Name: Insulina Microiniezione ippocampale e In vivo Durante il test di memoria spaziale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Scopri la microiniezione intrahippocampale di insulina per studiare la memoria spaziale in vivo. Questo metodo combina microdialisi e analisi metabolica in animali coscienti durante i test comportamentali.

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<ol><li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+hippocampal+extracellular+fluid+glucose+concentration+during+behavioral+testing+and+following+systemic+glucose+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in hippocampal extracellular fluid glucose concentration during behavioral testing and following systemic glucose administration.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56 (2), 66(2001).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+recurrent+hypoglycemia+on+spatial+cognition+and+cognitive+metabolism+in+normal+and+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effect of recurrent hypoglycemia on spatial cognition and cognitive metabolism in normal and diabetic rats.</a> Diabetes. 53 (2), 418(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiology of Learning & Memory. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Williamson, A., McCrimmon, R. J., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+and+neural+hippocampal+effects+of+long-term+moderate+recurrent+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cognitive and neural hippocampal effects of long-term moderate recurrent hypoglycemia.</a> Diabetes. 55 (4), 1088(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+artificial+cerebro-spinal+fluid+%28aCSF%29+to+artificial+extracellular+fluid+%28aECF%29%3A+microdialysis+perfusate+composition+effects+on+in+vivo+brain+ECF+glucose+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">From artificial cerebro-spinal fluid (aCSF) to artificial extracellular fluid (aECF): microdialysis perfusate composition effects on in vivo brain ECF glucose measurements.</a> Journal of Neuroscience Methods. 132 (1), 35(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Benveniste, H., Drejer, J., Schousboe, A., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+cerebral+glucose+phosphorylation+and+blood+flow+after+insertion+of+a+microdialysis+fiber+through+the+dorsal+hippocampus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat.</a> Journal of Neurochemistry. 49 (3), 729(1987).</li>
<li>Benveniste, H., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+reactions+to+implantation+of+a+microdialysis+tube+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Cellular reactions to implantation of a microdialysis tube in the rat hippocampus.</a> Acta Neuropathologica. 74 (3), 234(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiol. Learn Mem. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Lonnroth, P., Jansson, P. -A., Smith, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microdialysis+method+allowing+characterization+of+intercellular+water+space+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A microdialysis method allowing characterization of intercellular water space in humans.</a> American Journal of Physiology. 1987, E228(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>Lalonde, R. obert <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+spontaneous+alternation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of spontaneous alternation.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 26 (1), 91(2002).</li>
<li>Richman, C., Dember, W., Kim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+alternation+behavior+in+animals%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Psychology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous alternation behavior in animals: A review.</a> Current Psychology. 5 (4), 358(1986).</li>
<li>McNay, E. C., Canal, C. E., Sherwin, R. S., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+memory+with+septal+injections+of+morphine+and+glucose%3A+effects+on+extracellular+glucose+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Modulation of memory with septal injections of morphine and glucose: effects on extracellular glucose levels in the hippocampus.</a> Physiol. Behav. 87 (2), 298(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+modulation+across+neural+systems%3A+intra-amygdala+glucose+reverses+deficits+caused+by+intraseptal+morphine+on+a+spatial+task+but+not+on+an+aversive+task%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Memory modulation across neural systems: intra-amygdala glucose reverses deficits caused by intraseptal morphine on a spatial task but not on an aversive task.</a> Journal of Neuroscience. 18 (10), 3853(1998).</li>
<li>Rex, A., Bert, B., Fink, H., Voigt, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulus-dependent+changes+of+extracellular+glucose+in+the+rat+hippocampus+determined+by+in+vivo+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Stimulus-dependent changes of extracellular glucose in the rat hippocampus determined by in vivo microdialysis.</a> Physiol. Behav. 98 (4), 467(2009).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Tutte le soluzioni utilizzate in microdialisi deve essere filtrata immediatamente prima dell&#39;uso, utilizzando un filtro di 0,2 micron. Dopo l&#39;inserimento della sonda nella cannula guida, osservare per confermare che il flusso è libero e la raccolta del campione è in corso. Se il flusso si interrompe dopo l&#39;inserimento, la causa più probabile è un danno alla membrana della sonda causata da insufficiente attenzione all&#39;inserimento, e una sonda fresca deve essere sostituito. Com...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> La maggioranza dei reagenti sono a livello di laboratorio standard e può essere ottenuto da un fornitore di scelta. Allo stesso modo, apparecchiature come pompe a siringa e tubi possono essere utilizzati da qualsiasi di vari produttori. Elementi specifici utilizzati qui per i cui dettagli sono importanti includono: </td></tr><tr><td> CMA 12 microdialisi sonde </td><td> CMA / microdialisi </td><td> CMA-12-XXX </td><td> Questi sono disponibili in lunghezze diverse membrane e tagli, indicati dai codici specifici nel &#39;XXX&#39;. </td></tr><tr><td> L&#39;insulina umana (Humulin) </td><td> Eli Lilly </td><td> N / a </td><td></td></tr><tr><td> Girevole Liquid </td><td> Instech </td><td> 375/D/22QM </td><td> Questa specifica girevole ha una coppia molto bassa e volume interno, così come un nonreactive rivestimento quarzo. </td></tr></tbody></table>

