5/6th nefrectomia in combinazione con dieta di sale e di ossido nitrico sintasi Inibizione di indurre la malattia renale cronica nel ratto Lewis

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre una malattia renale cronica nel ratto Lewis. Questo risultato si ottiene somministrando innanzitutto il bloccante dell'ossido nitrico, NG-nitro-L-arginina (LNNA), per un periodo di quattro settimane. Successivamente, viene asportato l'intero rene destro.

Poi, una settimana dopo, viene asportato due terzi del rene sinistro. Infine, durante il trattamento con LNNA e una dieta ricca di sale, viene monitorato nel tempo lo sviluppo dell'insufficienza renale nel ratto. Alla fine, si possono ottenere risultati che dimostrano una malattia renale cronica ormai stabilita, attraverso la raccolta di urine per la misurazione delle proteine e dell'emocrito e dell'IAU nel sangue, nel plasma e/o nelle urine e della pressione arteriosa sistolica.

La funzione renale è determinata in definitiva dall'inulina e dal tasso di acido para-aminoippurico, o clearance del PAH. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande fondamentali nel campo della nefrologia, come una migliore comprensione della patologia della malattia renale cronica (CKD), ed è utile per studiare l'effetto di interventi terapeutici. Quattro settimane prima della nefrectomia iniziale, iniziare ad aggiungere 20 milligrammi per litro dell'inibitore della sintasi dell'ossido nitrico LNNA nell'acqua da bere dei ratti.

Secondo questa linea temporale. Prima di iniziare la procedura, utilizzare alcol al 70% per disinfettare il tavolo. Per prepararsi all'intervento chirurgico, iniziare sterilizzando i seguenti strumenti: una pinza studentesca per tessuti da 12 centimetri con uno o due denti, una pinza standard di modello studentesco, due pinze di Simkin, un paio di forbici Mayo, un paio di forbici per iride di tipo studentesco e un portaghiaccio Olson Heger con forbici.

Preparare quindi l'elenco seguente. Un tavolo operatorio con tappetino riscaldante e lampada, ossigeno e isoflurano. Un rasoio, strumenti chirurgici sterili, garze sterili 5x5 e 10x10, alcol al 70%, soluzione di cloruro di sodio 0,9%, una siringa da un millilitro, aghi da 25 gauge, tamponi in gelatina emostatica, punti di sutura Vicryl 4,0 e 5,0, buprenorfina 0,03 milligrammi per chilogrammo e una gabbia pulita per i ratti dopo l'intervento chirurgico.

Dopo aver indotto l'anestesia in una camera di induzione con 4% di isoflurano e aver somministrato la preanalgesia, se necessario trasferire il ratto sul pad riscaldante posizionandolo sul fianco sinistro e ventilarlo mediante un cono nasale con una miscela di 2% di isoflurano e un litro di ossigeno. Depilare il fianco del ratto e disinfettare il sito chirurgico con alcol.

Poiché l'intervento chirurgico avviene in un ambiente semi sterile, disinfettiamo la cute rossa solo con alcol per una preparazione più sterile. Si può utilizzare una detersione con Betadine, indossare un copricapo e una mascherina, quindi lavare e disinfettare le mani prima di indossare i guanti chirurgici sterili. Successivamente, utilizzando pinze anatomiche e forbici ottuse, effettuare un'incisione lunga da uno a un centimetro e mezzo parallela alle costole.

Quindi, mediante dissezione ottusa dei muscoli della schiena, esporre il rene destro. Una volta visibile il polo inferiore del rene, utilizzare le pinzette ottuse piccole per afferrare con cura il tessuto adiposo perirenale. Successivamente, utilizzare le pinzette per tirare delicatamente il tessuto adiposo perirenale, avendo cura di non disturbare la ghiandola surrenale ed esternare il rene per separarlo dalla ghiandola surrenale.

Posizionare una pinza nel sito mediale del tessuto adiposo e spostare delicatamente il tessuto verso l'alto tra la ghiandola surrenale e il rene. Posizionare delicatamente il rene sulla garza e rimuovere ogni tessuto adiposo e connettivo circostante. Identificare l'arteria e la vena renale in modo approssimativo.

Posizionare una legatura con un nodo singolo attorno ai vasi per impedire che scivoli via. Dopo il taglio, spostare con attenzione il nodo libero lungo i vasi in direzione dell’aorta, per circa 0,5 centimetri, in modo da creare uno spazio tra il rene e il nodo. Successivamente, fare due nodi doppi senza tagliare i capi della legatura.

