Name: Esecuzione Lavage vaginale, di colorazione viola di cristallo, e la valutazione citologica vaginale per lidentificazione ciclo estrale Staging mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Scopri come determinare lo stadio del ciclo estrale nelle topi mediante lavaggio vaginale e colorazione con violetto di cristallo. Questo metodo citologico non invasivo permette di identificare le fasi proestro,estro,metestro e diestro.

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Vorremmo ringraziare Marc Leonard presso la Carleton Immersive Media Studio per l&#39;assistenza tecnico esperto in produzione e montaggio video e il dottor Martin Bertrand presso la Carleton Immersive Media Studio / Laboratorio rigenerazione neurale per l&#39;assistenza modello visivo. Gli autori ringraziano il parere degli esperti del Dr. Marilyn Keaney e tutto il suo personale dedicato presso l&#39;Università di Ottawa e Animal Care Servizi veterinari. Questo lavoro è stato finanziato dal Canadian Institute of Health Research (CIHR, MOP 62826) per SALB, l&#39;Istituto CIHR di invecchiamento e l&#39;iniziativa di formazione strategica in Ricerca Salute / Programma di Formazione in CIHR Lipidomica neurodegenerative (TGF 96121) per SALB e SF, Canadian Foundation per l&#39;innovazione a SF, Ontario Trust Innovation a San Francisco, e Autodesk ricerca a SF. ACM riceve un CIHR Banting e Best premio di dottorato. NV riceve una borsa di studio post-professionale da Institute of Aging e Programma di Formazione in CIHR Lipidomica neurodegenerative.

