Name: Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Scopri come creare distacchi retinici sperimentali nei roditori mediante iniezione sottoretinica di ialuronato di sodio. Questa tecnica riproducibile previene l'emorragia sottoretinica e consente di studiare la morte dei fotorecettori.

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Ringraziamo Wendy Chao per il suo supporto nella revisione critica. Questo lavoro è stato sostenuto da Bausch &amp; Lomb vitreoretinica Fellowship (HM), National Eye Institute concessione EY014104 (JWM), la ricerca per prevenire la cecità Foundation (DGV), Fondo per la ricerca oculistica Lions (DGV), e una generosa donazione della famiglia Yeatts (JWM e DGV).

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con l&#39;Associazione per la Ricerca in Oftalmologia e Vision Statement per l&#39;uso di animali in Oftalmica e Vision Research, e le linee guida e regolamenti stabiliti dal Massachusetts Eye and Ear Infirmary Comitato Animal Care. 1. Pretrattamento <ol><li> Anestetizzare un 8 settimane di età mouse con un&#39;iniezione intraperitoneale di una miscela di 60 mg / kg di ketamina e 6 mg / kg xilazina. </li><li> Tagliare i baffi. Ciò avviene perché interferiscono con la visualizzazione e il posizionamento dello strumento. </li><li> Dilatare la pupilla con il 5% fenilefrina e dello 0,5% tropicamide. </li><li> Tagliare le ciglia. Questo è anche fatto perché interferiscono con la visualizzazione e il posizionamento dello strumento. </li><li> Applica anestesia topica (0,5% proparacaina cloridrato soluzione oftalmica). </li></ol> 2. Chirurgia sotto il microscopio <ol><li> Impostare il mouse in un pos lateraleition con il naso verso il chirurgo. Un pizzico punta viene eseguito per confermare l&#39;anestesia chirurgica e guanti sterili sono indossato prima di iniziare l&#39;intervento chirurgico. </li><li> Incidere la congiuntiva temporale al limbus posteriore e separare la congiuntiva della sclera. Evitare di penetrare la sclera. Dopo questo passo, afferrare la congiuntiva al limbus con una pinza per controllare l&#39;occhio. </li><li> Effettuare un&#39;incisione sclerale autosigillante con la punta di un ago G 30 con la smussatura rivolta verso l&#39;alto. Fare un tunnel sclerale attraverso la sclera e penetrare la sclera nella coroide (Figura 1). Evitare di penetrare la retina. Se l&#39;emorragia si verifica coroide ed esce attraverso la ferita sclerale, eseguire un astriction con una lancia chirurgica fino a quando le fermate sanguinamento. Questa ferita sclerale sarà auto-sigillato con pressione intraoculare. </li><li> Pungere la cornea con un ago 30 G per ridurre la pressione intraoculare. Utilizzare l&#39;ago parallelo alle diaframma per evitare di ferire l&#39;iride e lente durante entry nella camera anteriore. La pressione intraoculare causerà la ferita di auto-guarnizione. </li><li> Inserire un ago G 33 collegato ad una siringa Hamilton 10 microlitri nello spazio sottoretinico con lo smusso rivolto verso il basso (verso l&#39;occhio interiore), e iniettare 3,5 ml di sodio ialuronato delicatamente per staccare la retina neurosensoriale dal RPE sottostante. Evitare di penetrare la retina con l&#39;ago 33 G perché ialuronato di sodio andrà nello spazio vitreo ma non lo spazio sottoretinico se la retina è penetrato. Inoltre, evitare iniezione rapida perché creerà una lacrima orale, e ialuronato di sodio colerà nella camera anteriore. </li><li> Lasciate che l&#39;umore acqueo fuoriuscire dalla puntura della cornea spingendo la cornea intorno alla puntura corneale con una pinza per regolare la pressione intraoculare. </li><li> Confermare l&#39;assenza di perdite dalla ferita sclerale con una sonda chirurgica. </li><li> Per ridurre il rischio di perdite di ialuronato di sodio, collocare cianoacrilato colla chirurgica sula ferita sclerale. </li><li> Riattaccare la congiuntiva nella posizione originale usando cianoacrilato colla chirurgica. Ciò consentirà di ridurre ulteriormente il rischio di perdite ialuronato di sodio. </li><li> Controllare il fondo con un vetro di copertura e confermare la creazione di un RD bollosa, senza emorragia sottoretinico. </li></ol> 3. Dopo il trattamento <ol><li> Applicare bacitracina pomata antibiotica all&#39;occhio per ridurre il rischio di infezione. </li><li> Tenere il mouse su una piastra elettrica per impedire l&#39;anestesia (miscela di ketamina e xilazina) di causare bassa temperatura corporea successiva alla bassa pressione sanguigna. </li><li> Mettere i topi in gabbia animale dopo si risvegliano dall&#39;anestesia. Monitorare i topi al giorno per complicazioni. Se sorgono complicazioni, eutanasia il mouse come descritto di seguito. </li></ol> 4. Sacrificio <ol><li> Euthanize il topo per dislocazione cervicale dopo iniezione intraperitoneale di 100 mg / kg di sodio pentobarbital e enucleaTe gli occhi appropriati intervalli di tempo per ogni esperimento (non mostrato). Evitare di applicare pressione sugli occhi durante enucleazione perché ialuronato di sodio potrebbe fuoriuscire. RDs bollose dovrebbero essere persistente per almeno 14 giorni. </li></ol>

