Name: Il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del Coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Impara un metodo standardizzato per la riparazione osteocondrale con cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina nel ginocchio del coniglio. Questa tecnica sperimentale facilita l'analisi macroscopica del tessuto rigenerato.

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Questo progetto è stato finanziato dalla German Research Association (concessione HE 4578/3-1) e in parte dal 7 ° PQ UE-Progetto &quot;GAMBA&quot; NMP3-SL-2010-245993.

A. Preparazione di un coniglio dei donatori per l&#39;isolamento di cellule staminali mesenchimali (Chirurgia Camera) <ol><li> Le cellule sono isolate dal maschio Nuova Zelanda bianchi (NZW) conigli all&#39;età di 4 mesi e di circa 3 kg di peso corporeo. </li><li> Indurre l&#39;anestesia con propofol (10 mg / kg di peso corporeo iv) e il sacrificio con sodio pentobarbital (100 mg / kg di peso corporeo iv). </li><li> Shave pelliccia da arti posteriori, schiena e pancia con un tagliatore elettrico e aspirare la pelliccia. </li><li> Disinfettare accuratamente la zona rasata con il 70% di etanolo. </li><li> Utilizzare pinze smussato, forbici affilate (o bisturi) e frese per il tessuto osseo e legamenti. </li><li> Fare un&#39;incisione lungo la superficie craniale della gamba e del polpaccio. </li><li> Riflettere cute e del tessuto sottocutaneo da una dissezione tagliente o contundente. </li><li> Distinti muscoli e legamenti di tibia e del femore. Mantenere tagli come vicino all&#39;osso possibile per fare una dissezione pulito. Non separare femore dalla tibia in questo momento. </li><li> Tagliare through l&#39;anca per separare la testa del femore dalla dell&#39;acetabolo. </li><li> Elevare il complesso tibio-femorale. </li><li> Utilizzare il bisturi per togliere qualsiasi tessuto molle restante dalle ossa o strofinare le ossa con i tessuti panno sterile. A questo punto, femore e tibia sono ancora connessi. </li><li> Rimuovere rotula da taglio, quindi tagliare ginocchio legamenti articolari alle ossa distinte infine. </li><li> Spray ossa separato con il 70% di etanolo, lasciare asciugare e mettere ogni osso in un tubo da centrifuga da 50 ml con mezzo di coltura cellulare (DMEM + 1% di penicillina / streptomicina (Pen / Strep)) per mantenerli umidi. </li><li> Ora passare sotto una cultura cappa a flusso laminare sterile cella. </li></ol> B. Flushing del Coniglio MSC da Ossa e di espansione (Cell Culture Hood) <ol><li> Raccogliere le ossa da tubi e metterli in 150 millimetri piatti utilizzando pinze sterili. </li><li> Rimuovere entrambi osso finisce con una sega sterile e pezzi trasferirsi a New mm piatti 150. </li><li> Riempire una siringa da 10 ml con medium (DMEM), collegare un ago di calibro 18 e inserire nell&#39;apertura del midollo osseo. </li><li> Poi, sciacquare cavità midollare con il mezzo per svuotare il midollo osseo nel piatto. Successivamente sciacquare dall&#39;altra estremità, se possibile. Se necessario, segare più dalle estremità. Se osso dovesse rompere, basta lavare l&#39;interno dell&#39;osso. </li><li> Aspirare sospensione medie cella nella siringa e sciacquare il midollo osseo ripetutamente fino sospensione è libera fluttuante attraverso il midollo osseo cavità e nessuna ulteriore midollo osseo coaguli compaiono. </li><li> Una volta che il midollo osseo è stato raccolto da tutte le ossa, disturbare i ciuffi di midollo passando attraverso un ago di calibro 18: Riempire una siringa con ago e forza fuori in mezzo. </li><li> Successivamente, filtrare la sospensione attraverso un filtro cella in un tubo da 50 ml. Al fine di prevenire la perdita di cellule, lavare coltura piatto 2x con 10 ml di mezzo e filtrare pure. </li><li> Centrifugare sospensione a 500 xg per 5 min a RT. </li><li> Rimuovere il surnatante e risospendere cella pellet in 10 ml di terreno (DMEM + 1% Pen / Strep). </li><li> Globuli separati da cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) e cellule staminali mesenchimali (MSC) usando una soluzione Biocoll separazione. </li><li> Riempire 5 ml di Biocoll Separare soluzione in una provetta da 15 ml e aggiungere cautamente 5 ml di sospensione cellulare in cima e centrifugare a 800 xg per 20 min a TA (senza freno). </li><li> Possibili risultati vedi Figura 1: Essendo più denso rispetto Biocoll, globuli rossi sedimenti sul fondo, mentre le cellule staminali mesenchimali PBMC e rimangono all&#39;interfaccia. </li><li> Rimuovere con attenzione l&#39;interfaccia in un tubo da 15 ml e lavare con 5 ml di PBS. </li><li> Centrifugare come descritto al punto 22, risospendere in 5 ml di PBS e ripetere 2-3x. </li><li> Poi, centrifugare nuovamente a 350 xg per 10 min a TA (con freno). </li><li> Risospendere in 10 ml di mezzo e contare le cellule in un emocitometro. </li><li> Cellule piastra