Name: Ventricolo destro di pressione sistolica Misure in combinazione con raccolta di campioni di tessuto polmonare e immunitaria nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Impara a misurare la pressione sistolica del ventricolo destro nei topi con raccolta di campioni polmonari e analisi immunitaria. Questo protocollo integra valutazioni fisiologiche multiple per studiare l'interazione cardiovascolare e polmonare.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato finanziato dal National Institutes of Health 1R21HL092370-01 (GG), 1R01 HL095764-01 (GG); R01HL082694 (JW), American Heart Association, affiliato Founders (0855943D, GG), Stony Wold - Herbert Fund, New York (SHP).

1. Preparazione <ol><li> Preparare le seguenti soluzioni e tubi (Tabella 1) come segue: <ol><li> Hanks soluzione, no, magnesio calcio o indicatore con penicillina (100 U / ml) / streptomicina (100 mg / ml). </li><li> Tampone fosfato salino (PBS), 1x, no calcio, magnesio no. </li><li> Etanolo, 70%, 500 ml fare. </li><li> Tamponata di formaldeide, il 7-10% con PBS, fare 500 ml. </li><li> Anestesia soluzioni: <ol><li> Avertin. Cautela aggiungere 5 ml di 2-metil-2-butanolo a 5 g di 2,2,2-Tribromoethanol. Una volta sciolto, tenere soluzione madre a temperatura ambiente al buio. Prendete 0,25 ml di soluzione madre e diluire con 10 ml di 1xPBS in bottiglia di vetro inferiore. Avvolgere la bottiglia con foglio di alluminio, posto a 37 ° C fino a completa dissoluzione e poi aliquotare in tubi di polipropilene da 5 ml e conservare in frigorifero. Scaldare uno aliquota la mattina dell&#39;esperimento. </li><li> Barbiturici. Diluire soluzione madre con PBS per ottenere 2,6% barbiturici solution. Posizionare aliquote 3-4 ml in tubi di polipropilene. </li></ol></li></ol></li><li> Organizzare il lavoro tre-aree (Figura 1). </li><li><ol><li> Area A: Disporre i seguenti elementi: la forma di studio per registrare il numero di identificazione di studio, la data, il peso corporeo, i pesi del cuore destro, cuore sinistro e del setto, bilancia di precisione (0-50 g a 0,01 g di precisione) per determinare il peso corporeo; scala micro per determinare i pesi del cuore a 0,001 g di precisione, pesa imbarcazioni; soluzioni anestesia (chiaramente); dewar piccola con azoto liquido, contenitore isolato sotto ghiaccio, tubi e piastra a 24 pozzetti per la raccolta di sangue e campioni di tessuto (Tabella 1), strumenti chirurgici ( Tabella 2, Figura 2), e soluzioni per pulire gli strumenti (Tabella 1). </li><li> Area B: Disporre i seguenti elementi: microscopio da dissezione; catetere cuore destro collegato a un&#39;unità di controllo della pressione che è collegato ad un amplificatore e computer portatile. Il catetere viene inserito inun becker contenente acqua. Disporre di strumenti chirurgici (Tabella 2), pezzi di taglio di sutura per lunghezza ottimale e inseriti in una pesa barca; nastro (nastro autoclave è ottimale), tagliati in lunghezza ottimale e larghezza e allineati sul banco microscopio o di laboratorio per un facile accesso, tamponi di cotone e Depilatore soluzione. Calibrare il catetere all&#39;inizio dello studio. </li><li> Area C: Disporre le seguenti voci: lente d&#39;ingrandimento lente, cannula tracheale, siringhe da 1 ml, con taglio di sutura per lunghezza ottimale e inserito in un peso barca, piccolo dewar con azoto liquido, contenitore isolato sotto ghiaccio, tubi e 24 pozzetti per la raccolta BAL e campioni di tessuto (Tabella 1), strumenti chirurgici (Tabella 2), soluzioni per eseguire BAL e per la pulizia della cannula tracheale e gli strumenti (Tabella 1). </li></ol></li></ol> 2. Cateterismo cardiaco destro <ol><li> Pesare mouse utilizzando una bilancia di precisione con un leggero posizionando il mouse in una pesata bavena. Assicurati di gestire l&#39;animale delicato e silenzioso. Registrare il peso. Il protocollo descritto funziona meglio per topi che sono 20 go più perché il diametro della vena giugulare deve accogliere il catetere di pressione, è possibile cateterizzare piccoli topi (17 g o più) purché la vena è abbastanza grande. </li><li> Anestetizzare il mouse per iniezione con Avertin a seconda del peso corporeo (10 microlitri / g), ad esempio per dare 20 g 200 pl, per dare 25 g 250 microlitri, per dare 30 g 300 ul. Il volume di iniezione esatta deve essere regolato a seconda del ceppo di topo. Assicurati di gestire l&#39;animale delicato e silenzioso perché lo stress può alterare