Name: Probe-based Endomicroscopy laser confocale del tratto urinario: La Tecnica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Scopri la microscopia confocale laser endoscopica per l'imaging in tempo reale del tratto urinario durante la cistoscopia. Questa tecnica consente la visualizzazione cellulare dei tumori vescicali, migliorando la diagnosi e la guida chirurgica.

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Gli autori desiderano ringraziare Mauna Kea Tecnologie per il supporto tecnico. Gli autori hanno anche ringraziare Shelly Hsiao per l&#39;assistenza tecnica e Kathleen E. Mach per la revisione critica. Questo lavoro è stato in parte finanziato dal NIH R01CA160986 a JCL

1. Preparazione del paziente <ol><li> Il consenso del paziente in programma per la cistoscopia diagnostica e altre procedure endourologiche come resezione transuretrale del tumore della vescica (TURBT) per CLE. Includere nella consenso una descrizione dell&#39;uso di fluoresceina intravescicale e / o endovenosa come agente di contrasto. Informarsi storia della reazione di ipersensibilità ad fluoresceina. </li><li> Paziente viene posizionato per cistoscopia (tipicamente in posizione litotomica) e preparato in modo sterile. </li><li> Procedere con lo standard cistoscopia a luce bianca (WLC) con un cistoscopio rigido o flessibile attraverso l&#39;uretra. </li><li> Indagine tutte le regioni della vescica in luce bianca (Figura 1) e annotare le regioni di interesse per le indagini CLE. </li><li> Oltre al WLC, la vescica può essere ripreso con altre modalità di imaging ottico comprendente macroscopici cistoscopia a fluorescenza (Figura 2A) o imaging banda stretta (Figura 2B) per identify ulteriori aree di sospetto seguita da caratterizzazione con CLE. </li><li> Utilizzare un elettrodo di cauterizzazione o loop resezione per inserire un segno piccolo cauterio adiacenti alle regioni di interesse, che saranno entrambi impressi e biopsia per la conferma patologica. Il marchio cauterizzazione facilita ri-localizzazione per la successiva CLE imaging e biopsia. </li></ol> 2. Di contrasto <ol><li> Instillazione intravescicale di mezzo di contrasto <ol><li> Preparare diluendo clinica sodio fluoresceina grade 10% in soluzione salina normale (0,9% NaCl) alla concentrazione desiderata. Per esempio, preparare 400 ml di 0,1% fluorescina diluendo 4 ml di 10% fluoresceina in 396 ml di soluzione salina normale. </li><li> Inserire un catetere sterile in vescica urinaria e infondere agente di contrasto diluito per gravità utilizzando un catetere da 60 ml-siringa. </li><li> Fissare il catetere urinario per contenere l&#39;agente di contrasto interiore per 5 min. </li><li> Scolare agente di contrasto di vescica. Usa la 60 catheter-siringa per lavare contrasto residua dalla vescica con soluzione fisiologica, circa 240-300 ml. </li><li> Procedere alla CLE imaging. </li></ol></li><li> L&#39;iniezione endovenosa di fluoresceina <ol><li> Disegna 1,0 ml di fluoresceina nella siringa. Collegare la siringa per iniettare l&#39;accesso per via endovenosa e 0,5-1,0 ml di fluorescina per via endovenosa in bolo. Lavare linea con soluzione fisiologica. Questo viene fatto tipicamente dal team di anestesia in sala operatoria. </li><li> Procedere alla CLE imaging. </li></ol></li></ol> 3. CLE Imaging <ol><li> Rimuovere il sterilizzato CLE immagini della sonda (Cellvizio) dalla confezione e collegarlo all&#39;unità di scansione laser (Mauna Kea Technologies, Parigi, Francia) </li><li> Riscaldare e calibrare la sonda immagini seguendo le istruzioni del produttore. </li><li> Reinserire il cistoscopio o resettoscopio nella vescica. Utilizzare uno 0 lente gradi con il cistoscopio rigido. </li><li> Far avanzare il CLE immagini della sonda lungo il working canale del cistoscopio con la punta appena oltre il cistoscopio. </li><li> In luce bianca, individuare le regioni precedentemente contrassegnati di interesse. Utilizzare ulteriori irrigazione normale soluzione salina, se necessario per la visualizzazione della mucosa e mantenere moderata distensione della vescica. </li><li> Manipolare CLE immagini della sonda con la mano dell&#39;operatore per contatto diretto en face delle regioni di interesse. Per sezionamento ottico delle regioni di interesse, delicatamente aumentare e diminuire la pressione alla sonda di imaging restando a contatto diretto. <ol><li> Per raggiungere i tumori situati nella vescica anteriore, uno standard Albarran ponte può facilitare deflessione della sonda di imaging per il contatto diretto con la regione di interesse (Figura 2C). </li></ol></li><li> Regioni comuni di interesse tumore papillare, non papillare del tumore, la transizione tra mucosa normale e tumore, e chiazze eritematose, che possono essere esposte utilizzando via endovesico o la somministrazione per via endovenosa di fluoresceina. Fluoresceina endovenosa è necessaria per l&#39;imaging del letto resezione, uretra prostatica e uretra peniena. </li><li> Mentre la sonda esegue la scansione di immagini regione di interesse, di registrare le immagini per le analisi future. Nota generale morfologia cellulare, confine, l&#39;organizzazione, e la presenza di neo-angiogenesi. </li><li> Al termine dell&#39;imaging, rimuovere CLE immagini sonda dal canale di lavoro. </li><li> Se lo si desidera, ottenere freddo tazza biopsie dalle regioni corrispondenti di interesse che sono stati analizzati da CLE. Utilizzare marcature cauterio come punti di riferimento per la co-registrazione delle aree sotto forma di immagini che vengono sottoposti a biopsia. </li><li> Completa TURBT per routine. Nei pazienti che hanno ricevuto per via endovenosa di fluoresceina, considerare l&#39;utilizzo di resettoscopi flusso continuo per migliorare la visualizzazione durante la resezione, come fluoresceina viene escreto dal rene in vescica di circa 5 minuti dopo la somministrazione per via endovenosa. </li><li> Recupera le registrazioni di immagine salvati da confocale processore e conduct analisi dell&#39;immagine. </li></ol>