ad una densità di semina iniziale di circa 5 x 10 6 a 150 millimetri piatti. </li><li> Dopo 2-3 giorni, rispostare cellule non aderenti. Potrebbe essere necessario lavare con PBS prima al fine di rimuovere i detriti cellulari. Aggiungere mezzo fresco completo (DMEM + 10% di siero fetale di vitello (FCS) + 1% Pen / Strep) dopo. </li><li> Nutrire le cellule ogni 3-4 giorni (Figura 2). </li><li> Dopo 5-10 giorni, passaggio alle cellule per la prima volta. </li></ol> C. Preparazione di coaguli di fibrina in vitro <ol><li> Al giorno di impianto, rilasciate da cellule aderenti beute / stoviglie da 3 min-esposizione al 0,25% tripsina-EDTA. Arrestare tripsinizzazione aggiungendo mezzo completo. </li><li> Distribuire le cellule in una provetta da 50 falco e lavare due volte con PBS. </li><li> Determinare la vitalità cellulare e numeri blu tripano colorazione. </li><li> Aggiungi 50.000 cellule / provetta e raccogliere pellet per centrifugazione a 500 xg per 5 minuti a temperatura ambiente. Preparare una mastermix per almeno un altro coagulo come necessario. </li><li> Risospendere il pellet di cellule in 17 ml di PBS e mescolare 25 ml di componente di fibrinogeno di TISSUCOL-Kit con questo 17 microlitri di sospensione MSC. </li><li> Prendete un piatto sterile con fori predisposti (3x3.6 mm), in conformità ai fori in vivo (Figura 3). </li><li> Prima, inoculare 4 microlitri soluzione di trombina (500 UI / ml) in un foro, seguita da aggiunta di 42 microlitri immediato fibrinogeno-cell-sospensione e nuovo 4 microlitri soluzione di trombina in cima. Non mescolare la sospensione per evitare la coagulazione nella punta della pipetta. Prima, il volume di 50 microlitri della pipettato fibrinogeno-cell-sospensione sporgerà il bordo dei fori pre-forati senza fondere a causa della tensione superficiale. Tuttavia, dopo la completa coagulazione (dopo 60 min) il coagulo si contrae e si inserisce nel pre-foro. </li><li> Rimuovere il coagulo con cura utilizzando una pinza smussato e posto in una provetta con PBS. Preparare 2 coaguli / animali. </li><li> Prendete i coaguli in sala operatoria. </li></ol> D. L&#39;impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina<ol><li> Indurre l&#39;anestesia di coniglio (NZW, maschio, 3,5-4,0 kg di peso corporeo, 5-6 mesi di età) per iniezione endovenosa di propofol (10 mg / kg di peso corporeo). </li><li> Shave il ginocchio da operare con un tagliatore elettrico e vuoto la pelliccia. Tutte le procedure denominate prima vengono eseguite in una camera di preparazione intervento chirurgico per evitare la contaminazione dell&#39;ambiente sterile della sala operatoria. </li><li> Dopo l&#39;intubazione, mantenere l&#39;anestesia con 1.5 mg / kg / min propofol e 0,05 mg / kg / min fentanil per via endovenosa. Monitorare l&#39;anestesia utilizzando capnography, pulsossimetria e la frequenza cardiaca. </li><li> Disinfettare il ginocchio rasato accuratamente e coprire il resto del coniglio con una medicazione sterile. </li><li> Palpare la rotula ed eseguire una incisione cutanea mediale della rotula. </li><li> Aprire l&#39;articolazione del ginocchio da una artrotomia mediale parapatellare in condizioni sterili. Cercate di evitare di tagliare i piccoli vasi sanguigni superficiali. </li><li> Spostare la rotula lateralmente (figura 4). </li><li> Dopo INSPEction dell&#39;articolazione del ginocchio per le lesioni cartilaginee concomitanti o anomalie comuni, creare due difetti osteocondrali (di profondità 3 mm figura a forma di otto) nel solco trocleare con aria sterile trapano elettrico di funzionamento (3,6 millimetri di diametro) con un dispositivo di arresto (Figura 5). </li><li> Pulire i difetti e sciacquare con soluzione salina sterile. </li><li> Prima dell&#39;impianto, riempire 20 pl di colla di fibrina nei difetti e distribuirli uniformemente sul fondo del difetto. </li><li> Poi impiantare i coaguli inserito a pressione nella figura difetto a forma di otto. </li><li> Dopo la coagulazione, riposizionare la rotula nel solco trocleare e piegare e distendere il ginocchio un paio di volte. </li><li> Spostare lateralmente, ancora una volta la rotula e verificare se il fibrinogeno-cellulari-coaguli sono ancora al loro posto. </li><li> Sostituire nuovamente la rotula e terminare l&#39;operazione con chiusura della ferita a strati con bottone singolo suture (4-0 Vicryl) e una sutura cutanea continuo (4-0 Monocryl) (entrambe con sutura riassorbibilemateriale). </li><li> Infine, sigillare la ferita con uno spray medicazione permeabile al vapore acqueo. </li><li> Per assistenza post-operatoria, la ferita viene controllato giorno per 7 giorni. I conigli ricevono per la post-operatoria analgesia Carprofen 4 mg / kg sc ogni 24 ore (per 4 giorni) e Buprenorphin 0,03 mg / kg sc ogni 12 ore (per 2,5 giorni). Una stabilizzazione del ginocchio (es. medicazione) non è necessaria. </li></ol>