la risposta al anestetico. </li><li> Una volta che il mouse è sedato, posto su due pieghe carta velina. Prendere nota del numero ID sulla carta. Strofinare delicatamente la rimozione lozione per capelli nella parte ventrale del collo per cancellare il campo operatorio. Posizionare il mouse avanti sulla carta e attendere per 1-2 min. </li><li> Eliminare i peli sotto l&#39;aspetto ventraledel collo accarezzando delicatamente i capelli contro la direzione della crescita dei capelli con tamponi di cotone. </li><li> Attentamente determinare la profondità sufficiente di anestesia controllando l&#39;assenza del riflesso punta: il mouse non reagisce pizzicamento delle sue dita. </li><li> Di lavoro in modo rapido e rilassato, il resto del cateterismo cardiaco destro non dovrebbe richiedere più di 10 minuti, in modo ottimale 3-6 min. È importante che il tessuto non si asciuga, perché il catetere deve scivolare nella vena e muoversi all&#39;interno della vena su un livello di umidità. Temporizzazione consistente della procedura è importante per la generazione di dati comparabili fra i gruppi. </li><li> Mouse avanti Posto su carta velina e il trasferimento con la carta velina sul polistirolo bordo. Fissare le zampe e la testa in posizione con del nastro autoclave. </li><li> Fare un&#39;incisione della pelle da mandibole allo sterno (sterno). </li><li> Sezionare con cura verso l&#39;alto della tiroide grandi verso le mandibole per esporre la vena giugulare destra unnd trachea. </li><li> Luogo polistirolo bordo tenendo premuto il mouse sotto il microscopio dissezione con il piano di messa a fuoco già in atto e l&#39;obiettivo a circa 0,8 x ingrandimento (ingrandimento totale [x lente oculare] è di circa 8x. </li><li> Attenzione microdissect la vena giugulare destra rimuovendo circostante tessuto connettivo con una pinza chirurgica. </li><li> Posto due pezzi di sutura sopra la vena giugulare destra. Legare la sutura più vicina alle mandibole per chiudere il flusso di sangue nella vena di un filo piccolo, posizionare la sutura che è più vicino allo sterno / sterno in un nodo allentato attorno alla vena. Si può utilizzare il filo &#39;di sangue per trovare poi il foro nella vena, ciò dovesse rendersi necessario. </li><li> Respirare e rilassarsi (sciogliere i muscoli del collo e della mascella) di tenere gli occhi sulla vena attraverso l&#39;oculare. Questo farà sì che le mani e le dita si muovono in modo sicuro, senza intoppi e rilassata. Tenendo la vena con pinza sul lato più vicinole mandibole, un foro nella vena tra le due suture utilizzando micro-forbici operati da dall&#39;altro. Metti giù le micro-forbici, e mantenendo quel rilassato mano, sentire per il catetere. Recuperare il catetere delicatamente tenendolo tra il pollice e l&#39;indice (Figura 3). Inserire il catetere nel foro della vena. </li><li> Delicatamente avanzare il catetere nel cuore destro (Figura 3). Osservare i segni al catetere che danno un indice approssimativo di quanto il catetere deve essere inserito e osservare il monitor. Una volta che le curve di pressione vengono visualizzati, serrare leggermente la sutura inferiore intorno al catetere. Poiché il catetere presenta resistenza alla trazione che dà una bobina, e perché il battito cardiaco e la respirazione del mouse aggiungere movimento, inoltre apporre il catetere con nastro. </li><li> Misurazioni della pressione record per 2 minuti per una successiva analisi (Figura 4). </li><li> Aprire la sutura tenendo il catetere, poi delicatamente Retrieve catetere. Pulire la parte dietro il trasduttore di pressione, posizionare nuovamente dentro il bicchiere con acqua. Non toccare il trasduttore di pressione. </li><li> Trasferire il mouse sopra la carta velina per area A per l&#39;eutanasia, la raccolta di sangue e di tessuto milza. Pulire gli strumenti chirurgici. </li><li> Avviare la procedura con l&#39;animale successivo. Quando la temporizzazione permette, iniettare l&#39;anestetico in attesa di registrare la curva di pressione (2,15). </li></ol> 3. Raccolta di campioni di sangue e Milza <ol><li> Iniettare la soluzione barbiturici, 400 microlitri per topo e attendere 1-2 min. Questa viene eseguita di routine nel nostro laboratorio per evitare la possibilità che i topi inavvertitamente recuperare da Avertin-anestesia, mentre dissanguamento. Normalizzazione appropriata dell&#39;esperimento è ottenuta iniettando la stessa dose di soluzione barbiturico per topo, e