1. Reagenti Preparazione <ol><li> Per sterile lavanda vaginale, autoclave acqua bidistillata (DDH 2 O) e conservare in un contenitore ermeticamente chiuso a temperatura ambiente fino al momento dell&#39;uso. </li><li> Per la valutazione citologica, aggiungere 0,1 g di polvere cristalvioletto a 100 ml di DDH 2 O. Mescolare bene. Cristalvioletto macchia (0,1%) può essere conservato in un contenitore ermeticamente sigillato a temperatura ambiente fino a quando necessario. </li></ol> 2. Raccolta di cellule vaginali (Lavage vaginale) <ol><li> Posizionare una lampadina lattice sulla fine di una sterile 200 microlitri punta e di elaborare circa 100 ml di sterile DDH 2 O utilizzando le gradazioni sulla punta come linea guida del volume. </li><li> Sollevare il mouse fuori dalla sua gabbia e metterla sulla tramoggia gabbia (coperchio) con la sua estremità posteriore / posteriore verso di voi. </li><li> Afferrare saldamente la coda e sollevare la parte posteriore. Il mouse avrà ora solo le zampe anteriori afferrare la tramoggia. A questo punto il mouse può urinare. Se è così, Attendere fino a quando si ferma minzione. In caso di urina a sinistra all&#39;ingresso del canale vaginale, si consiglia di sciacquare l&#39;apertura con eccesso di DDH 2 O con una punta separato (cioè, non la punta del prelievo del campione). </li><li> Posizionare l&#39;estremità del 2 DDH O pieno di punta all&#39;apertura del canale vaginale, avendo cura di non penetrare l&#39;orifizio vaginale come (e cervicale), la stimolazione può indurre pseudogravidanza nei ratti 1,2. Rapporti recenti suggeriscono i topi sono meno sensibili a questo effetto comunque si dovrebbe aver cura di ridurre al minimo il grado di invasività in analisi ripetute 3. </li><li> Delicatamente premere lo stantuffo per espellere un quarto alla metà del volume di acqua (~ 25-50 microlitri) in apertura del canale vaginale. Il liquido spontaneamente aspirare nel canale di inserimento senza punta. Rilasciare lentamente la pressione esercitata sul bulbo. Il fluido si ritirerà nuovamente dentro la punta. Evitare pressione rilasciando troppo velocemente per evitare l&#39;aspirazione di liquidonel bulbo. Una punta filtrata può essere utile a questo scopo. </li><li> Ripetere i tempi delle fasi precedenti 4-5 usando la punta stessa, bulbo, e fluido per ottenere un numero sufficiente di cellule in un singolo campione. </li><li> Posizionare il fluido sul vetrino, e consentire l&#39;striscio asciugare completamente a temperatura ambiente. Una volta asciutto, questi strisci estro può essere colorato immediatamente o conservate e colorate in un secondo momento. </li></ol> 3. Colorazione citologica utilizzando Crystal Violet * 4 <ol><li> Posizionare il vetrino a secco in una vaschetta Coplin (o da altro vaso colorazione simile) contenente il cristalvioletto colorare per 1 min. </li><li> Rimuovi per un barattolo secondo Coplin contenente DDH 2 O. Lavare il vetrino con DDH 2 O per 1 min. Ripeti. </li><li> Rimuovere l&#39;eccesso DDH 2 O dai bordi del vetrino con leggeri tergicristallo tessuto, evitando il contatto con lo striscio colorato. </li><li> Pipettare circa 15 ml di glicerolo in cima al coperchio e striscioscivolare. In alternativa, altri reagenti istologici di montaggio può essere utilizzata per ottenere un più permanente, non-diffondente macchia. </li></ol> * Il metodo di colorazione qui descritto è il più semplice procedura che può essere eseguita in qualsiasi laboratorio. Altri metodi in grado di fornire ulteriori dettagli. Ad esempio, utilizzando la colorazione Papanicolaou, la maturità di nucleate cellule epiteliali possono essere distinti con le cellule meno mature le cellule colorate con turchese e più maturi rosa o arancione-macchiati. Queste differenze possono essere utilizzati per organizzare proestrus presto o tardi. 