<ol><li>Kon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+nano-composite+multilayered+biomaterial+for+osteochondral+regeneration%3A+a+pilot+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel nano-composite multilayered biomaterial for osteochondral regeneration: a pilot clinical trial.</a> The American Journal of Sports Medicine. 39, 1180-1190 (2011).</li>
<li>Kon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orderly+osteochondral+regeneration+in+a+sheep+model+using+a+novel+nano-composite+multilayered+biomaterial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%3A+Official+Publication+of+the+Orthopaedic+Research+Society%22%5BJournal%5D)">Orderly osteochondral regeneration in a sheep model using a novel nano-composite multilayered biomaterial.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 28, 116-124 (2010).</li>
<li>Hangody, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+osteochondral+grafting--technique+and+long-term+results%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">Autologous osteochondral grafting--technique and long-term results.</a> Injury. 39, 32-39 (2008).</li>
<li>Marcacci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arthroscopic+autologous+osteochondral+grafting+for+cartilage+defects+of+the+knee%3A+prospective+study+results+at+a+minimum+7-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Arthroscopic autologous osteochondral grafting for cartilage defects of the knee: prospective study results at a minimum 7-year follow-up.</a> The American Journal of Sports Medicine. 35, 2014-2021 (2007).</li>
<li>Ochs, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+articular+cartilage+and+subchondral+bone+after+bone+grafting+and+matrix-associated+autologous+chondrocyte+implantation+for+osteochondritis+dissecans+of+the+knee%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Remodeling of articular cartilage and subchondral bone after bone grafting and matrix-associated autologous chondrocyte implantation for osteochondritis dissecans of the knee.</a> The American Journal of Sports Medicine. 39, 764-773 (2011).</li>
<li>Aurich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+chondrocyte+transplantation+by+the+sandwich+technique.+A+salvage+procedure+for+osteochondritis+dissecans+of+the+knee%5BTitle%5D)+AND+%22Unfallchirurg%22%5BJournal%5D)">Autologous chondrocyte transplantation by the sandwich technique. A salvage procedure for osteochondritis dissecans of the knee.</a> Unfallchirurg. 110, 176-179 (2007).</li>
<li>Williams, R. J. 3rd, Ranawat, A. S., Potter, H. G., Carter, T., Warren, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fresh+stored+allografts+for+the+treatment+of+osteochondral+defects+of+the+knee%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery.+American+Volume%22%5BJournal%5D)">Fresh stored allografts for the treatment of osteochondral defects of the knee.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 89, 718-726 (2007).</li>
<li>Szerb, I., Hangody, L., Duska, Z., Kaposi, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaicplasty%3A+long-term+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Hosp.+Jt.+Dis%22%5BJournal%5D)">Mosaicplasty: long-term follow-up.</a> Bull. Hosp. Jt. Dis. 63, 54-62 (2005).</li>
<li>Brittberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+deep+cartilage+defects+in+the+knee+with+autologous+chondrocyte+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologous chondrocyte transplantation.</a> N. Engl. J. Med. 331, 889-895 (1994).</li>
<li>Peterson, L., Vasiliadis, H. S., Brittberg, M., Lindahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+chondrocyte+implantation%3A+a+long-term+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous chondrocyte implantation: a long-term follow-up.</a> Am. J. Sports Med. 38, 1117-1124 (2010).</li>
<li>Gomoll, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subchondral+bone+in+articular+cartilage+repair%3A+current+problems+in+the+surgical+management%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg.+Sports+Traumatol.+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">The subchondral bone in articular cartilage repair: current problems in the surgical management.</a> Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 434-447 (2010).</li>
<li>Steinhagen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+osteochondritis+dissecans+of+the+femoral+condyle+with+autologous+bone+grafts+and+matrix-supported+autologous+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Orthop%22%5BJournal%5D)">Treatment of osteochondritis dissecans of the femoral condyle with autologous bone grafts and matrix-supported autologous chondrocytes.</a> Int. Orthop. 34, 819-825 (2010).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+large+articular+cartilage+defects+with+implants+of+autologous+mesenchymal+stem+cells+seeded+into+beta-tricalcium+phosphate+in+a+sheep+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Repair of large articular cartilage defects with implants of autologous mesenchymal stem cells seeded into beta-tricalcium phosphate in a sheep model.</a> Tissue Eng. 10, 1818-1829 (2004).</li>
<li>Centeno, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+knee+cartilage+volume+in+degenerative+joint+disease+using+percutaneously+implanted%2C+autologous+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Physician%22%5BJournal%5D)">Increased knee cartilage volume in degenerative joint disease using percutaneously implanted, autologous mesenchymal stem cells.</a> Pain Physician. 11, 343-353 (2008).</li>
<li>Niederauer, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+multiphase+implants+for+repair+of+focal+osteochondral+defects+in+goats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Evaluation of multiphase implants for repair of focal osteochondral defects in goats.</a> Biomaterials. 21, 2561-2574 (2000).</li>
<li>Nagura, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+osteochondral+defects+with+a+new+porous+synthetic+polymer+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone.+Joint+Surg.+Br%22%5BJournal%5D)">Repair of osteochondral defects with a new porous synthetic polymer scaffold.</a> J. Bone. Joint Surg. Br. 89, 258-264 (2007).</li>
<li>Schlichting, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+scaffold+stiffness+on+subchondral+bone+and+subsequent+cartilage+regeneration+in+an+ovine+model+of+osteochondral+defect+healing%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Influence of scaffold stiffness on subchondral bone and subsequent cartilage regeneration in an ovine model of osteochondral defect healing.</a> The American Journal of Sports Medicine. 36, 2379-2391 (2008).</li>
<li>Schagemann, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-laden+and+cell-free+biopolymer+hydrogel+for+the+treatment+of+osteochondral+defects+in+a+sheep+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Cell-laden and cell-free biopolymer hydrogel for the treatment of osteochondral defects in a sheep model.</a> Tissue Engineering. Part A. 15, 75-82 (2009).</li>