Se la profusione viene arrestata con successo, il colore del rene diventerà immediatamente marrone. Quindi recidere i vasi renali vicino al rene ed asportarlo. Tirare delicatamente sugli estremi lunghi della legatura per verificare l'eventuale sanguinamento dei vasi renali.

La legatura deve rimanere al proprio posto sul vaso. Tagliare le estremità lunghe della legatura. I vasi renali residui si ritrarranno all'interno della cavità addominale.

Chiudere immediatamente il muscolo scheletrico dell'arto posteriore con punti di sutura continui in Vicryl 5,0. Iniettare intramuscolarmente 0,03 milligrammi per chilogrammo di buprenorfina. Quindi chiudere la cute con punti di sutura intradermici in Vicryl 4,0.

Successivamente, asciugare il rene escisso e pesarlo. Lasciare che il ratto si riprenda in una gabbia pulita e singola, posizionata a metà su un tappetino riscaldante con accesso a cibo e acqua, e monitorarlo secondo il protocollo indicato nel testo. Sette giorni dopo.

In previsione di un secondo intervento chirurgico, calcolare il peso di circa due terzi del rene destro e preparare piccoli pezzi di gelatina spugnosa. Ripetere la procedura illustrata per esteriorizzare il rene sinistro e staccare la ghiandola surrenale da esso. Posizionare forbici affilate attorno al polo superiore del rene sinistro ed escindere il polo superiore con un solo movimento, coprendolo immediatamente con un pezzo di gelatina spugnosa ed esercitando una leggera pressione con garza sterile.

Quindi resecare il polo inferiore del rene e ricoprirlo in modo analogo per prevenire la formazione di coaguli sulla cute. Sollevare il rene e utilizzare garza sterile per esercitare una leggera pressione su entrambi i tamponi di gelatina spugnosa fino a quando l'emorragia non si arresta. Se l'emorragia persiste in corrispondenza di un altro tampone, posizionare il rene residuo con i tamponi di gelatina spugnosa aderenti all'interno dell'addome e chiudere il muscolo e la cute.

Seguire la stessa procedura descritta in precedenza per monitorare il recupero e alloggiare il ratto. Dopo la nefrectomia subtotale, rimane circa un sesto della massa renale totale. Questa figura mostra la percentuale calcolata della massa renale asportata del rene destro, con media e deviazione standard.

Negli esperimenti precedenti, nell'arco di una settimana successiva alla nefrectomia dell'organo contralaterale, si verifica un'ipertrofia del rene sinistro, con conseguente leggera sottostima della quantità preferita di tessuto renale da rimuovere, calcolata in base al peso stimato del rene destro. Tuttavia, poiché non è possibile determinare il peso del rene sinistro, questo rappresenta il metodo più accurato per rimuovere circa cinque sesti della massa renale. Il decorso del fallimento renale viene monitorato raccogliendo urine per la misurazione di proteine e creatinina, sangue per l'analisi dell'urea plasmatica e della creatinina, e misurando la pressione arteriosa sistolica.

La clearance della creatinina può essere calcolata, ma tende a sottostimare il calo del FGR a causa della marcata secrezione tubulare di creatinina nei ratti, evidenziando l'importanza del metodo standard aureo per determinare la funzione renale mediante la clearance di inulina e PAH descritto integralmente da Conners. La clearance di inulina e PIH viene calcolata a partire dalla loro concentrazione nel campione urinario, dalla velocità di flusso urinario e dalla loro concentrazione plasmatica. Nel tempo, i ratti con malattia renale cronica o MRC sviluppano ipertensione, anemia emica, proteinuria, una riduzione significativa della velocità di filtrazione glomerulare e del flusso plasmatico renale efficace.

Dopo sei settimane si è sviluppata una CKD consolidata, un punto temporale adatto per testare interventi di salvataggio con maggiore durata; in questo periodo si osserva un forte aggravamento dell'ipertensione e della proteinuria, mentre ematocrito e funzione renale mostrano un lieve peggioramento. Altri sintomi non presi in esame nei nostri esperimenti includono alterazioni del metabolismo del calcio e del fosfato e dei lipidi, e molti altri a seconda della linea di ratti utilizzata. Lo sviluppo della CKD può variare notevolmente a seconda del ratto Lewis impiegato in questo studio.

Una dieta ricca di sale e un inibitore dell'ossido nitrico sono stati somministrati per indurre ipertensione e disfunzione endoteliale. Un piccolo passo. Questa tecnica può essere eseguita in circa da 20 a 50 minuti se viene effettuata correttamente.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come indurre una malattia renale cronica nei loose reds eseguendo una nefrectomia subdues in modo graduale.