Name: La valutazione di svuotamento gastrico in non-obesi topi diabetici utilizzando un 13 C -ottanoico Breath Test Acid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Impara a misurare lo svuotamento gastrico nei topi non obesi diabetici utilizzando il test del respiro con acido ottanoico marcato con 13C. Questo metodo non invasivo consente misurazioni ripetute nel tempo per studiare la gastroparesi.

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Questa pubblicazione video è stato reso possibile da un finanziamento del National Institute of Diabetes and Digestive e malattie renali (NIDDK) per il programma Progetto &quot;Patobiologia del sistema enterico&quot; Grant DK 68055. Christopher T. Creedon è stato sostenuto dal Programma Mentori pubblico Rochester scuole. Ringraziamo il Sig. Gary Stoltz per l&#39;assistenza tecnica, la signora Kristy Zodrow segreteria per l&#39;assistenza e il Dr. Douglas Baer da Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

1. Formazione e assuefazione dei Topi <ol><li> Prima dell&#39;analisi, mettere tutti i topi nelle camere di prova per 2-4 ore con flusso d&#39;aria costante, al fine di abituarli alle condizioni di prova. Questo riduce notevolmente i livelli di stress che altrimenti potrebbero causare il rilevamento aberrante di ritardato svuotamento gastrico. Trattare i topi stesso modo se l&#39;esperimento svuotamento gastrico è in esecuzione. Preparare il tuorlo d&#39;uovo (vedi oltre), senza l&#39;aggiunta di acido ottanoico e alimentare 0,2 g per ogni mouse. </li><li> Ripetere questo processo fino a quando i topi sono sufficientemente formati (in genere 2-3 volte). I topi sono tipicamente abituano facilmente purché le condizioni ambientali sono mantenuti uguali. </li></ol> Nota: non abituati topi continuano a muoversi per circa 1 ora dopo il trasferimento alla camera, e defecare e urinare frequentemente, mentre i topi abituati rapidamente stabilirsi nel loro nuovo ambiente e distendersi. Note: Durante l&#39;esperimento: gli animali Monitor per i segni di perdita di assuefazione, come eccesso di minzione, defecazione, mancanza di interesse per mangiare l&#39;uovo. Se questo è il caso considerare nuovamente abituare in una camera vuota 1-2 volte prima di ottenere dati di svuotamento gastrico. La coerenza è molto importante mentre si fa questo esperimento. Fare le cose esattamente nello stesso modo ogni volta che è l&#39;unico modo per ottenere risultati affidabili e riproducibili. Questo include dare trattamento (ad esempio insulina) ogni giorno, allo stesso tempo, non separando i topi dai loro compagni di gabbia se non assolutamente necessario, digiuno i topi e iniziare il test di svuotamento gastrico, allo stesso tempo, e il trattamento di topi stesso modo. 2. Preparazione del Isotope contenenti farina di prova <ol><li> Inizia con peso di 5 g di tuorlo d&#39;uovo in una provetta da 50 ml falco. Ripetere questi passaggi ogni giorno sperimentale per preparare un pasto fresco di prova. </li><li> Aggiungere 10 ml di acido ottanoico con un Concentrazionezione di 2 pl / g al tubo da 50 ml falco contenente l&#39;uovo e mescolare energicamente per 1 minuto con una spatola nel tubo falcon. </li><li> L&#39;uovo viene poi trasferito in un bicchiere di vetro e riscaldato su un becco Bunsen fino coagula e la sua consistenza è adatto a fare palline. Questo richiede in genere circa 30 sec. </li></ol> Nota: Le sfere di tuorlo d&#39;uovo dovrebbe pesare 0,2 g per topo. Questo è importante per mantenere la dose cumulativa costante in tutti i topi. 3. Di iniziare l&#39;esperimento <ol><li> Una volta addestrato e pronto per lo svuotamento gastrico, veloce i topi durante la notte (12 ore) su un metallo &quot;mesh-bottom&quot; rack digiuno per evitare coprofagia. Assicurarsi che hanno libero accesso ad acqua potabile. Poiché topi diabetici sono usati nell&#39;esperimento corrente, non dovrebbero essere tenuti a digiuno per più di 16 ore. </li><li> Inizia la creazione di camere di svuotamento gastrico. Utilizzare camere pulite e le coperture che sono stati essiccati all&#39;aria. Inoltre, qualsiasitubi che collegano le camere all&#39;analizzatore o l&#39;alimentazione dell&#39;aria CO 2 deve essere priva di umidità, acqua può interferire con il segnale letto dall&#39;analizzatore </li><li> Collegare le camere per i tubi di ingresso che forniscono un flusso d&#39;aria costante. Quindi collegare i tubi di scarico dalle camere alla macchina. Chiudere le provette e accendere il flusso d&#39;aria. </li></ol> Nota: applicare una piccola quantità di vaselina al termine dei coperchi di copertura in modo da chiudere facilmente e sono sigillati in modo sicuro. Questa tenuta è necessario raccogliere tutta l&#39;anidride carbonica prodotta dai topi. 4. Procedure sperimentali <ol><li> Iniziate pesando ogni mouse. Il peso corporeo è una misura della loro salute continua bene. Poi posto ogni topo nella camera appropriata. Naturalmente è importante avere l&#39;aria che fluisce nelle camere in questo momento. </li><li> Per avviare la misurazione, lasciare che i topi per acclimatarsi alle camere prima di regolarezione dei livelli di aria. </li><li> Una volta che i topi apparire calmo, che può richiedere alcuni minuti, regolare la portata d&#39;aria per ogni camera del mouse. Questo può essere diverso per ciascun topo. Tipicamente, il flusso di aria viene regolato all&#39;inizio dell&#39;esperimento per assicurarsi che esalato CO 2 raggiunge livelli rilevabili con qualsiasi apparecchiatura viene utilizzata, e fare in modo che il livello rimane sufficientemente bassa per garantire fatturato sana aria. Usiamo iniziali livelli di CO 2 tra 1.000 e 1.500 parti per milione. </li><li> Se ha difficoltà con la regolazione, verificare la presenza di perdite d&#39;aria. Quindi ripetere il processo per ciascuna delle sezioni e guardare per un altro giro di misurazioni per vedere se le rettifiche apportate al flusso d&#39;aria hanno corretto il livello di CO 2. È importante per ottenere una linea di base stabile lettura prima di alimentare i topi. Usiamo una macchina con una funzione di auto calibrazione. Se questo non è il caso di taratura deve essere controllata. </li><li> Quando questo avviene, somministrare il pasto uovoal primo mouse e registrare il tempo di ciascun topo riceve il cibo. </li><li> Corriamo il procedimento per 4 ore per ottenere i valori sufficienti per il montaggio del CO 13 2 curva di arricchimento per ogni mouse. Controllare i topi ogni 30-60 min per assicurarsi che i livelli di CO 2 sono ancora sicuro per i topi. </li><li> Preparare nuove scatole contenenti cibo prima della fine della prova lo topi può iniziare a mangiare immediatamente dopo la prova è finita. </li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitto di interessi finanziari.