<li>Vogt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+stable+expression+of+BMP2+in+fibrin+clots+on+the+remodelling+and+repair+of+osteochondral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of the stable expression of BMP2 in fibrin clots on the remodelling and repair of osteochondral defects.</a> Biomaterials. 30, 2385-2392 (2009).</li>
<li>Schillinger, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fibrin+glue+composition+as+carrier+for+nucleic+acid+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">A fibrin glue composition as carrier for nucleic acid vectors.</a> Pharm. Res. 25, 2946-2962 (2008).</li>
<li>Ahmed, T. A., Giulivi, A., Griffith, M., Hincke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+glues+in+combination+with+mesenchymal+stem+cells+to+develop+a+tissue-engineered+cartilage+substitute%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Fibrin glues in combination with mesenchymal stem cells to develop a tissue-engineered cartilage substitute.</a> Tissue Engineering. Part A. 17, 323-335 (2011).</li>
<li>Haleem, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Clinical+Use+of+Human+Culture-Expanded+Autologous+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+Transplanted+on+Platelet-Rich+Fibrin+Glue+in+the+Treatment+of+Articular+Cartilage+Defects%3A+A+Pilot+Study+and+Preliminary+Results%5BTitle%5D)+AND+%22Cartilage%22%5BJournal%5D)">The Clinical Use of Human Culture-Expanded Autologous Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Transplanted on Platelet-Rich Fibrin Glue in the Treatment of Articular Cartilage Defects: A Pilot Study and Preliminary Results.</a> Cartilage. 1, 253-261 (2010).</li>
<li>Pape, D., Filardo, G., Kon, E., van Dijk, C. N., Madry, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease-specific+clinical+problems+associated+with+the+subchondral+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol.+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Disease-specific clinical problems associated with the subchondral bone.</a> Knee Surg Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 448-462 (2010).</li>
<li>Shirazi, R., Shirazi-Adl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+biomechanics+of+articular+cartilage+of+human+knee+joint%3A+effect+of+osteochondral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Computational biomechanics of articular cartilage of human knee joint: effect of osteochondral defects.</a> Journal of Biomechanics. 42, 2458-2465 (2009).</li>
<li>Jorgensen, C., Gordeladze, J., Noel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Engineering+through+autologous+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Tissue Engineering through autologous mesenchymal stem cells.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 15, 406-410 (2004).</li>
<li>Chen, F. H., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+arthritic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res.+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in arthritic diseases.</a> Arthritis Res. Ther. 10, 223(2008).</li>
<li>Le Blanc, K., Tammik, C., Rosendahl, K., Zetterberg, E., Ringden, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+expression+and+immunologic+properties+of+differentiated+and+undifferentiated+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Hematol%22%5BJournal%5D)">HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells.</a> Exp. Hematol. 31, 890-896 (2003).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Negli ultimi anni, la possibilità di trattare complesse articolari difetti osteocondrali - come ad esempio quelli derivanti da osteocondrite dissecante, osteonecrosi e traumi - con approcci di ingegneria dei tessuti è diventato sempre più attraente. Nelle entità patologiche precedentemente menzionati, danno tissutale estende all&#39;osso subcondrale e coinvolge due tessuti caratterizzati da differenti capacità curative intrinseche 1. Vi è un interesse crescente per il ruolo di osso subcondrale per i processi ...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Biochrom AG</td><td>F 0415</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>PAN Biotech GmbH</td><td>0401</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Biochrom AG</td><td>A 2210</td><td>1.000 unità/10 &amp;mu;g/&amp;mu;l in NaCl 0,9%</td></tr><tr><td>PBS Dulbecco (1X)</td><td>Biochrom AG</td><td>L1815</td><td></td></tr><tr><td>Etilene (70%)</td><td>Merck KGaA</td><td>410230</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di Blu di Tripano (0,4%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Biocoll Soluzione di Separazione</td><td>Biochrom AG</td><td>L6115</td><td>Soluzione isotonica Densità: 1,077 g/ml</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0,05%</td><td>Invitrogen GmbH</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>DeltaSelectGmBH</td><td>1819340</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di NaCl (0,9%)</td><td>BBraun</td><td>8333A193</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe (Injekt)</td><td>BBraun</td><td>4606108V</td><td></td></tr><tr><td>Aghi (Sterican)</td><td>BBraun</td><td>4657519</td><td></td></tr><tr><td>Pinze (smussate/appuntite)</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>Feather Safety Razor Co</td><td>02.001.30.022</td><td></td></tr><tr><td>Pipette per ricerca</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tagliaossa</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari 100 mm/150 mm</td><td>TPP AG</td><td>93100/93150</td><td>Superficie di crescita 60,1 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;/147,8 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>Flaconi per colture cellulari 25/75 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>TPP AG</td><td>90025/90075</td><td>25 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;, 75 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>Tubi da centrifuga (50 ml)</td><td>TPP AG</td><td>91050</td><td>Sterilizzati con raggi gamma</td></tr><tr><td>Incubatore CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Forma Scientific Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cappa a flusso laminare per colture cellulari Hera Safe</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sega sterile</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga Megafuge 2.0 R</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro</td><td>Brand GmbH+Co KG</td><td>717810</td><td>Neubauer</td></tr><tr><td>Trapano pneumatico</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit TISSUCOL 1,0 ml Immuno</td><td>Baxter</td><td>2546648</td><td></td></tr><tr><td>Fili (4-0 Monocryl, 4-0 Vicryl)</td><td>Ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medicazione spray (OpSite)</td><td>Smith&amp;amp;Nephew</td><td>66004978</td><td>Permeabile al vapore acqueo</td></tr></tbody></table>