insulina microiniezione ippocampale e<em&gt; in vivo</emmicrodialisi&gt; durante il test di memoria spaziale

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Il metabolismo del glucosio è un marker utile per la locale attività neurale, che costituiscono la base di metodi come 2-desossiglucosio e la risonanza magnetica funzionale. Tuttavia, l&#39;uso di tali metodi in modelli animali richiede l&#39;anestesia e, quindi, sia altera lo stato del cervello e impedisce misure comportamentali. Un metodo alternativo è l&#39;uso di microdialisi in vivo per prendere la misura continua delle concentrazioni nel liquido extracellulare del cervello di metaboliti del glucosio, lattato, e relativi in Svegliatevi, animali sfrenato. Questa tecnica è particolarmente utile quando combinato con compiti destinate a ricorrere specifiche regioni cerebrali acute e / o manipolazione farmacologica, ad esempio, le misure ippocampali durante un compito di memoria di lavoro spaziale (alternanza spontanea) mostrano un tuffo in glucosio extracellulare e aumento della lattato che sono indicativo di 1,2 glicolisi maggiore, e somministrazione di insulina intrahippocampal sia migliora la memoria e aumenta glicole ippocampalelisi 3. Sostanze come l&#39;insulina può essere consegnato ippocampo tramite la sonda microdialisi stesso utilizzato per misurare metaboliti. L&#39;uso di alternanza spontanea come una misura della funzione ippocampale è stato progettato per evitare di confondere motivatori stressanti (ad esempio footshock), ritenuta, o ricompense alimentari (ad esempio), ciascuno dei quali può alterare sia le prestazioni delle applicazioni e il metabolismo; questa attività fornisce anche un misurare dell&#39;attività motoria che consente il controllo di effetti non specifici del trattamento. Combinati, questi metodi permettono la misurazione diretta delle variabili neurochimiche e metaboliche che regolano il comportamento.

Ratti dovrebbe recuperare rapidamente da un intervento chirurgico e di essere attenti, mobili e attiva entro 30 minuti dopo la cessazione di anestesia. L&#39;impatto del tappo cannula deve essere minimo se l&#39;operazione viene eseguita in modo pulito e minimal cemento dentale viene utilizzato. Se uno qualsiasi segno di infezione si nota durante il monitoraggio post-operatorio, o il ratto è in alcun modo mostrare segni di sofferenza o disagio, interrompere immediatamente l&#39;esperimento, questo dovrebbe essere estrem...

Modulazione di hippocampally-dipendente memoria spaziale di lavoro diretto microiniezione intrahippocampal, accompagnato e seguito da<em&gt; In vivo</emMicrodialisi&gt; per i metaboliti in animali coscienti che si comportano.

Insulina Microiniezione ippocampale e<em&gt; In vivo</emMicrodialisi&gt; Durante il test di memoria spaziale

Il metabolismo del glucosio è un marker utile per l'attività neurale locale e costituisce la base di metodi quali l'uso del 2-deossiglucosio e la risonanza magnetica funzionale...

