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DOI: 10.3791/50647-v
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Noi descriviamo i metodi per l'efficiente e rapido isolamento / cultura della microglia praticabile dalla corteccia cerebrale neonatale e midollo spinale adulto. La dissezione e la placcatura di microglia corticale può essere realizzato entro 90 minuti, con la conseguente raccolta microglia in atto ~ 10 giorni dopo la dissezione iniziale.
L'obiettivo generale di questa procedura è isolare le cellule microgliali primarie dalla corteccia del topo neonatale o dal midollo spinale di un topo adulto. Ciò si ottiene rimuovendo prima il cervello di un cucciolo di topo postnatale o di due cuccioli di topo o di un midollo spinale adulto. Successivamente, le cortecce vengono raccolte dal tessuto neonatale o il tessuto del midollo spinale viene digerito.
Le cellule del tessuto corticale e spinale vengono quindi coltivate fino all'uso sperimentale. Infine, le cellule microgliali neonatali e adulte raccolte possono essere analizzate mediante microscopia immunofluorescente. Il vantaggio principale del nostro protocollo di coltura microgliale neonatale rispetto ai metodi esistenti, come l'agitazione delle cellule microgliali per piastre corticali miste, è che le cellule tornano prontamente a uno stato di riposo e possono fornire un quadro più accurato del comportamento delle cellule microgliali in vivo.
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