il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina

Treatment of Osteochondral Defects in the Rabbit's Knee Joint by Implantation of Allogeneic Mesenchymal Stem Cells in Fibrin Clots

Il trattamento dei difetti osteocondrali articolari ha rappresentato una sfida per i medici da molti anni. La migliore comprensione delle interazioni tra cartilagine articolare e osso subcondrale negli ultimi anni ha portato a un crescente interesse nel ripristino dell'intera unità osteocondrale. Rispetto alle lesioni condrali, la rigenerazione dei difetti osteocondrali è molto più complessa e costituisce una sfida chirurgica e terapeutica notevolmente maggiore. Il tessuto danneggiato non comprende soltanto lo strato superficiale di cartilagine, ma anche l'osso subcondrale. Per danni profondi, di tipo osteocondrale, come quelli che si verificano ad esempio nell'osteochondrosis dissecans, è necessario sostituire l'intera profondità del difetto al fine di ripristinare la superficie articolare 1. Le procedure terapeutiche idonee devono tenere conto di questi due tessuti diversi e del loro diverso potenziale intrinseco di guarigione 2. Negli ultimi decenni, diverse opzioni di trattamento chirurgico si sono sviluppate e sono già state affermate a livello clinico 3-6.
I trapianti osteocondrali autologhi o allogenici consistono in cartilagine articolare e osso sottocartilagineo e permettono la sostituzione dell'intera unità osteocondrale. I difetti vengono riempiti con innesti osteocondrali cilindrici che mirano a fornire una superficie congruente rivestita da cartilagine ialina 3,7,8. Gli svantaggi includono la quantità limitata di innesti disponibili, la morbidità del sito donatore (per innesti autologhi) e l'incongruenza della superficie; pertanto, l'applicazione di questo metodo è particolarmente limitata nei difetti di grandi dimensioni.
Nuovi approcci nel campo dell'ingegneria tissutale hanno aperto prospettive promettenti per la terapia rigenerativa osteocondrale. L'impianto di condrociti autologhi ha rappresentato il primo approccio biologico basato su cellule per il trattamento di lesioni cartilaginee a tutto spessore ed è ora affermato a livello mondiale con buoni risultati clinici anche a 10-20 anni dall'impianto 9,10. Tuttavia, ad oggi, questa tecnica non è adatta al trattamento di tutti i tipi di lesioni, come ad esempio difetti profondi che coinvolgono l'osso subcondrale 11.
La tecnica a sandwich combina l'innesto osseo con gli approcci attuali nell'ingegneria tissutale 5,6. Questa combinazione sembra in grado di superare i limiti osservati negli innesti osteocondrali da soli. Dopo l'innesto osseo autologo nell'area del difetto subcondrale, una membrana seminata con condrociti autologhi viene suturata al di sopra e facilita l'allineamento della topologia dell'innesto con il sito lesivo. Ovviamente, la ricostruzione ossea precedente richiede un tempo chirurgico aggiuntivo e spesso persino un intervento supplementare. Inoltre, ad oggi, mancano dati a lungo termine 12.
L'ingegneria tissutale senza innesto osseo aggiuntivo mira a ripristinare la struttura complessa e le proprietà della cartilagine articolare nativa attraverso il potenziale condrogenico e osteogenico delle cellule trapiantate. Tuttavia, anche in questo caso, è di solito solo il tessuto cartilagineo a essere più o meno rigenerato. Un danno osteocondrale aggiuntivo richiede un trattamento specifico ulteriore. Per ottenere una rigenerazione della struttura multistratificata dei difetti osteocondrali, prodotti ingegnerizzati tridimensionali seminati con cellule autologhe/allogeneiche potrebbero fornire una buona capacità rigenerativa 11.
Oltre ai condrociti autologhi, le cellule staminali mesenchimali (MSC) sembrano rappresentare un'alternativa interessante per lo sviluppo di un tessuto cartilagineo a spessore completo. In numerosi studi preclinici in vitro e in vivo, le cellule staminali mesenchimali hanno dimostrato un eccellente potenziale rigenerativo del tessuto 13,14. Un vantaggio importante delle cellule staminali mesenchimali, specialmente per il trattamento dei difetti osteocondrali, è la loro capacità di differenziarsi sia in osteociti che in condrociti. Pertanto, esse potrebbero consentire una rigenerazione multistrato del difetto.
Negli ultimi anni, diversi scaffold con potenziale rigenerativo osteocondrale sono stati sviluppati e valutati, ottenendo risultati preliminari promettenti 1,15-18. Inoltre, la colla di fibrina come veicolo cellulare si è rivelata una delle tecniche preferite nel ripristino sperimentale della cartilagine ed è già stata utilizzata con successo in diversi studi sugli animali 19-21 e persino nei primi studi sull'uomo 22.
Il seguente protocollo illustrerà una tecnica sperimentale per l'isolamento di cellule staminali mesenchimali dal midollo osseo di un coniglio, per la successiva proliferazione in coltura cellulare e per la preparazione di un modello standardizzato in vitro di coaguli fibrinici cellulari. Infine, verrà descritta una tecnica per l'impianto di coaguli fibrinici cellulari preformati in difetti osteocondrali artificiali dell'articolazione del ginocchio del coniglio.