attendendo la stessa quantità di tempo prima della raccolta del sangue. Se consentito dal Animal Care istituzionale e uso Comitato epurché gli animali sono attentamente monitorati per la profondità di anestesia prima dissanguamento, questo passaggio può essere omesso. </li><li> Fai incisione nell&#39;addome. Aprire la vena caudale (vena cava) e raccogliere il sangue con una pipetta di trasferimento. </li><li> Rimuovere la milza, o un pezzo di milza nel tubo Eppendorf e congelare a scatto in azoto liquido, o nella piastra a 24 pozzetti in un tampone contenente ben Hanks per la preparazione successiva delle singole cellule. </li><li> Trasferire il mouse sopra la carta velina per area di lavoro C per la raccolta di BAL, linfonodo drenante polmone, polmone, e tessuti cardiaci. Pulire gli strumenti chirurgici. </li></ol> 4. Raccolta di polmone e Campioni Cuore <ol><li> Staccare il libero trachea del muscolo e del tessuto connettivo. Pinza messa sotto la trachea, tirare sutura attraverso. Delicatamente generare tratto sufficiente per tagliare un buco. Mantenere il tratto gentile, inserire la cannula tracheale con un movimento un po &#39;di svolta, e sutura cannula into posto. Per l&#39;inserimento della cannula tracheale, assicurarsi che la trachea è umido, eventualmente aggiungere una goccia di soluzione di Hanks. Nel corso della procedura, respirare, rilassare collo e muscoli della mascella, per mantenere i movimenti della mano sicura e agevole. </li><li> Dissect aprire la gabbia toracica con attenzione rimuovendo lo sterno a partire dalla fine addominale. Non disturbare il contenuto del torace, perché questo rende molto difficile trovare il linfonodo. </li><li> Eseguire lavaggio broncoalveolare (BAL) delicatamente inserendo 1 ml di tampone Hanks, ruotare leggermente la siringa e recuperare BAL. Ripetere 3 volte, tubo stretto e posto sul ghiaccio. Durante tutta la procedura, tenere gli occhi sulla estremità della cannula tracheale che collega alla siringa. Uno sguardo al torace per osservare l&#39;inflazione e la deflazione dei polmoni. </li><li> Harvest linfonodi polmonari tenendo gabbia toracica parete con un set di pinze, trovare e recuperare il linfonodo con un altro pinza. Luogo linfonodo in 24 pozzetti. È importante kora dove cercare: partendo dal collo, trovare l&#39;entrata della gabbia toracica dal lato destro del mouse e guardare sopra la colonna vertebrale (Figura 5). </li><li> Harvest cuore e il luogo su carta velina. Isolare il cuore destro con attenzione dissezione lungo il setto. Trasferimento a lavoro-area A pesare, registrare il peso e il luogo in provette eppendorf a scatto congelamento in azoto liquido. </li><li> Posizionare sutura intorno al lobo polmonare sinistro per chiudere il bronco principale. Staccare il polmone sinistro lobo libero, posto nel tubo eppendorf e congelare in azoto liquido a scatto, o il luogo in un pozzetto di una piastra a 24 pozzetti contenenti soluzione di Hanks per l&#39;isolamento successivo di sospensioni di cellule singole. </li><li> Inserisci ca. 0,5 ml di soluzione tamponata di formaldeide attraverso la cannula tracheale nei lobi polmonari rimanenti. Dopo l&#39;inflazione, sezionare i lobi polmonari fuori del torace e del luogo in tubo da 50 ml contenente una soluzione di formaldeide. Per un progetto di studio alternativo, i polmoni possono essere gonfiati con ottiMal di taglio dei media (OCT, diluito 1:4 con PBS) e congelato in uno stampo contenente ottobre non diluiti per la preparazione successiva di sezioni congelate. Un altro disegno dello studio potrebbe richiedere di ottenere tessuto polmonare congelato a scatto e sospensioni di cellule singole dai polmoni. In tal caso, non è necessario inflazione: sezionare i lobi polmonari rimanenti; recuperarli dal torace e posto nella piastra a 24 pozzetti in un tampone contenente ben Hanks. </li><li> Rimuovere cannula tracheale, pulita risciacquo con tampone Hanks, pulire strumenti chirurgici. </li></ol> 5. L&#39;analisi delle curve di pressione generate dallo catetere cardiaco destro I dati relativi alla pressione registrati destro ventricolare vengono analizzati utilizzando LabChart 7 software senza conoscere l&#39;identità di gruppo di ogni registrazione. Più di 20 curve sono selezionati in modo casuale e la differenza tra la massima e la pressione ventricolare minima per ogni curva misurata (AP). Il AP medio è calcolato per ottenere il diritto vpressione sistolica entricular.