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</ol>

Il Massachusetts Eye and Ear Infirmary ha un interesse di proprietà in tre brevetti statunitensi diretti verso l&#39;uso di verteporfina. Inoltre, il Massachusetts Eye Ear Infirmary ha interesse di proprietà in alcune domande di brevetto dirette alla distruzione selettiva di sottoretinico neovascolarizzazione coroideale per il trattamento della degenerazione maculare e altri disturbi. Il Massachusetts Eye and Ear Infirmary riceve royalties come risultato di questi brevetti e domande di brevetto e il dottor Miller riceve una quota dello stesso in conformità con la Massachusetts Eye and Policy Ear Infirmary istituzionale di brevetti e procedure, che include disposizioni Royalty-sharing. L&#39;autore, il dottor Joan W. Miller, è un membro del consiglio passato ed ex socio di Alcon, Inc., e attualmente è consulente per Alcon, Imagen Biotech, Inc.; ISIS Pharmaceuticals, Kalvista Pharmaceuticals, Regeneron Pharmaceuticals, Inc e ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas servecome consulente per Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Diversi metodi per la creazione di un modello di RD negli occhi di roditori sono stati segnalati 3-15, 22. La maggior parte di loro utilizzano iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio perché è un materiale viscoso comunemente usato durante la chirurgia intraoculare nell&#39;uomo, e non è associata ad alcuna nota tossicità oculare 1-15. Ialuronato di sodio, piuttosto che normale soluzione salina o soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), aumenta la durata del RD. I metodi per l&#39;iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio utilizzare uno dei due approcci: un approccio transvitreal 3-6 o di un approccio transscleral 7-15. Entrambi i metodi vengono eseguite con l&#39;osservazione del fondo. Nell&#39;approccio transvitreal, un iniettore sottoretinico viene introdotto nella cavità vitreale, un retinotomia viene creato nella retina periferica, e il sodio ialuronato viene iniettato nello spazio sottoretinico. In questo metodo, due rotture retiniche sono fatti, che aumenta il rischio di retinal emorragia che potrebbe andare nello spazio sottoretinico. Inoltre, vi è il rischio di lesioni dell&#39;obiettivo quando viene creato il retinotomia. Ci sono diversi metodi modificati per l&#39;approccio transscleral. Nella maggior parte di questi metodi 7-12, dopo riduzione della pressione intraoculare con una puntura camera anteriore, un ago G 30 collegato ad una siringa riempita di ialuronato di sodio è direttamente inserita nello spazio sottoretinico attraverso la congiuntiva, sclera, coroide, e RPE. Il ialuronato di sodio viene quindi iniettato nello spazio sottoretinico. Il rischio di strappo e lente lesioni retiniche con questo metodo transscleral è inferiore che utilizzando l&#39;approccio transvitreal. Tuttavia, il foro praticato nella sclera da un ago 30 G è grande, soprattutto per gli occhi del mouse, e il sodio ialuronato iniettato nello spazio sottoretinico fuoriesce facilmente fuori dall&#39;occhio attraverso la ferita sclerale. Questo porta ad un più basso, RD meno persistente e più morte cellulare dei fotorecettori variabile. Inoltre, se l&#39;emorragia coroideale si verifica inil passo perforazione sclerale, l&#39;emorragia si diffonderà nello spazio sottoretinico perché la pressione intraoculare è stata ridotta prima della iniezione ialuronato sottoretinico. Diversi fattori possono influenzare l&#39;effetto del RD sulla retina distaccata, che comprende sia l&#39;emorragia sottoretinico