La tecnica chirurgica descritta permette un isolamento di successo e impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in un difetto osteocondrale artificiale. Il setup sperimentale ha comportato una integrazione dell&#39;impianto nella cartilagine circostante. Il difetto è stato riempito da riparazione dei tessuti con proprietà biomeccaniche simili e durata simile rispetto alla cartilagine circostante. La fibrina-cell-coagulo è stato preparato in vitro su un piatto sterile con...

Una tecnica sperimentale per il trattamento dei difetti osteocondrali nel ginocchio del coniglio è descritto. L&#39;impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in difetti osteocondrali fornisce una promettente sviluppo nel campo dell&#39;ingegneria dei tessuti. La preparazione di fibrina-cell-coaguli<em&gt; In vitro</em&gt; Offre un metodo standardizzato per l&#39;impianto.

Il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del Coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina

Il trattamento dei difetti articolari osteocondrali rappresenta da molti anni una sfida per i medici. Una migliore comprensione delle interazioni dell'articolazione...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare un metodo standardizzato per la ricerca sperimentale sulle cellule staminali nel campo della riparazione osteocondrale. Ciò viene ottenuto innanzitutto isolando cellule staminali mesenchimali dal midollo osseo di coniglio. Nel secondo passaggio, le cellule staminali isolate vengono coltivate per favorirne la proliferazione.Successivamente, i coaguli cellulari di fibrina vengono prodotti in vitro. Infine, i coaguli cellulari di fibrina predefiniti vengono impiantati in difetti osteocondrali artificiali nell'articolazione del ginocchio del coniglio. Alla fine, dopo 12 settimane in vivo, è possibile eseguire un'analisi macroscopica del ginocchio, nella quale il tessuto di riparazione mostra una superficie omogenea e integra con una consistenza solida.Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia delle lesioni cartilaginee in un contesto sperimentale animale, poiché permettono l'analisi in vivo dell'integrazione e della capacità rigenerativa delle cellule staminali mesenchimali allogeniche per il trattamento dei danni alla cartilagine. In sala operatoria, utilizzare un paio di forbici elettriche per rasare il pelo dalle zampe posteriori, dalla schiena e dall'addome di un coniglio eutanasato, aspirando contemporaneamente il pelo dopo aver disinfettato accuratamente la zona rasata con etanolo al 70%. Praticare un'incisione lungo la superficie craniale della gamba e del polpaccio, quindi riflettere la cute e il tessuto sottocutaneo mediante dissezione affilata.Successivamente, separare i muscoli e i legamenti dalla tibia e dal femore, effettuando i tagli il più vicino possibile all'osso per ottenere una dissezione pulita. Quindi tagliare attraverso l'articolazione dell'anca per separare la testa del femore dall'acetabolo ed elevare il complesso tibio-femorale. A questo punto, utilizzare la lama del bisturi per raschiare via eventuali tessuti molli residui dalle ossa.Quindi rimuovere la rotula e i legamenti dell'articolazione del ginocchio per separare definitivamente le ossa della gamba. Spruzzare le ossa separate con etanolo al 70% dopo che si sono asciugate all'aria. Collocare ciascuna osso in provette centrifughe separate da 50 millilitri contenenti mezzo di coltura cellulare per mantenerle umide in condizioni sterili di coltura cellulare.Cappa a flusso laminare. Utilizzare pinze sterili per trasferire le ossa raccolte dai tubi centrifughi in piastre da 150 millimetri. Quindi utilizzare un seghetto sterile per rimuovere entrambe le estremità delle ossa e spostare i pezzi in nuove piastre da 150 millimetri.Successivamente, riempire una siringa da 10 millilitri con mezzo di coltura. Applicare un ago da 18 gauge e inserire la punta dell'ago in uno dei due estremi dell'osso, penetrando nel midollo. Sciacquare ora la cavità midollare con il mezzo di coltura per espellere il midollo osseo nella piastra. Quindi aspirare la sospensione cellulare nella siringa e risciacquare ripetutamente il midollo osseo finché la sospensione non risulti libera, scorrendo attraverso la cavità midollare e senza ulteriori coaguli di midollo osseo visibili. Una volta raccolto il midollo osseo da tutte le ossa, riempire la siringa con la sospensione midollare attraverso l'ago ed espellere con forza la sospensione in un mezzo liquido per rompere gli aggregati midollari. Successivamente, far passare la sospensione attraverso un filtro cellulare in un tubo da 50 millilitri per prevenire la perdita cellulare.Lavare la piastra di coltura due volte con 10 millilitri di mezzo, versando ogni volta il lavaggio attraverso il filtro. Centrifugare la sospensione per cinque minuti a 500 ×g e a temperatura ambiente. Rimuovere quindi il soprannatante e risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di mezzo.Successivamente, aggiungere cinque millilitri di soluzione di separazione bio call in un tubo da 15 millilitri, quindi stratificare con attenzione cinque millilitri di