<ol><li>Price, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Inflammation in pulmonary arterial hypertension.</a> Chest. 141, 210-221 (2012).</li>
<li>Olschewski, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+pathophysiology+and+therapy+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Clin.+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular pathophysiology and therapy of pulmonary hypertension.</a> J. Lab. Clin. Med. 138, 367-377 (2001).</li>
<li>Hassoun, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+growth+factors%2C+and+pulmonary+vascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation, growth factors, and pulmonary vascular remodeling.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 54, S10-S19 (2009).</li>
<li>Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+of+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis of pulmonary arterial hypertension.</a> J. Clin. Invest. 118, 2372-2379 (2008).</li>
<li>Steudel, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+hypertrophy+after+chronic+hypoxia+in+mice+with+congenital+deficiency+of+nitric+oxide+synthase+3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Sustained pulmonary hypertension and right ventricular hypertrophy after chronic hypoxia in mice with congenital deficiency of nitric oxide synthase 3.</a> J. Clin. Invest. 101, 2468-2477 (1998).</li>
<li>Zaidi, S. H., You, X. M., Ciura, S., Husain, M., Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+serine+elastase+inhibitor+elafin+protects+transgenic+mice+from+hypoxic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the serine elastase inhibitor elafin protects transgenic mice from hypoxic pulmonary hypertension.</a> Circulation. 105, 516-521 (2002).</li>
<li>Guignabert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tie2-mediated+loss+of+peroxisome+proliferator-activated+receptor-gamma+in+mice+causes+PDGF+receptor-beta-dependent+pulmonary+arterial+muscularization%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tie2-mediated loss of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma in mice causes PDGF receptor-beta-dependent pulmonary arterial muscularization.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 297, L1082-L1090 (2009).</li>
<li>West, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+in+transgenic+mice+expressing+a+dominant-negative+BMPRII+gene+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension in transgenic mice expressing a dominant-negative BMPRII gene in smooth muscle.</a> Circ. Res. 94, 1109-1114 (2004).</li>
<li>Cook, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+eNO+and+pulmonary+iNOS+expression+in+eNOS+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Increased eNO and pulmonary iNOS expression in eNOS null mice.</a> Eur. Respir. J. 21, 770-773 (2003).</li>
<li>West, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+expressing+BMPR2R899X+transgene+in+smooth+muscle+develop+pulmonary+vascular+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mice expressing BMPR2R899X transgene in smooth muscle develop pulmonary vascular lesions.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 295, L744-L755 (2008).</li>
<li>Tu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autocrine+fibroblast+growth+factor-2+signaling+contributes+to+altered+endothelial+phenotype+in+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Autocrine fibroblast growth factor-2 signaling contributes to altered endothelial phenotype in pulmonary hypertension.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 45, 311-322 (2011).</li>
<li>Daley, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+arterial+remodeling+induced+by+a+Th2+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary arterial remodeling induced by a Th2 immune response.</a> J. Exp. Med. 205, 361-372 (2008).</li>
<li>Song, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+endothelial+injury%2C+and+persistent+pulmonary+hypertension+in+heterozygous+BMPR2-mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation, endothelial injury, and persistent pulmonary hypertension in heterozygous BMPR2-mutant mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, 677-690 (2008).</li>
<li>Thibault, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+murine+pulmonary+arterial+pressure%3A+validation+and+application+to+models+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation.+Cardiovascular+imaging%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of murine pulmonary arterial pressure: validation and application to models of pulmonary hypertension.</a> Circulation. Cardiovascular imaging. 3, 157-163 (2010).</li>
<li>Otto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+and+right+heart+failure+in+pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+type+I+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension and right heart failure in pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor-deficient mice.</a> Circulation. 110, 3245-3251 (2004).</li>
<li>Burton, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+leukocyte+recruitment+via+CXCR1%2F2+inhibition+stops+the+progression+of+PAH+in+mice+with+genetic+ablation+of+endothelial+BMPR-II%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Attenuation of leukocyte recruitment via CXCR1/2 inhibition stops the progression of PAH in mice with genetic ablation of endothelial BMPR-II.</a> Blood. 118, 4750-4758 (2011).</li>
<li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+in+TNF-alpha-overexpressing+mice+is+associated+with+decreased+VEGF+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension in TNF-alpha-overexpressing mice is associated with decreased VEGF gene expression.</a> J. Appl. Physiol. 93, 2162-2170 (2002).</li>
<li>Motley, H. L., Cournand, A., Werko, L., Himmelstein, A., Dresdale, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Short+Periods+of+Induced+Acute+Anoxia+Upon+Pulmonary+Artery+Pressures+in+Man%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Short Periods of Induced Acute Anoxia Upon Pulmonary Artery Pressures in Man.</a> Am. J. Physiol. 150, 315-320 (1947).</li>
<li>Liljestrand, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Pulmonary+Arterial+Blood+Pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of Pulmonary Arterial Blood Pressure.</a> Arch. Intern. Med. 81, 162-172 (1948).</li>
<li>Euler, U. S. V., Liljestrand, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+pulmonary+arterial+blood+pressure+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Observations on the pulmonary arterial blood pressure in the cat.</a> Acta Physiol. Scand. 12, 301-320 (1946).</li>
<li>Van den Broeck, W., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes%3A+Descriptive+study+and+nomenclatory+standardization+in+BALB%2FcAnNCrl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> Journal of immunological. 312, 12-19 (2006).</li>
<li>Rabinovitch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+prevents+hypoxic+pulmonary+hypertension+and+vascular+changes+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II prevents hypoxic pulmonary hypertension and vascular changes in rat.</a> Am. J. Physiol. 254, 500-508 (1988).</li>