e l&#39;altezza e la persistenza di RD 16-21. Cellule fotorecettore morte aumenta con l&#39;aumentare dell&#39;altezza del RD 16, 17, e danni alle cellule fotorecettori possono essere più ampia a causa della ridotta diffusione di ossigeno e di nutrienti essenziali dalle coriocapillare con una maggiore RD rispetto a poco RD. Emorragia sottoretinico è anche tossico per le cellule fotorecettrici 18-21; possibili meccanismi di questa tossicità nella retina distaccata comprendono l&#39;ipossia e la distruzione metabolica da emorragia sottoretinico come barriera di diffusione, e neurotossicità diretta indotta da componenti del sangue (come il ferro). Lesioni Lens, che è stato segnalato per avere un effetto protettivo sulla retinacellule gangliari nali 23, possono anche influenzare la morte delle cellule fotorecettori dopo l&#39;induzione di RD. Inoltre, se il sito di entrata ferita non è sigillato, ialuronato di sodio potrebbe fuoriuscire con la manipolazione occhi durante l&#39;enucleazione. Questo può portare alla classificazione errata di un RD come superficiale, che può a sua volta influenzare l&#39;interpretazione dei risultati. Abbiamo modificato il metodo transscleral per l&#39;iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio per aumentare la riproducibilità di RDS e ridurre il tasso di emorragia sottoretinico. La fase critica di questo protocollo è la creazione di un&#39;incisione sclerale autosigillante utilizzando un ago G 30, che impedisce la fuoriuscita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione. A differenza dei metodi precedenti, questo protocollo viene eseguita senza l&#39;osservazione del fondo oculare in modo maggiore attenzione è rivolta alla ferita sclerale. Applicazione di colla impedisce anche il sodio ialuronato di fuoriuscire dell&#39;occhio. Nella nostra esperienza, il tasso di emorragia sottoretinico con questo protocollo wsignificativamente inferiore a quella di altri protocolli. Se l&#39;emorragia coroideale si verifica durante la fase di incisione sclerale, uscirà l&#39;occhio attraverso la ferita sclerale perché questo passo è eseguito prima di ridurre la pressione intraoculare. Se l&#39;emorragia coroideale si verifica dopo la riduzione della pressione intraoculare e distacco della retina neurosensoriale, sangue sezionare nello spazio sottoretinico. Abbiamo trovato che questo accada in circa il 5% dei casi in contrasto con circa il 10-20% con le altre tecniche. Questi animali dovrebbero essere esclusi dall&#39;analisi. Questa tecnica può essere utilizzata anche per l&#39;iniezione sottoretinico mediata da vettori di trasferimento genico per colpire le cellule fotorecettrici o RPE 24, 25. Poiché il veicolo tipico (PBS, soluzione salina) per queste iniezioni è significativamente meno viscoso di ialuronato di sodio, tecniche standard sono afflitti da più perdite. La tecnica qui descritta, riducendo tale rischio, rende esperimenti di trasferimento vettore più riproducibile eaffidabile.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Morte cellulare dei fotorecettori e conseguente diminuzione visiva si verifica quando i fotorecettori sono separati dal sottostante epitelio pigmentato retinico. Separazione fisica dei fotorecettori è visto in vari disturbi della retina, tra cui la degenerazione maculare legata all&#39;età (AMD), corioretinopatia sierosa centrale, retinopatia diabetica e retinopatia della prematurità, nonché rhegmatogenous (cioè causata da una rottura della retina) distacco della retina ( RD). Iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio è un modello ampiamente accettato