sospensione cellulare sulla parte superiore. Dopo la centrifugazione della soluzione stratificata, i globuli rossi sedimentano sul fondo, mentre i PBMC e le cellule staminali mesenchimali rimangono all'interfaccia. Trasferire le cellule presenti all'interfaccia in un tubo conico da 15 millilitri e utilizzare cinque millilitri di PBS per lavare i PBMC e le cellule staminali mesenchimali raccolti da due a tre volte.Quindi, centrifugare le cellule un'ultima volta e risospendere il pellet in 10 millilitri di mezzo. Infine, contare le cellule con un emocitometro e seminare con una densità iniziale di circa cinque per 10 alla sesta in piastre da 150 millimetri. Dopo due o tre giorni, mantenere le colture rimuovendo le cellule non aderenti.Lavare la piastra con PBS per rimuovere i detriti cellulari e nutrire le cellule con mezzo completo fresco nel giorno dell'innesto. Iniziare esponendo le cellule aderenti a tripsina 0,25% EDTA per tre minuti. Arrestare la tripsinizzazione aggiungendo mezzo completo.Quindi trasferire le cellule staminali mesenchimali staccate in un tubo conico da 50 millilitri e lavarle due volte con PBS. Dopo aver determinato il numero e la vitalità cellulare mediante colorazione con trian blue, preparare un composto madre di almeno un coagulo aggiuntivo, secondo necessità, per n uguale a quattro. Centrifugare 200.000 cellule in un tubo da microcentrifuga e quindi risospendere il pellet in 68 microlitri di PBS e 100 microlitri del componente fibrinogeno di un kit per coagulo tissutale.Successivamente, iniettare quattro microlitri di soluzione di trombina in un foro di una piastra sterile preforata. Aggiungere immediatamente tutti i 42 microlitri di una sospensione cellulare di fibrinogeno, quindi sovrapporre alla sospensione cellulare altri quattro microlitri di soluzione di trombina. Inizialmente, il volume di 50 microlitri della sospensione cellulare di fibrinogeno dispensata protruderà oltre il bordo del foro preforato a causa della tensione superficiale.Tuttavia, dopo un'ora, la miscela sarà completamente coagulata e si sarà contratta adattandosi al foro preforato. A questo punto, utilizzare pinze ottuse per rimuovere con cura il coagulo e quindi posizionarlo in una provetta per microcentrifuga contenente PBS. Dopo aver disinfettato il ginocchio rasato, palpare accuratamente la rotula ed eseguire un'incisione cutanea mediale rispetto alla rotula.Successivamente, aprire l'articolazione del ginocchio mediante un'artrotomia mediale para-rotulea in condizioni sterili, quindi spostare lateralmente la rotula. Utilizzare ora un trapano chirurgico pneumatico sterile con una punta da 3,6 millimetri di diametro e un dispositivo di arresto per creare due difetti osteocondrali a forma di otto nella scanalatura trocleare, profondi tre millimetri. Dopo aver lavato i difetti con soluzione fisiologica sterile, distribuire rapidamente 20 microlitri di colla fibrinica uniformemente sul fondo dei difetti, prima che la colla si asciughi.Impiantare i coaguli adattati a pressione nel difetto a forma di otto. Dopo la coagulazione, riposizionare la rotula all'interno della troclea e piegare e distendere il ginocchio alcune volte. Successivamente, spostare nuovamente la rotula lateralmente e verificare se i coaguli cellulari di fibrinogeno sono ancora al loro posto.Dopo aver riposizionato nuovamente la rotula, chiudere la ferita a strati con punti singoli di Vicryl 4-0 e un punto continuo cutaneo di Monocryl 4-0. Infine, sigillare la ferita con un cerotto spray permeabile al vapore acqueo. In questo esperimento, la lesione è stata riempita da tessuto di riparazione con proprietà biomeccaniche e durata simili a quelle della cartilagine circostante.Questo coagulo cellulare di fibrina è stato preparato in vitro su una piastra sterile con fori preforati, aventi le stesse dimensioni del difetto osteocondrale. Di conseguenza, non erano presenti fessure tra il coagulo di fibrina impiantato e la cartilagine circostante, che rappresenterebbero un fattore di rischio per una degenerazione precoce o un delaminamento. È stata garantita una solida adesione alla base del tessuto di riparazione poiché l'osso sottocartilagineo è stato perforato, prevenendo così lo scivolamento laterale.Un altro aspetto importante era la rigidità del tessuto riparativo, che dovrebbe corrispondere a quella del tessuto cartilagineo sano circostante per evitare un carico eccessivo sull'articolazione e una possibile degenerazione precoce. Inoltre, si è riscontrata una superficie del trapianto integra e omogenea, che riduce lo stress di taglio e il possibile danno all'impianto dopo il suo sviluppo. Questa tecnica potrebbe aprire la strada ai ricercatori nel campo della ricerca ortopedica sulle cellule staminali per esplorare opzioni terapeutiche per difetti osteocondrali e per un modello animale sperimentale.Per una dimostrazione più dettagliata di alcune delle tecniche di preparazione animale e di chirurgia del ginocchio, consultare il nostro articolo Jovi correlato "trapianto autologo di condrociti assistito da matrice per la rimodellazione e la riparazione di difetti condrali. In un modello coniglio".