4 4. Citologia Vaginale <ol><li> Esaminare lo striscio al microscopio ottico per determinare i tipi di cellule presenti. Esame microscopico dovrebbe essere fatto immediatamente dopo colorazione come cristalvioletto diffonderà dalle cellule nel tempo quando si utilizza glicerolo per coprioggetto. Microfotografie deve essere assunto al momento di analisi per documentare citologia. </li><li> Iniziamo ad esaminare la entirstriscio e con un ingrandimento inferiore. Selezionare un&#39;area rappresentativa e passare a un ingrandimento maggiore. Vedrete cornified squamose cellule epiteliali, leucociti, e / o nucleate cellule epiteliali (risultati rappresentativi, Figura 1A-C). Il rapporto tra presente cellule vi permetterà di determinare la fase estrale del mouse al momento del prelievo del campione (risultati rappresentativi, figura 1D-G) e il suo stato ormonale immediata (discussione, Figura 2). </li></ol> 5. Risultati rappresentativi Citologia: Tre tipi cellulari primarie può essere rilevato in campioni di striscio vaginale: (1) nucleate cellule epiteliali (Figura 1A), (2) cornified cellule epiteliali squamose (Figura 1B), e (3) leucociti (Figura 1C). Nucleate cellule epiteliali hanno un citoplasma poco sporca, più scuro macchiato membrana plasmatica, e un nucleo ovale ( <strong&gt; Figura 1A). Cornified cellule epiteliali squamose sono uniformemente macchiato, più poligonale loro predecessori nucleate epiteliali, e mancanza di un nucleo (Figura 1B). Leucociti polimorfonucleati può essere distinto da cellule epiteliali dalla loro forma irregolare, scuro macchiato nuclei polimorfi, e le piccole dimensioni (Figura 1C, frecce nere). Contaminazione dovrebbe essere presente nelle urine striscio, cristalli di acido urico sono prontamente rilevato dalle loro strutture cristalline dissimili a qualsiasi tipo di cella attesi (Figura 3). In questo caso, e la rilevazione oscura di tipo cellulare predominante, lo striscio deve essere eliminato e non utilizzati a scopo di stadiazione. Staging: Il rapporto relativo di tipi di cellule osservate negli strisci può essere utilizzato per identificare la fase del ciclo estrale del mouse, il giorno della raccolta del campione (Figura 1D-G). Durante proestro, le cellule sono quasi esclusivamentegruppi di rotondo, ben formato nucleate cellule epiteliali (Figura 1D, cellula rappresentante indicato dalla freccia bianca). Durante l&#39;estro, le cellule sono prevalentemente cornified cellule epiteliali squamose, presenti in gruppi densamente (Figura 1E, cellula rappresentante indicato dalla freccia). Durante metestrus, piccoli leucociti scuro macchiato predominano (Figura 1F, cella rappresentante indicato dalla freccia nera). Corneo cellule epiteliali squamose possono essere osservati, spesso in frammenti, (Figura 1F, cellula rappresentante indicato dalla freccia nera). Durante il diestro, cornified rare cellule epiteliali squamose possono essere ancora presenti (Figura 1G, cella rappresentante indicato dalla freccia nera), ma ancora predominano leucociti (Figura 1G, cella rappresentante indicato dalla freccia nera). Metestrus può essere distinto da diestro dalla comparsa di cellule nucleate epiteliali in diestro ( <stron<html> g&gt; Figura 1G, cellula rappresentante indicato dalla freccia bianca). <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Valutazione citologica di strisci vaginali può essere utilizzato per identificare fase estrale tre tipi principali di cellule vengono rilevati in campioni di striscio vaginale:. (A) nucleate cellule epiteliali, (B) cornified cellule epiteliali squamose, e (C) leucociti. Il rapporto di questi tipi di cellule presenti nel striscio può essere utilizzato per identificare in topi (D) proestrus, (E) estro, (F) metestrus, o (G) come descritto in diestro risultati rappresentativi. Punte di freccia nere in E, F e del punto G alla rappresentanza cornified cellule epiteliali squamose. Frecce nere in C, F e del punto G alla leykocytes rappresentativi. Frecce bianche in D e rappresentante evidenziare G nucleate cellule epiteliali. . &quot;Alt =&quot; jpg Figura 2 &quot;/&gt; Figura 2. Citologia striscio vaginale riflette eventi endocrini sottostanti. Dettagli sono forniti anche in discussione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire la figura</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Cristalli di acido urico possono essere presenti di colorazione viola cristallo di urina-campioni contaminati. (A) I cristalli sono trasparenti e possono essere di varie dimensioni (frecce e regione scatola ingrandite in (B)). Nessun cellule sono presenti in questo campo. Dovrebbe contaminazione cristallo acido urico entro campi usati per la colorazione citologica essere presente, può essere difficile identificare con precisione tipi di cellule presenti e lo striscio deve essere scartato. Barre di scala = 50 micron.