<li>Rabinovitch, M., Gamble, W., Nadas, A. S., Miettinen, O. S., Reid, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+pulmonary+circulation+after+chronic+hypoxia%3A+hemodynamic+and+structural+features%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rat pulmonary circulation after chronic hypoxia: hemodynamic and structural features.</a> Am. J. Physiol. 236, 818-827 (1979).</li>
<li>Rabinovitch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+pulmonary+blood+flow+affect+vascular+response+to+chronic+hypoxia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in pulmonary blood flow affect vascular response to chronic hypoxia in rats.</a> Circ. Res. 52, 432-441 (1983).</li>
<li>Kugathasan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+angiopietin-1-Tie2+pathway+prevents+rather+than+promotes+pulmonary+arterial+hypertension+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The angiopietin-1-Tie2 pathway prevents rather than promotes pulmonary arterial hypertension in transgenic mice.</a> J. Exp. Med. 206, 2221-2234 (2009).</li>
<li>Bearer, C., Emerson, R. K., ORiordan, M. A., Roitman, E., Shackleton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+tobacco+smoke+exposure+and+persistent+pulmonary+hypertension+of+the+newborn%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Persp%22%5BJournal%5D)">Maternal tobacco smoke exposure and persistent pulmonary hypertension of the newborn.</a> Environ. Health Persp. , 105-202 (1997).</li>
<li>Graham, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schistosomiasis-induced+experimental+pulmonary+hypertension%3A+role+of+interleukin-13+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Schistosomiasis-induced experimental pulmonary hypertension: role of interleukin-13 signaling.</a> Am. J. Pathol. 177, 1549-1561 (2010).</li>
<li>Butrous, G., Ghofrani, H. A., Grimminger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+disease+in+the+developing+world%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular disease in the developing world.</a> Circulation. 118, 1758-1766 (2008).</li>
<li>Crosby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Praziquantel+reverses+pulmonary+hypertension+and+vascular+remodeling+in+murine+schistosomiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Praziquantel reverses pulmonary hypertension and vascular remodeling in murine schistosomiasis.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 184, 467-473 (2011).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il flusso sperimentale qui descritto consente la misurazione rapida e simultanea della pressione sistolica ventricolare destra e la raccolta di campioni per l&#39;analisi delle risposte nel cuore, i polmoni e il sistema immunitario in topi. La procedura combina misure di fisiologia cardiaca, micro-dissezione e la raccolta dei tessuti successivo per studi sulle cellule vive, analisi istologiche, o omiche-analisi dei tessuti. La procedura completa richiede meno di 20 minuti per topo. A causa della zona lavoro organizzato ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reagenti </td></tr><tr><td> 2-metil-2-butanolo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 152463 </td><td></td></tr><tr><td> 2,2,2-Tribromoethanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T48402 </td><td></td></tr><tr><td> disinfettante sapone (copertura Spray TB più Steris) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1629-1608 </td><td></td></tr><tr><td> Alcool etilico, 200 Proof, Absolute, anidro ACS / USP Grade </td><td> PHARMCO-AAPER </td><td> 111000200 </td><td> Diluire al 70% con acqua distillata </td></tr><tr><td> Formaldeide soluzione </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F1635-500ML </td><td> Diluire a un 7-10% formaconcentrazione ldehyde ad una concentrazione di PBS 1x utilizzando PBS soluzione madre e acqua </td></tr><tr><td> Hanks soluzione, no, calcio e magnesio </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-022-CV </td><td></td></tr><tr><td> Ottobre </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Penicillina (10.000 U / ml) / streptomicina (10.000 mg / ml) soluzione </td><td> Thermo Scientific </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Tampone fosfato salino (PBS), nessun calcio, magnesio no, soluzioni 1x e 10x </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pentobarbital di sodio 26% </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td> NDC 0856-0471-01 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Labware </td></tr><tr><td> Piatti 12, 24, 96 e </td><td> Falco </td><td></td><td></td></tr&gt; <tr><td> Trasferimento Pipettare </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-9BM </td><td></td></tr><tr><td> Tube, EDTA rivestito </td><td> Sarstedt </td><td> 2013-08 </td><td></td></tr><tr><td> Provette 0,65 ml e 1,7 ml micro-centrifuga </td><td> VWR </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tubi 12 x 75 mm polipropilene </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-956-1D </td><td></td></tr><tr><td> Tubi, di varie dimensioni, in polipropilene </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Strumenti </td></tr><tr><td> Pinza, Dumon # 5 Belle </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> Pinze, extra fini Graefe-0.5mm punte curve </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 11152-10 </td><td></td></tr><tr><td> Pinze, extra fine Graefe-0.5mm punte diritte </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 11150-10 </td><td></td></tr><tr><td> Cannula 18GA, 19 ga </td><td> BD </td><td> Precision Glide Aghi </td><td> Tagliare alla lunghezza ottimale, smussati e fuori gracchiò per creare una superficie ruvida esterna </td></tr><tr><td> Forbici, forbici dissettore-sottili lame 9 centimetri </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 14081-09 </td><td></td></tr><tr><td> Sutura per BAL, sutura di seta intrecciata, 4-0 </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> SP116 </td><td></td></tr><tr><td> Sutura per cateterismo cardiaco destro, sutura di seta intrecciata, 6-0 </td><td> Teleflex Medical </td><td> 18020-60 </td><td></td></tr><tr><td> Siringa, 1 ml </td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Attrezzatura </td></tr><tr><td> Amplificatore, PowerLab 4/30 </td&gt; <td> ADInstrument </td><td> Modello ML866 </td><td></td></tr><tr><td> Catetere, pressione F1.4 </td><td> Millar Instruments, Inc </td><td> 840-6719 </td><td></td></tr><tr><td> Dissezione Microscopio </td><td> Variscope </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinze, forbici Vännäs primavera-2mm lame </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 15000-00 </td><td></td></tr><tr><td> Lente luminosa alogena Desk </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-990-56 </td><td></td></tr><tr><td> Computer portatile </td><td> Asus </td><td> Numero di modello A52F i5 processore; 15 pollici </td><td></td></tr><tr><td> Fonte di luce </td><td> Amscope </td><td> HL-250-A </td><td></td></tr><tr><td> Unità di controllo della pressione </td><td> Millar Instruments, Inc </td><td> PCU-2000 </td><td></td></tr><tr><td> Software, Labchart-Pro V.7 </td><td> DC Instruments </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ventricolo destro di pressione sistolica misure in combinazione con raccolta di campioni di tessuto polmonare e immunitaria nei topi