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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Raggiungere e mantenere solidi contatti en face tra la sonda di imaging e la mucosa della vescica è il passo più importante per acquisire una qualità ottimale dell&#39;immagine. C&#39;è approssimativamente 3-5 apprendimento paziente di sviluppare l&#39;abilità di manipolare la sonda imaging e tenere la sonda costante durante l&#39;acquisizione dell&#39;immagine. Inoltre, poiché questo procedimento è condotto in vivo, i movimenti del paziente (cioè respiratoria) e pulsazioni vascolari possono i...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Cellvizio Serie 100 </td><td> Mauna Kea Technologies </td><td> Serie 100 </td><td> Include processore confocale e LSU: F400-v2 a 488 nm </td></tr><tr><td> Cellvizio confocale Miniprobe </td><td> Mauna Kea Technologies </td><td> Gastroflex UHD </td><td></td></tr><tr><td> AK-FLUOR 10% </td><td> Akorn, Inc. </td><td> NDC 17478-253-10 </td><td></td></tr></tbody></table>

probe-based endomicroscopy laser confocale del tratto urinario: la tecnica

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based laser confocale endomicroscopy (CLE) è una tecnologia emergente di imaging ottico che permette in tempo reale in microscopia in vivo di superfici mucose durante il normale endoscopia. Con applicazioni attualmente nelle vie respiratorie e gastrointestinali 1, 2-6 CLE è stato analizzato nel tratto urinario per la diagnosi del cancro della vescica. 7-10 morfologia cellulare e microarchitettura del tessuto può essere risolto con risoluzione scala micron in tempo reale, oltre a l&#39;imaging dinamico del sistema vascolare normale e patologico. 7 La sonda basata CLE sistema (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, Francia) costituita da una sonda a fibre ottiche di imaging riutilizzabile accoppiato ad un&#39;unità di scansione laser 488 nm. La sonda di imaging viene inserito nei canali di lavoro standard, endoscopi flessibili e rigidi. Un endoscopio basato CLE sistema (Optiscan, Australia), in cui il functionalit endomicroscopy confocaley è integrato sulla endoscopio, è utilizzato anche nel tratto gastrointestinale. Data la portata diametro più grande, tuttavia, applicazione nel tratto urinario è attualmente limitato all&#39;uso ex vivo. 11 acquisizione immagine confocale viene fatto attraverso il contatto diretto della sonda imaging con il tessuto bersaglio e registrata come sequenze video. Come nel tratto gastrointestinale, endomicroscopy del tratto urinario richiede un exogenenous contrasto agente più comunemente fluoresceina, che può essere somministrato per via endovenosa o per via endovescicale. Somministrazione endovescicale è un metodo consolidato per introdurre agenti farmacologici localmente con minima tossicità sistemica che è unico per il tratto urinario. Fluoresceina rapidamente le macchie della matrice extracellulare e ha un profilo di sicurezza. Imaging 12 sonde di diversi diametri garantire la compatibilità con endoscopi di calibro diversi. Fino ad oggi, 1,4 e 2,6 millimetri sonde sono state valutate con il flessibile e ricistoscopia gid 10. recente disponibilità di un &lt;1 mm di imaging sonda 13 si apre la possibilità di CLE nel tratto urinario superiore durante ureteroscopia. Cistoscopia a fluorescenza (cioè diagnosi fotodinamica) e l&#39;imaging a banda stretta sono ulteriori endoscopio a base di modalità di imaging ottico 14 che possono essere combinati con CLE per raggiungere l&#39;imaging multimodale del tratto urinario. In futuro, CLE può essere accoppiato con mezzi di contrasto molecolari come peptidi contrassegnati in modo fluorescente 15 e anticorpi per l&#39;imaging endoscopico di processi di malattia con specificità molecolare.