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Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interessi. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in stretta conformità con le linee guida e regolamenti stabiliti dalla University of Ottawa Animal Care Comitato e il Canadian Council on Animal Care.

Questi cambiamenti nella tipologia cellule sono indicativi di eventi endocrini sottostanti. La fase proestro del ciclo estrale corrisponde alla fase follicolare umano del ciclo mestruale e 5 è definito da un pre-ovulatoria aumento circolanti 17-β-estradiolo livelli 6, nonché un aumento piccolo prolattina 7 (figura 2, proestro, pannello di sinistra). L&#39;incremento 17-β-estradiolo stimola indirettamente gonadotropina-releasing ormone neuroni dell&#39;ipotalamo e setto che, a loro volta, attivano cellule responsive nella pituitaria anteriore per rilasciare l&#39;ormone luteinizzante e ormone follicolo-stimolante nella circolazione 8,9 (figura 2 , proestro, pannello di sinistra). In strisci vaginali prelevati da animali in proestro, le cellule sono cellule nucleate quasi esclusivamente ovali epiteliali (Figura 1D, Figura 2, proestro, pannello di destra). Il picco nel follicolo-stimolante HORMuno dei livelli dei segnali l&#39;ovulazione e l&#39;entrata in estro 10,11. Durante l&#39;estro, 17-β-estradiolo livelli di livelli di prolattina e declino di picco 6,7 (Figura 2, Estrus, pannello di sinistra). Strisci vaginali sono caratterizzati da rilevamento quasi esclusivo di forma irregolare cornified cellule epiteliali squamose spesso in ciuffi (Figura 1E, Figura 2, Estrus, pannello di destra). Entrata in metestrus coincide con un continuo aumento dei livelli dell&#39;ormone progesterone 6 e corrisponde all&#39;inizio della fase luteale umano 12 (Figura 2, Metestrus, pannello di sinistra). Come i livelli di progesterone inizia a salire e c&#39;è un piccolo aumento in 17-β-estradiolo livelli in risposta all&#39;attivazione del corpo luteo 6,13,14 (Figura 2, Metestrus, pannello di sinistra). I tipi di cellule presenti in strisci vaginali durante questa fase sono frammentate, le cellule epiteliali e leucociti cornified più scure più piccoli colorati (Figure 1F, Figura 2, Metestrus, pannello di destra). Infine, entrata in diestro in topi verifica e livelli circolanti progesterone picco 6, corrispondente alla fase tardiva umana luteale 12. Regressione del corpo luteo porta ad una conseguente diminuzione forte livelli di progesterone 15,16 (Figura 2, diestro, pannello di sinistra). Leucociti predominano negli strisci durante diestro. La frequenza di cornified cellule epiteliali è ridotto e nucleate cellule epiteliali iniziano a essere rilevato appena prima transizione proestrus (Figura 1G, Figura 2, diestro, pannello di destra). In sintesi, questo semplice protocollo di routine può essere utilizzato per stimare quotidiane fluttuazioni ormonali e stabilire fase estrale nei topi sperimentali, senza alterare lo stato riproduttivo se le seguenti precauzioni vengono prese. Il campionamento deve essere effettuato non più di una volta al giorno utilizzando il protocollo non invasivo described qui rispetto alla penetrazione ripetuta del canale vaginale, l&#39;aspirazione, e agitazione. Questo può causare irritazione vaginale, un 17 risposta infiammatoria conseguente leucociti e altri tipi di cellule di essere presente in strisci che possono confondere valutazione citologica. Inoltre, anche in colonie alloggiati femmine, è normale vedere diestro estesi e le fasi di estro nei topi diversi, come pure l&#39;induzione di anestrous 18 e questa identificazione è utile per l &#39;interpretazione di impatto ormonale riproduttiva, il sesso e gli studi sulle malattie. La variabilità della durata del ciclo viene introdotto anche con l&#39;età e con le differenze degli alloggi nelle colonie (individuale o di gruppo-housing) di femmine 7,19-21. Le femmine alloggiati nelle donne solo colonie può cessare in bicicletta e in uno stato di prolungato diestro 18,22,23, anche se il ciclismo può essere ripristinato in caso di esposizione a gabbie pretrattati con urina maschile per suscitare ciclismo 24,25. Pertanto, per stabilire individuadurata del ciclo l per un mouse dato, si raccomanda che le valutazioni non invasive descritte qui effettuata giornalmente, con cura, fino a due cicli completi si osservano.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Azienda </td><td> Catalogo # </td></tr><tr><td> Sterili 200 puntali pl </td><td> DiaMed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> Lattice lampadina (1 ml) </td><td> Pescatore </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> Vetro microscopio diapositive </td><td> Pescatore </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Crystal Violet macchia (25 g) </td><td> Pescatore </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> Leggeri tessuti Panni </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> Glicerina </td><td> Pescatore </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> Microscopio di vetro di copertura (22x30) </td><td> Pescatore </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