Right Ventricular Systolic Pressure Measurements in Combination with Harvest of Lung and Immune Tissue Samples in Mice

La funzione del cuore destro è di pompare sangue attraverso i polmoni, collegando così fisiologia del cuore destro e fisiologia vascolare polmonare. L&#39;infiammazione è un modificatore comune di cuore e funzione polmonare, elaborando infiltrazione cellulare, la produzione di citochine e fattori di crescita, e avviando processi di rimodellamento 1. Rispetto al ventricolo sinistro, il ventricolo destro è una pompa a bassa pressione che opera in una zona relativamente ristretta di variazioni di pressione. Aumentato la pressione arteriosa polmonare sono associati con un aumento della pressione nel letto vascolare polmonare e ipertensione polmonare 2. L&#39;ipertensione polmonare è spesso associata a malattie polmonari infiammatorie, ad esempio cronica ostruttiva, o malattie autoimmuni 3. Poiché l&#39;ipertensione polmonare conferisce una prognosi negativa per la qualità della vita e la speranza di vita, gran parte della ricerca è orientata verso la comprensione dei meccanismi che might essere gli obiettivi per 4 intervento farmaceutico. La sfida principale per lo sviluppo di strumenti di gestione efficaci per l&#39;ipertensione polmonare rimane la complessità della comprensione simultanea di cambiamenti molecolari e cellulari nel cuore destro, i polmoni e il sistema immunitario. Qui, presentiamo un workflow procedurale per la misurazione rapida e precisa delle variazioni di pressione nel cuore destro di topi e la raccolta simultanea di campioni dal cuore, polmoni e tessuti immunitarie. Il metodo si basa sulla cateterizzazione diretta del ventricolo destro attraverso la vena giugulare in stretta a torso topi, sviluppato alla fine del 1990 come parametro di misurazione della pressione in arteria polmonare 5-13. La squadra ha organizzato approccio facilita una tecnica molto rapida diritto cateterismo cardiaco. Ciò rende possibile effettuare le misure in topi che spontaneamente respirano aria ambiente. L&#39;organizzazione del flusso di lavoro in distinte aree di lavoro-riduce il tempo di ritardo e si apre la possibilità di eseguire contemporaneamente esperimenti di fisiologia e di raccolta dei tessuti immunitario, cardiache e polmonari. Il flusso di lavoro procedurale qui descritto può essere adattato per una vasta gamma di ambienti di laboratorio e disegni di studio, da piccoli, esperienze mirate, di grandi saggi di screening di stupefacenti. L&#39;acquisizione contemporanea dei dati di fisiologia cardiaca che può essere ampliato per includere l&#39;ecocardiografia 5,14-17 e la raccolta dei tessuti del cuore, del polmone e del sistema immunitario riduce il numero di animali necessari per ottenere i dati che si muovono la base delle conoscenze scientifiche in avanti. Il flusso di lavoro procedurale qui presentato fornisce anche una base ideale per la conoscenza delle reti che collegano immunitario, polmoni e la funzione del cuore. Gli stessi principi descritti qui possono essere adattati per studiare altri organi o aggiuntiva come richiesto.

