzatura ottica e di base al fine di aumentare la precisione di etichettatura.

Neuronal Tracing negli espianti cerebrali a guida laser

Questo protocollo descrive ricostruzioni su larga scala di popolazioni neuronali selettivi, etichettati dopo l'infezione retrograda con esprimendo un virus della rabbia modificato marcatori fluorescenti, e le analisi di cluster indipendente, imparziale che consentono la caratterizzazione completa delle metriche morfologiche tra sottoclassi neuronali distinti.

Ricostruzioni su larga scala e indipendente, imparziale Clustering Sulla base morfologici metrica per classificare i neuroni in selettivi Popolazioni

Basato sull'ingegneria calularisa in vitro dei precursori neuronali, sul loro co-trapianto in cervelli di tipo selvatico e sulla valutazione morbiterale accoppiata dei derivati "test" e "controllo", questo metodo consente una modellazione accurata del controllo genico in vivo morfologia dei neuroni in modo semplice e conveniente.

Trapianto intraventricolare di precursori neuronali ingegnerizzati per studi sulla neuroarchitettura In Vivo

Questo protocollo mira a generare interneuroni direttamente riprogrammati in vivo, utilizzando un sistema virale basato su AAV nel cervello e un giornalista GFP basato sulla sinapsi FLEX, che consente l'identificazione delle cellule e ulteriori analisi in vivo.

Riprogrammazione diretta in vivo delle cellule gliali residenti negli interneuroni mediante iniezione intracerebrale di vettori virali

L'attuale protocollo dimostra un metodo semplice per tracciare le proiezioni del glutammato dell'area tegmentale ventrale (VTA) all'ippocampo. La fotostimolazione dei neuroni del glutammato VTA è stata combinata con la registrazione CA1 per dimostrare come i terminali del glutammato VTA modulano la presunta velocità di attivazione piramidale di CA1 in vivo.

Tracciato anatomico e funzionale combinato in vivo dei terminali del glutammato dell'area tegmentale ventrale nell'ippocampo

Qui presentiamo un protocollo che descrive la trasduzione virale di regioni cerebrali discrete con costrutti optogenetici per consentire la caratterizzazione elettrofisiologica sinaptico-specifica in fette acute di cervello di roditori.

Ex Vivo Interrogazione optogenetica della trasmissione sinaptica a lungo raggio e della plasticità dalla corteccia prefrontale mediale alla corteccia entorinale laterale

Durante lo sviluppo della corteccia cerebrale, i neuroni e le cellule gliali hanno origine nella zona ventricolare che riveste il ventricolo e migrano verso la superficie del cervello. Molti geni sono coinvolti in questo processo. Questo protocollo introduce la tecnica per l'imaging time-lapse di neuroni in migrazione e progenitori gliali.

Imaging time-lapse di neuroni in migrazione e progenitori gliali in fette di cervello embrionale di topo

Impara a tracciare circuiti neurali geneticamente definiti usando un virus trans-sinaptico e il recettore TVA. Questo metodo ad alto rendimento permette di analizzare microcircuiti neuronali nel sistema nervoso centrale.

Viral Tracciamento di geneticamente definito circuiti neurali

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