esecuzione lavage vaginale, di colorazione viola di cristallo, e la valutazione citologica vaginale per l&#39;identificazione ciclo estrale staging mouse

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Un mezzo rapido di valutare lo stato riproduttivo nei roditori è utile non solo nello studio della disfunzione riproduttiva, ma è necessario anche per la produzione di nuovi modelli murini di malattia e indagini nella regolazione ormonale della degenerazione del tessuto (o rigenerazione) dopo sfida patologica. Il murino riproduttiva (o estro) ciclo è diviso in 4 fasi: proestro, estro, metestrus e diestro. Fluttuazioni definiti dei livelli circolanti degli steroidi ovarici 17-β-estradiolo e progesterone, le gonadotropine luteinizzante e follicolo ormoni stimolanti, e la transizione di ormone prolattina luteotropic segnale attraverso queste fasi riproduttive. Variazioni tipologia delle cellule all&#39;interno del canale vaginale murino riflettere questi eventi endocrini sottostanti. Valutazione giornaliera del rapporto relativo nucleate cellule epiteliali, cellule epiteliali squamose cornified, e leucociti presenti negli strisci vaginali può essere utilizzato per identificare estrale murinefasi. Il grado di invasività, però, impiegato nella raccolta di questi campioni possono alterare lo stato riproduttivo e provocare una risposta infiammatoria che può confondere la valutazione citologica di strisci. Qui, descriviamo un semplice, non invasivo protocollo che può essere utilizzato per determinare la fase del ciclo estrale di un topo femmina senza alterare il suo ciclo riproduttivo. Ci dettaglio come distinguere tra le quattro fasi del ciclo estrale di raccolta e l&#39;analisi della tipologia cellula predominante negli strisci vaginali e si mostra come questi cambiamenti possono essere interpretati in relazione allo stato endocrino.

Qui, descriviamo come identificare lo stadio della murino riproduttiva (proestro, estro, metestrus o diestro) per semplice, non invasivo raccolta e la valutazione citologica di campioni di striscio vaginale. Abbiamo inoltre descritto come citologia vaginale riflette livelli circolanti ormonali alla base di transizione attraverso il ciclo riproduttivo murino.