La tecnica qui descritta permette di ripetuti e non invasivo per la misurazione in vivo di svuotamento gastrico solido nei topi. Questo sistema ha il vantaggio che gli animali non sono trattenuti nella camera di misura, permettendo loro di muoversi e ruotare liberamente. Dal momento che questo è un ambiente familiare, i topi hanno ancora bisogno di essere addestrati e abituati alle camere di prova per prevenire gli effetti dello stress sullo svuotamento gastrico. In generale, si assume i dati svuotamen...

Questo manoscritto descrive le considerazioni tecniche e metodologiche implicate nella misurazione non invasiva di svuotamento gastrico nei topi. Seguendo il protocollo qui descritto, gli investigatori in modo affidabile e riproducibile seguire le modifiche di svuotamento gastrico a causa dello sviluppo della malattia, studiare l&#39;impatto di agenti farmacologici sullo svuotamento gastrico e seguire la risposta di svuotamento gastrico per il trattamento di malattie sottostanti o difetti 6,8, 11,12. In precedenti pubblicazioni, l&#39;applicazione di 13 C test di respiro acido ottanoico ha dimostrato di essere un modo utile per misurare svuotamento gastrico nell&#39;uomo e negli animali 3,8. Questo documento descrive in dettaglio, le procedure necessarie per ottenere dati affidabili sul 6-8 mesi necessari per uno studio longitudinale di svuotamento gastrico nei topi con diabete. I vantaggi di seguire questo protocollo rispetto ai metodi precedentemente pubblicati sono che il ricercatore può essere assicurato il richiederlo datid sarà affidabile e riproducibile. Inoltre, il sistema automatizzato per la raccolta e l&#39;analisi dei campioni di gas descritto qui aumenta il numero di animali che possono essere seguiti simultaneamente in uno studio. Nel complesso, l&#39;obiettivo di questo lavoro è quello di identificare i fattori chiave che mantengono assuefazione dei topi al test e che ridurre la variabilità nei risultati ottenuti. Per la misurazione in vivo di svuotamento gastrico, i topi sono tenuti a digiuno per una notte e messo nelle camere di prova di plastica trasparente con portata costante. Dopo i topi vengono abituati ai tubi, al basale esalato 13 CO 2 livelli sono determinati e flusso d&#39;aria adeguato di conseguenza. Successivamente, l&#39;amministrazione di un pasto di prova costituito da tuorlo d&#39;uovo mescolato con 13 C-marcato acido ottanoico. Poiché i topi a digiuno e formati, in genere mangiare il pasto di prova entro 2 minuti. Il somministrato acido ottanoico non viene assorbito nello stomaco, ma sarà ripreso nel duodeno und otterrà metabolizzato nel fegato in 13 CO 2, che viene rilasciato ed espirata, con un conseguente arricchimento di 13 CO 2 nell&#39;aria circostante. Campioni d&#39;aria sono raccolti ad intervalli di tempo determinati ed analizzati mediante l&#39;analizzatore degli isotopi di carbonio. Il rate-limiting passo in questo processo è lo svuotamento gastrico e l&#39;escrezione polmonare di 13 CO 2 corrisponde direttamente con lo svuotamento gastrico del pasto marcato. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Figura 1. Schema dell&#39;apparato svuotamento gastrico. Dopo il digiuno notturno, i topi sono posti in camere trasparenti, che consentano loro di muoversi e girare liberamente. Un tubo di ingresso permette afflusso di aria fresca e costante ed una uscita conduce l&#39;analizzatore per misurare l&#39;isotopo 13 C-a-12Rapporto C nel respiro esalato. La camera dispone anche di una porta centrale per la consegna di prodotti alimentari contenenti [13 C]-acido ottanoico.

<table border="1"><tbody><tr><td> NOME </td><td> AZIENDA </td><td> CAT NUMERO </td><td> COMMENTI </td></tr><tr><td> Una fonte di alimentazione d&#39;aria costante, il flusso e composizione </td><td> centrale di alimentazione aria nella struttura di ricerca </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml di campionamento camera che dispone di aria in entrata, di uscita dell&#39;aria, l&#39;apertura e la gestione alimentare Tubi di plastica per l&#39;alimentazione pneumatica </td><td> In casa costruita </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Acido ottanoico </td><td> Cambridge isotopo laboratori (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Per preparare il pasto uovo: <ul><li> piccolo becher </li><li> 50 ml, tubo </li><li> Becco Bunsen </li><li> uovo </li><li> spatola </li></ul></td><td> Ogni fornitore </td><td></td><td> Cercate diessere coerente con il fornitore uovo poiché il contenuto nutrizionale e appetibilità delle uova può influenzare lo svuotamento gastrico e l&#39;ingestione del pasto </td></tr><tr><td> Biossido di carbonio isotopo analizzatore </td><td> Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la valutazione di svuotamento gastrico in non-obesi topi diabetici utilizzando un [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-ottanoico breath test acid