di creare un RD che porta alla morte cellulare dei fotorecettori, permettono di approfondire la fisiopatologia della degenerazione dei fotorecettori 1-15. Degenerazione dei fotorecettori indotta da sottoretinico iniezione ialuronato di sodio, introdotto nel 2001 7, ha il vantaggio di un corso di tempo ragionevole (giorni o settimane). Tuttavia, può avere un notevole variabilità della perdita dei fotorecettori da animale ad animal a causa di due fattori principali che influenzano la morte cellulare dei fotorecettori dopo RD: 1) l&#39;altezza e la durata della RD, e 2) l&#39;insorgenza di emorragia sottoretinico. C&#39;è una ripida curva di apprendimento tecnico per il metodo che contribuisce ad entrambi i fattori. Aumenti di degenerazione delle cellule fotorecettore con l&#39;altezza del RD, come la distanza tra la epiteliale del pigmento retinico (RPE) livello e fotorecettori aumenta 16-17. Coerentemente con questi rapporti, i nostri esperimenti precedenti hanno mostrato più la morte dei fotorecettori in RDs bollose che RDs poco profonde. E &#39;stato anche riportato che emorragia sottoretinico è tossico per le cellule fotorecettrici e colpisce morte cellulare dei fotorecettori 18-21. Allo stesso modo, abbiamo osservato più fotorecettori morte RDS con emorragia sottoretinico di RDs senza emorragia sottoretinico. Quindi, le tecniche per ridurre al minimo la variabilità devono concentrarsi sul raggiungimento di altezze consistenti di RD evitando emorragia sottoretinico. Il nostro metodo modificato di indurre RD può fare bollosa riproducibile e RD persistente nella stessa posizione dell&#39;occhio con rara presenza di emorragia sottoretinico. Abbiamo eseguito un intervento chirurgico utilizzando un approccio temporale perché è più facile ottenere un campo operatorio più ampio rispetto ad altri siti. Dopo l&#39;incisione congiuntivale, un&#39;incisione sclerale autosigillante è realizzato con un ago G 30. Un tunnel sclerale viene creato, seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide. Se l&#39;emorragia della coroide si verifica in questa fase, l&#39;emorragia uscirà l&#39;occhio attraverso la ferita sclerale, e il sanguinamento può essere fermato da astriction con una lancia chirurgico. Una puntura camera anteriore viene quindi eseguita dalla cornea per ridurre la pressione intraoculare. Questo è un passo importante perché l&#39;iniezione sottoretinico da sola porterà ad un aumento della pressione intraoculare con conseguente occlusione dell&#39;arteria retinica e ischemia della retina interna. A 33 G ago collegato ad una siringa Hamilton 10 microlitri viene quindi inserito nello spazio sottoretinico, e 3,5 μ; L ialuronato di sodio è leggermente iniettato per staccare la retina neurosensoriale dal RPE sottostante. A differenza di altri metodi per indurre RD che vengono eseguite sotto osservazione fundus, questa tecnica viene eseguita sotto osservazione diretta. Dal momento che la ferita sclerale è autosigillante, ialuronato di sodio non fuoriesca dopo l&#39;iniezione. Infine, la colla viene messo sulla ferita sclerale, e la congiuntiva viene ricollegato alla sua posizione originale. Questi dura passi riducono anche il rischio di perdite di ialuronato di sodio. L&#39;iniezione di 3,5 ialuronato di sodio microlitri crea RDs riproducibili (il 50% della retina), agli occhi di 8 settimane di età topi. Creazione del autosigillante ferita è il passo più importante nella nostra procedura modificata perché impedisce la ialuronato di sodio iniettato di fuoriuscire dell&#39;occhio, permettendo così bollosa riproducibile e RDs persistenti.