Esecuzione Lavage vaginale, di colorazione viola di cristallo, e la valutazione citologica vaginale per l&#39;identificazione ciclo estrale Staging mouse

Un mezzo rapido per valutare lo stato riproduttivo nei roditori è utile non solo nello studio della disfunzione riproduttiva, ma è inoltre richiesto per la ...

Tutte le procedure eseguite in questo studio sono state effettuate in conformità con le linee guida e i regolamenti stabiliti dal Comitato per la Cura degli Animali dell'Università di Ottawa e dal Consiglio Canadese per la Cura degli Animali. Un metodo rapido per valutare lo stato riproduttivo nei roditori è utile non solo nello studio delle disfunzioni riproduttive, ma è anche necessario per la produzione di nuovi modelli murini di malattia e per indagini sulla regolazione ormonale della degenerazione o rigenerazione dei tessuti in seguito a sfide patologiche. Di seguito descriviamo come identificare la fase del ciclo riproduttivo delle topoline in un determinato giorno mediante una semplice valutazione citologica non invasiva del tipo cellulare predominante presente nei tamponi vaginali.Il ciclo riproduttivo o estrale speculare è suddiviso in quattro fasi. PROEs es, metes e drisk definiscono le fluttuazioni nei livelli circolanti degli steroidi ovarici, 17 beta estradiolo e progesterone, delle gonadotropine, ormone luteinizzante e ormone follicolo-stimolante, e dell'ormone luteotropo prolattina che segnala il passaggio attraverso queste fasi riproduttive. La fase di proestro del ciclo estrale corrisponde alla fase follicolare umana del ciclo mestruale ed è definita da un aumento preovulatorio dei livelli circolanti di 17 beta estradiolo, nonché da un lieve picco di prolattina.L'aumento di 17 beta-estradiolo è seguito da un innalzamento dei livelli circolanti di ormone luteinizzante e di ormone follicolo-stimolante. Il picco dei livelli di ormone follicolo-stimolante segnala l'ovulazione e l'ingresso nella ES. Durante lo stress della ES, i livelli di 17 beta-estradiolo diminuiscono insieme ai livelli di prolattina.L'ingresso nel metestro coincide con un lieve aumento dei livelli circolanti di ormone follicolo-stimolante e corrisponde all'inizio della fase luteale umana. I livelli di progesterone iniziano a salire e si verifica un secondo lieve aumento dei livelli di 17 beta-estradiolo. In risposta all'attivazione del corpo luteo, l'ingresso nella diestrale nei topi avviene quando i livelli circolanti di progesterone raggiungono il picco e corrisponde alla fase umana.Fase luteale tardiva. La regressione del corpo luteo provoca un repentino calo dei livelli di progesterone e l'ingresso in prote. I cambiamenti nella tipologia cellulare rispecchiano questi eventi endocrini nei rapporti relativi tra le cellule epiteliali.Le cellule e i leucociti quantificati rilevati nei tamponi vaginali possono essere utilizzati per identificare ciascuna delle fasi estrali. Ciao, mi chiamo Ashley McLean. Sono un ricercatore nel laboratorio di rigenerazione neurologica sotto la direzione della dottoressa Stephanie Bennett presso l'Università di Ottawa.E io sono Nicholas Valenzuela. Lavoro con il dottor Steven Phi presso il Carlton Immersive Media Studio dell'Università di Ottawa. In questo video, descriviamo un protocollo semplice che può essere utilizzato per la determinazione dello stadio del ciclo extra EST.Questo protocollo illustrerà come distinguere tra le quattro fasi riproduttive del topo: proestro, metaestro, estro e diestro, valutando la tipologia cellulare predominante e i tamponi vaginali. Cominciamo. Per questo protocollo, sarà necessario preparare due oggetti, acqua doppio-distillata e una soluzione di violetto cristallo allo 0,1%.La soluzione di colorazione può essere conservata in un contenitore ben chiuso a temperatura ambiente fino al momento dell'uso. Iniziare posizionando una pipetta di lattice sulla punta di una pipetta sterile da 200 microlitri ed aspirare circa cento microlitri di acqua sterile bidistillata. Utilizzare le graduazioni sulla punta come riferimento volumetrico.Posiziona il mouse sull'alimentatore in modo che la parte posteriore sia rivolta verso di te. Afferra saldamente la coda e solleva delicatamente l'estremità posteriore. Il mouse userà le zampe anteriori per afferrare l'alimentatore.A questo punto, il topo potrebbe urinare. In tal caso, risciacquare la zona con acqua doppio distillata utilizzando una punta separata. Posizionare l'estremità della punta contenente acqua doppio distillata all'apertura del canale vaginale.Premere delicatamente la peretta ed espellere un quarto fino alla metà del volume d'acqua nel canale vaginale. Successivamente, rilasciare lentamente la pressione esercitata sulla peretta, riassorbendo il liquido all'interno della punta. Ripetere questo passaggio precedente quattro o cinque volte utilizzando la stessa punta della peretta e lo stesso liquido.Evitare di rilasciare la pressione troppo rapidamente per non aspirare il liquido nella pipetta. Un filtro all'estremità della pipetta può essere utile a tale scopo. Rimettere il topo nella sua gabbia ed espellere il liquido sul vetrino di vetro.Lasciare asciugare completamente il vetrino a temperatura ambiente. Una volta asciutto, questi strisci di Este extra possono essere colorati immediatamente o in un momento successivo. Immergere il vetrino essiccato all'aria nel colorante violetto di cristallo per un minuto.Lavare il vetrino con acqua distillata doppia per un minuto. Ripetere l'operazione, quindi rimuovere l'eccesso di acqua distillata doppia dal vetrino utilizzando un fazzoletto di carta leggero. Evitando la zona dello striscio colorato, aggiungere circa 20 microlitri di glicerolo sopra lo striscio e coprire con un coprioggetto.È necessario esaminare i preparati colorati il più presto possibile mediante microscopia ottica, poiché nel tempo il colorante diffonderà dalle cellule nel mezzo di montaggio a base di glicerolo. Iniziare esaminando l'intero preparato a ingrandimento minore. Selezionare un'area rappresentativa e passare a un ingrandimento maggiore.Nella fase Pro Astra, le cellule sono quasi esclusivamente cellule epiteliali nucleate. Nella fase extra, le cellule che si osservano sono prevalentemente cellule epiteliali squamose cornee, che di solito formano ammassi densamente compatti. Queste cellule hanno una forma irregolare e non presentano un nucleo visibile.Nella fase di metestro, si osservano ancora raramente cellule epiteliali squamose cornee, ma ora prevale una popolazione di leucociti più piccoli e intensamente colorati. Nella fase di diestro, sono presenti pochissime, se non assenti, cellule epiteliali squamose cornee. I leucociti residui sono presenti in grande numero.Si osservano cellule epiteliali nucleate, presenti sia come cellule singole che in gruppi. Un problema che si può incontrare è la contaminazione del tuo striscio con urina. In tal caso, lo striscio deve essere scartato e non utilizzato per lo stadio.Abbiamo appena mostrato come eseguire lavaggi vaginali. Raccogliere i campioni, colorare questi campioni e valutare la tipologia cellulare per determinare la fase del ciclo estrale delle topoline al momento dell'analisi. In sintesi, durante la fase preovulatoria nel PROE, un picco nei livelli circolanti di 17 beta-estradiolo si riflette in una predominanza di cellule epiteliali nucleate ben formate nei campioni di striscio vaginale.Un successivo picco nei livelli di ormone follicolo-stimolante segnala l'ovulazione e l'ingresso nella fase di estro, in cui predominano nelle strisci cellulari epiteliali squamose cornee. Durante la metaestro, i livelli di progesterone aumentano. I tipi cellulari presenti negli strisci vaginali in questo periodo sono cellule epiteliali cornee frammentate e leucociti più piccoli e più scuri.Durante la diestrosi, con un picco di progesterone, iniziano ad apparire cellule epiteliali nucleate. I leucociti sono ancora presenti. Per assicurarsi che un topo femmina stia ciclando regolarmente e per stabilire la durata del ciclo estrale, queste valutazioni andrebbero effettuate giornalmente e analizzate su due cicli completi; è normale osservare fasi di diestrosi ed estrus prolungate in topi diversi.Speriamo che questo vi sia utile nei vostri studi focalizzati sul genere e sugli ormoni, e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Esecuzione Lavage vaginale, di colorazione viola di cristallo, e la valutazione citologica vaginale per lidentificazione ciclo estrale Staging mouse (Video) | JoVE Journal

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