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Gastrico studi svuotamento nei topi sono stati limitati dalla incapacità di seguire i cambiamenti di svuotamento gastrico, nello stesso animale, poiché le tecniche più comunemente utilizzate richiedono l&#39;uccisione degli animali e il recupero post-mortem del 1,2 pasto. Questo approccio evita studi longitudinali per determinare le variazioni di svuotamento gastrico con l&#39;età e la progressione della malattia. Il comunemente usato [13 C]-ottanoico breath test con l&#39;acido per l&#39;uomo 3 è stato modificato per l&#39;uso nel topo e nel ratto 4-6 7 e abbiamo precedentemente dimostrato che questo test è affidabile e sensibile alle variazioni di svuotamento gastrico in risposta ai farmaci e durante progressione di malattia diabetica 8. In questo video di presentazione il principio e l&#39;attuazione pratica di questo test modificato è spiegato. Come nel precedente studio, i topi NOD LTJ vengono utilizzati, un modello di diabete di tipo 1 9. Una quota di questi topi sviluppano i sintomi di gastroparesi, una complicazione di Diabetees caratterizzata da ritardato svuotamento gastrico senza ostruzione meccanica dello stomaco 10. Questo documento dimostra come addestrare i topi per i test, come preparare il pasto di prova e ottenere 4 ore di dati di svuotamento gastrico e come analizzare i dati ottenuti. L&#39;analizzatore isotopo di carbonio utilizzati nel presente studio è adatto per il campionamento automatico dei campioni di aria da un massimo di 12 topi contemporaneamente. Questa tecnica permette di follow-up longitudinale di svuotamento gastrico da grandi gruppi di topi con diabete o altre malattie di lunga durata.

A dati rappresentativi indicati da tre topi diverse è mostrato in Figura 2. Il grafico nero rappresenta i punti dati di un mouse con svuotamento gastrico normale. Essa mostra la frazione di 13 C che viene recuperato in aria espirata espressa come percentuale della dose somministrata per ora espressa come funzione di tempo. La curva blu è da un topo con un accelerato svuotamento gastrico con un valore di mezzo T di 40 min e la curva rossa è da un mouse con svuotamento gastrico ritardato con un...

Determinazione di svuotamento gastrico con un non-invasiva [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-ottanoico breath test con acido per gastroparesi inseguimento in femmine di topo NOD LTJ.

La valutazione di svuotamento gastrico in non-obesi topi diabetici utilizzando un [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-ottanoico Breath Test Acid