Lo scopo generale di questa procedura è misurare il metabolismo ippocampale durante test comportamentali. Questo viene ottenuto preparando chirurgicamente un animale ben manipolato con una cannula guida per microdialisi. Nel giorno del test, una sonda per microdialisi viene inserita nella cannula e viene confermato il flusso PERFUSE eight.Successivamente, si permette al sonda di equilibrarsi mentre l'animale è seduto in una camera di controllo. Infine, metodi analitici appropriati, ad esempio una reazione di glucosio ossidasi, NADP, N-A-D-P-H e analisi fluorimetrica. Se la misurazione del glucosio viene utilizzata per mostrare il livello di metabolismo e/o di rilascio neurochimico durante il periodo di prova, uno degli aspetti più difficili di questa tecnica è l'attenzione necessaria nella manipolazione del tubo di microdialisi e il fatto che spesso gli animali lo mordono o aggrovigliano i collegamenti se non si presta sufficiente attenzione.La prima volta che ho utilizzato la microdialisi ippocampale durante test comportamentali è stata durante il mio lavoro di dottorato, e volevamo verificare se i modelli esistenti riguardo all'apporto di glucosio fossero effettivamente compatibili con i dati psicologici noti sull'incremento della memoria indotto dal glucosio. Questa metodologia ci ha permesso di dimostrare che, in effetti, i modelli esistenti sul glucosio applicati al cervello erano completamente errati.Seguendo le procedure chirurgiche standard, preparare l'animale, esporre il cranio e praticare fori per il posizionamento della cannula. Inserire una cannula alle coordinate predeterminate e abbassarla lentamente fino alla profondità desiderata. Una volta posizionata correttamente, fissare la cannula in sede con cemento dentale.Utilizzare un filo di sutura chirurgico sterile per chiudere la ferita, se necessario. Infine, si utilizza uno stilo per mantenere la pervietà della cannula. Successivamente, preparare il PERFUSE otto da utilizzare per la microdialisi.Si deve notare che una composizione accurata del fluido è essenziale per ottenere risultati ottimali. Nel giorno del test, l'albumina sierica bovina BSA deve essere aggiunta e completamente disciolta. Dopo la preparazione, il PERFUSE eight deve essere filtrato attraverso un filtro da 0,2 micron.Successivamente, preparare il trattamento che verrà somministrato al cervello, se previsto, utilizzando un'aliquote dell'ECF A preparato. In questo caso, l'insulina viene preparata per la somministrazione nell'ippocampo. Una sonda per microdialisi nuova e la relativa linea devono essere preparate il giorno prima della prova.Crea due linee separate per l'ingresso e l'uscita del flusso. Utilizza tubi PE 50 per collegare due pezzi di tubo FEP lunghi un metro, assicurandoti che lo spazio morto tra le linee sia minimo. I tubi devono essere tagliati come mostrato, in modo da ottenere estremità oblique che facilitino l'inserimento nei connettori PE 50.Collegare il tubo di ingresso a una siringa Hamilton da un millilitro riempita con acqua deionizzata sterile filtrata e attaccare la sonda all'altra estremità, in modo da permettere all'animale di muoversi liberamente durante le misurazioni. Collegare i tubi di ingresso e di uscita a un girello a due canali. Successivamente, collegare il tubo di uscita alla pompa e farla funzionare a 1,5 microlitri al minuto finché non si osserva l'uscita di acqua deionizzata dal tubo di uscita presente sulla sonda.Spegnere la pompa e collegare l'altra linea tra il tubo di efflusso e un tubo per la raccolta del campione. Far passare cinque millilitri attraverso il tubo e posizionare la sonda in una provetta contenente acqua deionizzata sterile per tutta la notte, assicurandosi che la punta della sonda rimanga sempre umida. 24 ore prima del test, effettuare la pre-Roe sul soggetto in esame rimuovendo lo stiletto fittizio e inserendo una sonda di microdialisi utilizzata esclusivamente a questo scopo.Per 10 minuti successivi, sostituire il manichino con l'ago e rimettere il ratto nella sua gabbia. In alternativa, utilizzare un ago nuovo in questa fase e lasciarlo in posizione senza rimuoverlo fino al momento delle misurazioni. Il giorno seguente.Nel giorno del microdialisi, riempire la siringa Hamilton e il vial per scintillazione con A ECF filtrato e lasciare che la pompa raggiunga l'equilibrio per un'ora. Se necessario, riempire una seconda siringa Hamilton con il trattamento preparato e posizionarla nella pompa per siringa. La chiave del successo in questa procedura è rimanere calmi e manipolare l'animale in modo molto accurato.Pertanto, mantenersi calmi, muoversi lentamente e con precisione e, soprattutto, esercitarsi. Al termine dell'equilibrazione, rimuovere lo stiletto fittizio ed inserire delicatamente la sonda per microdialisi equilibrata nel cervello del ratto attraverso la cannula. Posizionare il ratto in una scatola di plastica trasparente contenente