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Obiettivo della presentazione è quello di dimostrare un metodo altamente riproducibile per generare matrice associata impianti di cellule staminali a difetti della cartilagine, che può essere visualizzato con la RM. Le cellule staminali sono etichettati con FDA ha approvato Ferumoxides, mescolato con agarosio, impiantati in difetti della cartilagine e ripreso con uno scanner 7T MR.

L&#39;impianto di Ferumoxides etichetta cellule staminali mesenchimali in difetti della cartilagine

Le cellule staminali perivascolari (PSC) sono una nuova classe di cellule staminali per la rigenerazione tissutale scheletrico simili alle cellule staminali mesenchimali (MSC). CSP possono essere isolati mediante FACS (fluorescenza selezione cellulare attivata) da tessuto adiposo prelevati durante le normali procedure di liposuzione, poi combinato con un osteoinduttiva impalcatura per ottenere la formazione...

L&#39;uso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari

Una tecnica sperimentale per il trattamento dei difetti condrali in ginocchio di coniglio è descritto. L'impianto di condrociti autologhi seminate su una matrice è un metodo ben accettato per il rimodellamento e la riparazione di lesioni della cartilagine articolare che fornisca risultati soddisfacenti a lungo termine. Matrix-assistito trapianto autologo di condrociti (MACT) offre un metodo standardizzato di impianto e clinicamente stabilita.

Matrix-assistito trapianto autologo di condrociti per il rimodellamento e la riparazione dei difetti condrali in un modello di coniglio

I modelli animali sono strumenti importanti per la valutazione degli innesti di ingegneria tissutale. Questo articolo presenta il protocollo per la preparazione di un innesto polimerico biodegradabile elettrofilato per l'uso nell'ingegneria tissutale del legamento crociato anteriore, nonché un protocollo chirurgico per l'impianto in un modello di ratto.

Atimico Rat modello per la valutazione di Engineered legamento crociato anteriore Innesti

Lo scopo di questo studio è di segnalare un protocollo per il trattamento artroscopico di lesioni osteocondrali dell'astragalo utilizzando microfratturate e purificato le cellule staminali adiposo-derivate.

Microfratturate autologo e nel tessuto adiposo purificato per l'amministrazione artroscopica di lesioni osteocondrali dell'astragalo

Questo articolo descrive la preparazione e la valutazione di cordone ombelicale cellule staminali mesenchimali derivate matrice sferoidi con un modello di difetto bilaterale del tendine patellar in un ratto. Questo modello è stato associato con una morbilità accettabile ed è stato trovato per rilevare le differenze tra i tendini non trattati e trattati e tra i due trattamenti testato.

Valutazione delle terapie con cellule staminali in un modello di lesione bilaterale del tendine Patellar in ratti

Questo articolo presenta un protocollo semplice ed economico per il semplice isolamento e purificazione delle cellule staminali mesenchimali da liquido sinoviale di coniglio bianco di Nuova Zelanda.

Magnetico-Activated Cell Sorting strategie per isolare e purificare Synovial cellule staminali mesenchimali liquido derivato da un modello di coniglio

Qui, presentiamo un protocollo per la produzione di una frazione di vascolare stromal derivate da tessuto adiposo e la sua applicazione per migliorare le funzioni del ginocchio eseguendo la rigenerazione della cartilagine-come il tessuto in pazienti umani con l'osteoartrite.

Protocollo clinico di produrre tessuto adiposo-derivato Stromal frazione vascolare per potenziale rigenerazione della cartilagine

La terapia ossea tramite ossificazione endocondrale mediante l'impianto di tessuto cartilagineo artificiale prodotto da cellule staminali mesenchimali ha il potenziale per aggirare gli inconvenienti delle terapie convenzionali. Gli idrogel di acido ialuronico sono efficaci nel ridimensionare gli innesti di cartilagine uniformemente differenziati e nel creare osso integrato con vascolarizzazione tra innesti fusi in vivo.

Formazione ossea integrata attraverso l'ossificazione endocondrale in vivo utilizzando cellule staminali mesenchimali

Il protocollo proposto prevede un approccio globale per valutare la formazione ossea nel contesto della rigenerazione ossea utilizzando analisi multimodali. Ha lo scopo di fornire informazioni qualitative e quantitative sulla formazione di nuovo osso, migliorando il rigore e la validità delle indagini di base e precliniche.

Caratterizzazione completa della mineralizzazione tissutale in un modello ex vivo

Qui presentiamo un protocollo integrato per generare lesioni osteocondrali controllate nelle ginocchia di pecora al fine di stabilire un modello sperimentale adatto agli studi sulla rigenerazione del tessuto osseo e cartilagine. Il protocollo delinea un metodo per indurre un difetto osteocondrale a spessore completo nel condilo femorale, utilizzando tecniche che minimizzano gli impatti sul benessere animale e la variabilità dei risultati.

Stabilimento e valutazione di un modello ovino di difetto osteocondrale a spessore completo

Impara un metodo standardizzato per la riparazione osteocondrale con cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina nel ginocchio del coniglio. Questa tecnica sperimentale facilita l'analisi macroscopica del tessuto rigenerato.

Il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del Coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina (Video) | JoVE Journal

Il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del Coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina

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