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un metodo per la misurazione in vivo dello svuotamento gastrico nei topi mediante un test respiratorio con acido ottanoico marcato al 13 carbonio. I topi e altri piccoli animali sono stati ovviamente molto utili per aiutarci a comprendere la fisiopatologia delle malattie; nel nostro laboratorio studiamo la gastroparesi, e uno dei problemi legati alla gastroparesi è che, per studiare la malattia, dobbiamo seguire lo svuotamento gastrico nel tempo. Questo è stato un limite delle tecniche attualmente disponibili, poiché esse richiedono di introdurre una sostanza, in forma liquida o solida, nello stomaco del topo e, dopo un certo periodo, sacrificare l'animale per stimare quanto ne è uscito dallo stomaco.Ciò che volevamo fare era stabilire una tecnica non invasiva per misurare lo svuotamento gastrico, e ciò che abbiamo fatto è stato adattare il noto test del respiro con l'aminoacido al 13 carbonio per poterlo utilizzare nei topi. Questo ci permette di effettuare misurazioni ripetute nel tempo e quindi di correlare ciò che osserviamo con l'istologia e la fisiologia. L'attrezzatura che utilizziamo qui ci consente di automatizzare la procedura, anche se ovviamente può essere eseguita manualmente.Il vantaggio dell'automazione non è solo il fatto che possiamo eseguire molte più misurazioni dello svuotamento gastrico nel tempo, ma anche che possiamo effettuarle contemporaneamente su più topi. Mostreremo un metodo con cui è possibile lavorare fino a 12 topi contemporaneamente. L'animazione seguente illustra l'allestimento del nostro esperimento di svuotamento gastrico per la misurazione in vivo dello svuotamento gastrico.I topi vengono posizionati in tubi di plastica trasparenti con un flusso d'aria costante. Dopo che i topi si sono abituati ai tubi e dopo l'adeguamento del flusso d'aria, somministriamo un pasto di prova costituito da tuorlo d'uovo mescolato con acido Octo NOIC marcato con 13 carbonio. Poiché i topi sono fissati e addestrati, in genere consumano il pasto di prova.Entro due minuti, l'acido OCT NOIC somministrato verrà assorbito nel duodeno e metabolizzato nel fegato, dove verrà rilasciato ed esalato, determinando un arricchimento di anidride carbonica 13C nell'aria circostante, che viene quindi misurato dal nostro analizzatore di isotopi. Esaminiamo più nel dettaglio ciò che accade nel corpo del topo. Dopo aver ingerito il pasto di prova contenente l'acido OCT NOIC marcato con 13C, il pasto entra nello stomaco.L'acido OCT NOIC rimane intatto nello stomaco. Dopo il passaggio attraverso il piloro, viene rapidamente assorbito nel duodeno. Il composto marcato raggiunge il fegato attraverso la vena porta e viene metabolizzato in anidride carbonica marcata con 13 carbonio.L'anidride carbonica marcata viene rilasciata nel sangue venoso ed esalata. Il passaggio lento di tutto questo processo è lo svuotamento gastrico. Ciò significa che l'escrezione polmonare della 13 anidride carbonica corrisponde direttamente allo svuotamento gastrico del pasto marcato.I campioni d'aria vengono raccolti a intervalli di tempo prestabiliti e analizzati mediante un analizzatore di isotopi del carbonio. Possono essere utilizzati diversi analizzatori di isotopi. In questo studio, abbiamo scelto di utilizzare un analizzatore di isotopi del carbonio LGR 13 a basso consumo GATOS.La raccolta di campioni per quattro ore consente di ottenere una cinetica riproducibile dell'anidride carbonica marcata con 13C, che riflette la velocità di svuotamento gastrico. Analisi delle curve. L'uso della regressione non lineare permette il calcolo dei tempi di dimezzamento dello svuotamento.Questa procedura è adatta per il monitoraggio di topi affetti da malattie croniche. In questo studio specifico, utilizziamo topi femmine non obesi diabetici, ceppo N-O-D-L-T-J, che rappresentano un modello per il diabete di tipo uno umano. Prima dell'analisi, tutti i topi vengono lasciati abituare alle camere di prova per minimizzare i livelli