parte della lettiera della sua gabbia.Assicurarsi di controbilanciare il tubicino. Fissare un microcentrifuga da 1,6 millilitri riempito di acqua al tubicino all'esterno della gabbia in modo che la forza di gravità mantenga le linee di microdialisi senza pieghe ma non in tensione. Lasciare che la sonda e il ratto raggiungano l'equilibrio per due ore.All'inizio di questo periodo, verificare che il flusso di Perfuse eight non sia ostruito. Per fare ciò, raccogliere l'effluente di PERFUSE eight per un periodo definito e pesare il campione per confermare che il volume previsto stia uscendo dal sistema prima di raccogliere i campioni. Assicurarsi che la correlazione tra dialisi del campione e raccolta sia calcolata con precisione.Qui abbiamo un volume di 30 microlitri tra la sonda e il punto di raccolta, con una portata di 1,5 microlitri al minuto. Vi è un ritardo di 20 minuti tra l'uscita del campione dal cervello e il suo recupero. Dopo il periodo di equilibrazione, raccogliere almeno tre campioni mentre il ratto si trova a riposo nella propria camera abituale.Per stabilire una linea di base stabile di misurazioni prima dei test comportamentali, pianificare attentamente i tempi di somministrazione del trattamento al cervello. In questo apparato, in cui è presente un volume di 30 microlitri tra la punta della siringa e la sonda inserita nel cervello dell'animale, si sostituisce la siringa del trattamento con quella contenente la soluzione di trattamento da perfondere otto minuti prima. Vogliamo che il trattamento raggiunga l'ippocampo per effettuare la sostituzione delle siringhe.Scollegare semplicemente la linea di ingresso dalla siringa di controllo del PERFUSE eight e collegarla rapidamente alla siringa di trattamento del PERFUSE eight. L'operazione non deve richiedere più di cinque secondi per evitare interruzioni del flusso del PERFUSE eight. Prestare attenzione a non introdurre bolle d'aria che potrebbero ridurre l'efficacia nel periodo di tempo appropriato.Dopo la somministrazione del trattamento, spostare delicatamente il ratto nell'apparato prescelto per i test comportamentali. In questo caso, la alternanza spontanea viene misurata in un labirinto a forma di croce. Consentire all'animale di esplorare liberamente il labirinto per 20 minuti.Registrare la sequenza e i tempi del braccio dell’Ariete utilizzando una registrazione video o manualmente per raccogliere i campioni. Durante questo periodo, spostare il tubo di efflusso in un nuovo tubo di raccolta. Ogni cinque minuti, tenere il tubo in modo che possa muoversi liberamente.Non deve ostacolare i movimenti del ratto né muoversi davanti all'animale e deve rimanere fermo in modo che i suoi movimenti non influiscano sul comportamento del ratto. Al termine del test, rimuovere delicatamente il ratto dal labirinto e riportarlo nella camera di controllo. Continuare la raccolta dei campioni di microdialisi per almeno quattro campioni, in modo da coprire il periodo di recupero dopo l'esecuzione del compito.Dopo aver raccolto i campioni desiderati, rimuovere delicatamente la sonda dalla testa dell'animale e collocarla in una provetta di conservazione. Restituire l'animale alla sua gabbia di provenienza e osservare attentamente eventuali cambiamenti post-sperimentali nello stato di salute o nel comportamento. Infine, lavare i tubicini passando a una siringa contenente una soluzione di catho per prevenire la crescita di microrganismi.In questo esempio si osserva una diminuzione della glucosio nel liquido cerebrospinale ippocampale associata a un compito. La casella grigia rappresenta il periodo in cui l'animale ha trascorso nel labirinto. La linea viola mostra i livelli di glucosio ippocampale in animali senza test nel labirinto, mentre la linea rossa rappresenta animali che eseguono il compito di alternanza spontanea dell'avambraccio.La linea arancione mostra le misurazioni effettuate sugli animali che eseguono la versione più semplice di questo compito con tre bracci. Qui si osservano i cambiamenti nell'ippocampo, nel glucosio e nel lattato dopo la somministrazione di insulina. Si noti che questi cambiamenti si verificano senza alcun test comportamentale, e riflettono quindi l'effetto dell'insulina da sola in condizioni di base.Quando si esegue questa procedura, è molto importante rimanere calmi. I ratti possono percepire lo stato di stress dell'esperimentatore e diventano agitati, il che può rendere la procedura molto più difficile e probabilmente confondere i risultati. Questa combinazione di tecniche ha permesso un'accurata indagine neurochimica dei processi comportamentali.Tecniche simili sono ora utilizzate anche nei pazienti umani. Ad esempio, pazienti con epilessia che hanno elettrodi impiantati per localizzare il focus delle crisi possono avere anche una cannula per microdialisi impiantata per consentire misurazioni metaboliche.

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