Il risultato primario per ottenere giuste curve di pressione cardiaca si ottiene il corretto posizionamento del catetere cuore destro. La forma delle curve tempo la pressione è fondamentale perché il corretto posizionamento del catetere all&#39;interno del ventricolo destro comporterà altipiani pressione (Figura 4). Spine ricurve, invece, indicano un catetere che viene spostato dal respiro o battito cardiaco movimento contro la parete del ventricolo destro. Per rilevare potenziali problemi con la fase d...

Un protocollo specifico e rapido per indagare contemporaneamente la funzione del cuore destro, infiammazione polmonare, e la risposta immunitaria viene descritto come strumento di apprendimento. Video e dati descrivono fisiologia e tecniche di microdissezione organizzata in un approccio di squadra che è adattabile per essere utilizzato per piccole e grandi dimensioni studi.

Ventricolo destro di pressione sistolica Misure in combinazione con raccolta di campioni di tessuto polmonare e immunitaria nei topi

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is ...

right-ventricular-systolic-pressure-measurements-combination-with

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Il protocollo seguente delinea il processo di isolamento, ventilazione e strumentazione polmoni del mouse su misura stabile o pulsatile vascolare polmonare di pressione del flusso di relazioni al fine di quantificare gli effetti del flusso sanguigno, flusso d'aria, i cambiamenti delle vie aeree e sui cambiamenti vascolari post-carico del ventricolo destro.

Caratterizzazione del isolata, ventilata e polmone mouse Instrumented perfusi con flusso pulsatile

Misurazione della pressione ventricolare sinistra (LV) nei topi embrionali e neonatale è descritto. La pressione è misurata inserendo un ago connesso ad un trasduttore riempito di fluido nella LV sotto guida ecografica. Si deve prestare attenzione a mantenere una normale funzione cardiaca durante il protocollo sperimentale.