di stress.Un ritardo nello svuotamento gastrico è un indicatore caratteristico dello stress nei topi. I topi non abituati continuano a muoversi per circa un'ora dopo il trasferimento nella camera, defecando e urinando. Spesso si ritiene che i topi siano stati abituati con successo quando si adattano rapidamente al nuovo ambiente. Dopo un breve periodo di esplorazione, i topi abituati, una volta trasferiti nella camera, si fermano tranquillamente all'interno della stessa.Nei topi abituati, i risultati del test di svuotamento gastrico dovrebbero mostrare una variabilità intra-mouse inferiore al 10%. Una volta addestrati e pronti per il test di svuotamento gastrico, i topi devono essere sottoposti a digiuno il giorno precedente l'esperimento. I topi vengono tenuti a digiuno per tutta la notte su un supporto per digiuno con fondo a griglia metallica.Per prevenire la fasia, assicurarsi che abbiano libero accesso all'acqua potabile. I topi diabetici non devono essere sottoposti a digiuno per più di 16 ore. La costanza è estremamente importante durante un esperimento di MCN gastrica.Fattori come manipolare i topi sempre nello stesso modo, digiunare i topi alla stessa ora ogni giorno, controllare i livelli di glucosio e somministrare l'insulina alla stessa ora ogni giorno. Anche l'utilizzatore che indossa ogni giorno lo stesso profumo e lo stesso camice da laboratorio è estremamente importante, poiché tutti questi fattori possono alterare i dati di MTN gastrica. I materiali che utilizziamo per la preparazione del pasto a base di uova sono acido ocoico, un becher di vetro, un tubo falcon e una spatola con estremità piegata.Iniziare pesando cinque grammi di tuorlo d'uovo in un tubo falcon da 50 millilitri. Successivamente, aggiungere 10 microlitri di acido okin NOIC con una concentrazione di due microlitri per grammo al tubo falcon contenente il tuorlo e mescolare vigorosamente con la spatola all'interno del tubo falcon. Per un minuto, il tuorlo viene quindi trasferito in un becher di vetro e riscaldato sopra un becco Bunsen fino a quando coagula e raggiunge una consistenza adatta.Per formare delle piccole palline, ci vogliono tipicamente circa 30 secondi. Le palline di tuorlo d'uovo devono pesare 0,2 grammi per topo. È importante mantenere costante la dose cumulativa in tutti i topi.Il nostro intervallo di recupero della dose cumulativa accettabile è compreso tra il 55% e il 100%. Iniziare configurando le camere di svuotamento gastrico. Utilizzare camere e coperchi puliti, precedentemente asciugati all'aria. Inoltre, tutti i tubi che collegano la camera all'analizzatore o alla fornitura di anidride carbonica devono essere privi di umidità.L'umidità può interferire con il segnale rosso rilevato dall'analizzatore. Collegare le camere ai tubi di ingresso che forniscono un flusso d'aria privo di idrocarburi. È fondamentale che questa aria sia sempre costante, poiché ogni variazione nella quantità di anidride carbonica potrebbe alterare il valore di base.Quindi collegare i tubi di uscita dalle camere alla macchina, chiudere i tubi e accendere il flusso d'aria. Applicare una quantità molto piccola di Vaseline all'estremità dei coperchi in modo che si chiudano e si sigillino in modo facile e sicuro. Questo sigillo stretto è necessario per raccogliere tutta l'anidride carbonica prodotta dai topi.Pesare i topi utilizzando un contenitore apposito per topi di piccole dimensioni al fine di ridurre i livelli di stress. Il peso corporeo viene determinato come indicatore del loro stato di salute costante. Successivamente, posizionare ogni topo nella camera appropriata.