CLE immagini sono salvate come file di sequenze di video in scala di grigi a 12 fotogrammi al secondo. L&#39;interpretazione dell&#39;immagine avviene in tempo reale e possono essere utilizzati per influenzare il processo decisionale clinico in un protocollo sperimentale. Analisi offline, che include la revisione della sequenza video, un&#39;ulteriore elaborazione delle immagini come mosaicatura, 7 e confronto con standard di patologia, è importante durante la fase di apprendimento associata con la tecnologia...

Sonda basata endomicroscopy laser confocale consente in tempo reale la microscopia del tratto urinario umano durante cistoscopia, fornendo dinamico, imaging intravitale di stati patologici come il cancro della vescica con risoluzione cellulare. Endomicroscopy può aumentare l&#39;accuratezza diagnostica di livello luce bianca endoscopia e fornire orientamenti immagine intraoperatoria per migliorare la resezione chirurgica.

Probe-based Endomicroscopy laser confocale del tratto urinario: La Tecnica

L'endomicroscopia laser confocale (CLE) basata su sonda è una tecnologia di imaging ottico emergente che consente la microscopia in vivo in tempo reale delle superfici mucose...

Lo scopo del seguente esperimento è dimostrare la microscopia in vivo mediante microscopia endoscopica confocale laser con sonda in un paziente sottoposto a resezione transuretrale di un tumore vescicale. Questo obiettivo viene raggiunto innanzitutto utilizzando la cistoscopia a luce bianca per visualizzare l'intero urotelio della vescica e identificare eventuali lesioni mucose anomale o sospette. Come secondo passaggio, viene instillato un agente di contrasto per via intravesicale, fornendo il contrasto fluorescente necessario per la visualizzazione con il microscopio endoscopico confocale laser. Nel terzo passaggio, viene eseguita la microscopia in vivo di ciascuna area di interesse, rilevando le caratteristiche microarchitettoniche cellulari e vascolari del tessuto.In definitiva, i risultati ottenuti mediante microscopia in vivo possono essere confrontati con l'analisi istopatologica dei campioni bioptici delle regioni di interesse. A dimostrare la procedura sarà il dottor Joseph Leal, chirurgo urologo, che ha sviluppato l'applicazione della microscopia endoscopica laser a confocola basata su sonda per il tratto urinario in sala operatoria. Una volta posizionato il soggetto in p

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In molte situazioni biologici e clinici è vantaggioso per lo studio dei processi cellulari, come si evolvono nel loro microambiente nativo. Qui si descrive il montaggio e l'uso di un basso costo in fibra ottica microscopio in grado di fornire immagini in tempo reale in coltura cellulare, studi su animali e studi clinici del paziente.

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Visualizzazione dell'infezione delle vie urinarie in un modello murino utilizzando la bioluminescenza

Questo video mostra la visualizzazione di batteri nel tessuto vescicale deparaffinizzato di un paziente infetto dal tratto urinario. La sonda marcata in fluorescenza ibridata con RNA ribosomiale batterico 16s rivela i batteri associati ai tessuti e la loro distribuzione, fornendo preziose informazioni spaziali sulla loro densità all'interno del campione.

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Viene descritto l'assemblaggio e l'uso di un microendoscopio multimodale in grado di co-registrare i dati dell'immagine del tessuto superficiale con parametri fisiologici del tessuto tra cui la concentrazione di emoglobina, la concentrazione di melanina e la saturazione di ossigeno. Questa tecnica può essere utile per valutare la struttura e la perfusione dei tessuti e può essere ottimizzata per le esigenze individuali dello sperimentatore.

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Questa tecnica viene descritto un processo di screening efficace per la valutazione dei batteri specifici agenti imaging ottici all'interno di ex vivo tessuto polmonare umano, mediante microscopia a fluorescenza confocale fibrata per la rapida identificazione di piccola molecola chimica sonda-candidati con potenziale traducibili.

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Questo protocollo è per il rilevamento imparziale di batteri associati ai tessuti nelle biopsie dei pazienti da parte di 16S rRNA nell'ibridazione situ e microscopia confocale.

Rilevamento di batteri residenti nei tessuti nelle biopsie della vescica mediante 16S rRNA Fluorescence In Situ Hybridization

Questo manoscritto descrive la somministrazione intravescicale di batteri uropatogeni con un operone lux per indurre un'infezione del tratto urinario nei topi e la successiva analisi longitudinale in vivo della carica batterica utilizzando l'imaging a bioluminescenza.

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Presentiamo un protocollo per l'utilizzo della microscopia laser confocale a fibre ottiche (CLM) per studiare in modo non invasivo la distribuzione spazio-temporale dei liposomi nell'occhio dopo iniezione subcongiuntivale.

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