Misurazione della pressione ventricolare sinistra nel tardo Mice embrionali e neonatale

Questo articolo fornisce un protocollo per la valutazione ecocardiografica delle dimensioni del ventricolo destro e l'ipertensione polmonare nei topi. Le applicazioni includono la determinazione del fenotipo e la valutazione seriale transgenici e modelli murini tossina-indotta di cardiomiopatia e la malattia vascolare polmonare.

La valutazione ecocardiografica del cuore destro in topi

Ventricolo destro (RV) La disfunzione è fondamentale per la patogenesi della malattia cardiovascolare, ma le metodologie non sono disponibili per la sua valutazione. I recenti progressi nella ecografica forniscono un'opzione non invadente e preciso per lo studio RV longitudinale. Qui, abbiamo dettaglio un metodo step-by-step ecocardiografico utilizzando un modello murino di sovraccarico di pressione RV.

Valutazione del ventricolo destro Struttura e funzione in modello murino di polmonare Arteria Costrizione da ecocardiografia transtoracica

Questo manoscritto descrive un protocollo dettagliato per la raccolta di dati pressione-volume dal mouse.

Misurazione Loops Volume Pressione nel mouse

Questo protocollo descrive l'induzione dell'ipertensione polmonare (PH) nei topi in base all'esposizione all'ipossia e all'iniezione di un antagonista del recettore VEGF. Gli animali sviluppano PH e ipertensione ventricolare destra (RV) 3 settimane dopo l'avvio del protocollo. Viene presentata anche la caratterizzazione funzionale e morfometrica del modello.

Induzione e caratterizzazione dell'ipertensione polmonare nei topi utilizzando il modello Ipossia/SU5416

Qui, forniamo un approccio utile per studiare il meccanismo del fallimento ventricolare destro. Un approccio più conveniente ed efficiente alla costrizione dell'arteria polmonare viene stabilito utilizzando strumenti chirurgici realizzati internamente. Inoltre, vengono forniti metodi per valutare la qualità di questo approccio mediante ecocardiografia e cateterizzazione.

Induzione del fallimento ventricolare destro da parte della costrizione dell'arteria polmonare e valutazione della funzione ventricolare destra nei topi

Qui, presentiamo un protocollo per eseguire una valutazione emodinamica invasiva del ventricolo destro e dell'arteria polmonare nei topi utilizzando un approccio chirurgico a torace aperto.

Valutazione emodinamica invasiva per il sistema ventricolare destro e l'ipertensione arteriosa polmonare indotta dall'ipossia nei topi

Di seguito è presentato un protocollo per valutare la funzione cardiaca biventricolare nei topi generando loop pressione-volume (PV) dal ventricolo destro e sinistro nello stesso animale utilizzando il cateterismo toracico chiuso. L'attenzione si concentra sull'aspetto tecnico della chirurgia e sull'acquisizione dei dati.

Valutazione biventricolare della funzione cardiaca e delle anse pressione-volume mediante cateterismo a torace chiuso nei topi

Qui descriviamo un'analisi del ciclo pressione-volume cardiaco sotto dosi crescenti di isoproterenolo infuso per via endovenosa per determinare la funzione cardiaca intrinseca e la riserva β-adrenergica nei topi. Utilizziamo un approccio a cassa aperta modificato per le misurazioni del ciclo pressione-volume, in cui includiamo la ventilazione con pressione positiva di fine espirazione.

Risposta cardiaca alla stimolazione β-adrenergica determinata dall'analisi del ciclo pressione-volume

Descriviamo un modello murino di sovraccarico di pressione ventricolare destra indotto dal banding polmonare del tronco. Nel documento sono inclusi protocolli dettagliati per l'intubazione, la chirurgia e la fenotipizzazione mediante ecocardiografia. Per l'intubazione e la chirurgia vengono utilizzati strumenti su misura, che consentono una riproduzione rapida ed economica del modello.

Un modello murino di ipertrofia ventricolare destra indotta da sovraccarico di pressione e insufficienza mediante bande del tronco polmonare

Impara a misurare la pressione sistolica del ventricolo destro nei topi con raccolta di campioni polmonari e analisi immunitaria. Questo protocollo integra valutazioni fisiologiche multiple per studiare l'interazione cardiovascolare e polmonare.

Ventricolo destro di pressione sistolica Misure in combinazione con raccolta di campioni di tessuto polmonare e immunitaria nei topi (Video) | JoVE Journal

Ventricolo destro di pressione sistolica Misure in combinazione con raccolta di campioni di tessuto polmonare e immunitaria nei topi

Esplora altri video