È importante che in questo momento l'aria fluisca all'interno delle camere. Ogni topo viene impiantato con un dispositivo di tracciamento. I dati relativi al peso, alla glicemia e ai trattamenti del topo vengono registrati mediante un database software che utilizza questo numero.Utilizziamo un software che ci permette di collegare automaticamente il numero identificativo del topo direttamente ai dati archiviati. Questa operazione, naturalmente, può essere eseguita anche manualmente. Per iniziare la misurazione, consentire ai topi di abituarsi alle camere prima di regolare i livelli di aria.Una volta che i topi appaiono calmi, il che può richiedere alcuni minuti, regolare la portata dell'aria per ciascuna camera dei topi. Questo valore può variare da topo a topo. In genere, la portata d'aria viene regolata all'inizio dell'esperimento per assicurare che l'anidride carbonica esalata raggiunga livelli rilevabili con l'apparecchiatura utilizzata e per garantire che il livello rimanga sufficientemente basso da assicurare un ricambio d'aria adeguato.Utilizziamo livelli iniziali di anidride carbonica compresi tra 1000 e 1500 parti per milione; in caso di difficoltà nelle regolazioni, verificare la presenza di perdite d'aria. Successivamente, ripetere il procedimento per ciascuna delle camere e osservare un nuovo ciclo di misurazioni per verificare se le regolazioni effettuate sul flusso d'aria hanno corretto il livello di anidride carbonica. È importante ottenere una lettura stabile di base prima di somministrare il cibo ai topi.Quando ciò viene raggiunto, somministrare il pasto a base di uova al primo topo e registrare l'orario in cui ciascun topo riceve il cibo. Eseguiamo la procedura per quattro ore al fine di ottenere un numero sufficiente di valori per l'adattamento della curva di arricchimento con carbonio 13 dell'anidride carbonica per ogni topo. Controllare i topi ogni 30-60 minuti per assicurarsi che i livelli di anidride carbonica siano ancora sicuri.Per i topi, il nostro apparecchio misura ogni 25 secondi le concentrazioni di anidride carbonica 12, anidride carbonica 13 e acqua. Pertanto, è possibile analizzare contemporaneamente 12 topi con un intervallo di cinque minuti tra una lettura e l'altra. Se si effettuano campionamenti manuali o si utilizza un altro dispositivo, assicurarsi che le letture vengano effettuate a intervalli di almeno cinque-dieci minuti.Preparare nuove scatole contenenti cibo prima della fine del test, in modo che i topi possano iniziare a mangiare immediatamente dopo il termine del test. Questo grafico rappresenta i punti dati di un topo con svuotamento gastrico normale. Mostra la frazione di carbonio 13 recuperata nell'aria espirata, espressa come percentuale della dose somministrata per ora in funzione del tempo.I punti dati vengono adattati a una curva con l'equazione seguente. Perché la percentuale di carbonio 13 recuperata nell'aria espirata per ora e una B e la costante di regressione CA? Il tempo di dimezzamento è calcolato inserendo i parametri di questa curva nella funzione gamma inversa, come stabilito in uno studio precedente del nostro laboratorio; il tempo normale di dimezzamento dello svuotamento gastrico per un topo NOD non diabetico di età compresa tra 9 e 15 settimane varia da 62 a 131 minuti, come rappresentato dal riquadro grigio.La curva blu proviene da un topo con uno svuotamento gastrico accelerato, con un valore di T½ di 40 minuti, mentre la curva rossa proviene da un topo con uno svuotamento gastrico ritardato, con un valore di T½ di 168 minuti. In conclusione, questo video illustra come misurare lo svuotamento gastrico solido mediante un test respiratorio non invasivo. Nei topi, abbiamo mostrato come preparare gli animali per il test, come preparare il cibo e come raccogliere i dati.Questo metodo di misurazione dello svuotamento gastrico solido mediante somministrazione di acido ottanoico marcato con 13 carbonio è stato precedentemente descritto per l'uomo, e noi abbiamo adattato il protocollo per l'uso nei topi. Questo protocollo ci fornisce un metodo prezioso per misurare ripetutamente lo svuotamento gastrico nello stesso topo, consentendo l'analisi dello svuotamento gastrico nello studio di malattie a lungo termine. Esistono diverse possibili applicazioni future di questo metodo.Ad esempio, il test di diversi farmaci per il trattamento della gastroparesi diabetica.

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Questo video introduce come eseguire un test di tolleranza al glucosio orale su un topo da laboratorio.

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La misurazione in vivo delle contrazioni della muscolatura liscia lungo il tratto gastrointestinale degli animali da laboratorio rimane una tecnica potente, anche se sottoutilizzata. Gli estensimetri flessibili a doppio elemento non sono disponibili in commercio e richiedono la fabbricazione. Questo protocollo descrive la costruzione di estensimetri affidabili ed economici per l'impianto acuto o cronico nei roditori.

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La chirurgia bariatrica è il modo più efficace per ridurre il peso corporeo e le complicanze metaboliche mortali (diabete, obesità e dislipidemia) spesso associate all'obesità patologica. I modelli murini di chirurgia bariatrica rappresentano una risorsa unica per decifrare i meccanismi molecolari alla base degli effetti benefici di questi interventi chirurgici su diabete, ipertensione e dislipidemia.

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L'incidenza dell'obesità è in aumento e aumenta il rischio di malattie polmonari croniche. Per stabilire i meccanismi sottostanti e le strategie preventive, animale ben definiti modelli sono necessari. Qui, mettiamo a disposizione tre metodi (prova di tolleranza di glucosio, pletismografia corporea e fissazione del polmone) per studiare l'effetto dell'obesità sui risultati polmonari nei topi.

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Questo protocollo introduce due metodi per l'acquisizione delle immagini nell'ecografia gastrica. Inoltre, vengono forniti suggerimenti per l'interpretazione di queste informazioni per aiutare nel processo decisionale medico.

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Veloce e preciso espirata Ammoniaca misura

Impara a misurare lo svuotamento gastrico nei topi non obesi diabetici utilizzando il test del respiro con acido ottanoico marcato con 13C. Questo metodo non invasivo consente misurazioni ripetute nel tempo per studiare la gastroparesi.

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