<table><tbody><tr><td>Ketaject</td><td>Phoenix</td><td>2010025</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed</td><td>LLOYD</td><td>4004821</td><td></td></tr><tr><td>5% fenilefrina / 0,5% tropicamide</td><td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5% proparacaina cloridrato soluzione oftalmica</td><td>AKORN</td><td>17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Provics</td><td>Alcon</td><td>8065183085</td><td></td></tr><tr><td>Webglue</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-8566128</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Leica</td><td>MG90</td><td></td></tr><tr><td>30G1/2 Precision Glide Ago</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Weck-Cel Eye Spears</td><td>Beaver-Visitec</td><td>0008685</td><td></td></tr><tr><td>10 microlitri Siringa</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>33 gauge, ago da 0,5 pollici</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura 18x18mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-548A</td><td></td></tr></tbody></table>

distacco della retina modello in roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio è un metodo ampiamente accettato di indurre distacco di retina (RD). Tuttavia, l&#39;altezza e la durata della RD o il verificarsi di emorragia sottoretinico possono influenzare la morte delle cellule fotorecettrici nella retina distaccata. Quindi, è vantaggioso creare RDs riproducibili senza emorragia sottoretinico per valutare la morte cellulare dei fotorecettori. Abbiamo modificato un metodo riportato in precedenza per creare bollosa e RDs persistenti in una posizione riproducibile con rara presenza di emorragia sottoretinico. La fase critica di questo metodo modificato è la creazione di una incisione sclerale autosigillante, che può impedire la perdita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione nello spazio sottoretinico. Per effettuare l&#39;incisione sclerale autosigillante, un tunnel sclerale viene creato, seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide con un ago G 30. Anche se l&#39;emorragia della coroide può verificarsi durante questa fase, astriction con una lancia chirurgico riduce il tasso di orlo della coroideorrhage. Questo metodo permette un modello più riproducibile e affidabile della morte dei fotorecettori in malattie che coinvolgono RD come rhegmatogenous RD, retinopatia della prematurità, retinopatia diabetica, corioretinopatia sierosa centrale, e la degenerazione maculare legata all&#39;età (AMD).

Per valutare la persistenza del RD fatta da questo protocollo, criosezioni sono stati effettuati nei giorni 3, 7, e 14 dopo l&#39;induzione di RD. Sei occhi sono stati usati per ogni punto temporale. Ematossilina ed eosina (HE) colorazione è stato usato per visualizzare le sezioni. Tutte le sezioni mostrato un RD bollosa avvicinando la lente (Figura 2). Un occhio mostrato emorragia sottoretinico il giorno 7. Nessun occhi mostravano segni di infezioni o lesioni lente. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Figura 1. Creazione un&#39;incisione sclerale autosigillante. Questo schema mostra un&#39;immagine in sezione trasversale di un occhio normale mouse. La linea rossa indica l&#39;autosigillante incisione sclerale. Un tunnel sclerale seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide con un ago G 30 crea un&#39;incisione sclerale autosigillante. Questa ferita scleralesarà auto-sigillato con pressione intraoculare, che può impedire la perdita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione nello spazio sottoretinico e raggiungere persistenti distacchi retinici bollose. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Figura 2. Naturalmente il tempo di distacco di retina. Questa foto fundus mostra un distacco di retina bolloso senza emorragia sottoretinico subito dopo l&#39;intervento chirurgico. Criosezioni con ematossilina ed eosina (HE) colorazione spettacolo persistente distacco di retina bolloso senza emorragia sottoretinico attraverso almeno 14 giorni.

Creazione di distacchi di retina sperimentali con un&#39;altezza riproducibile e sostenuto di distacco, e senza emorragia subretinica, è importante per lo studio della fisiopatologia della perdita di cellule fotorecettori della retina nella malattia e valutare possibili interventi terapeutici. Qui riportiamo tale metodo in dettaglio.

Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare distacchi retinici sperimentali con un'altezza di distacco riproducibile e sostenuta, senza emorragia sottoretinica. Questo viene ottenuto innanzitutto incidendo la congiuntiva temporale al limbo posteriore per separare la congiuntiva dalla sclera. Nel secondo passaggio, la punta di un ago da 30 gauge viene utilizzata per effettuare un'incisione sclerale e una puntura corneale autostabilizzante.Successivamente, il urinato di sodio viene iniettato nello spazio subretinico per staccare la retina neurosensoriale dall'epitelio pigmentato retinico sottostante. Nell'ultima fase, la colla di cianoacrilato viene applicata sulla ferita sclerale e la congiuntiva viene riattecchita alla sua posizione originale, riducendo il rischio di fuoriuscita di urinato di sodio. Infine, il fondo oculare viene esaminato mediante un vetrino per confermare la creazione di un distacco retinico a bolo senza emorragia subretinica.I metodi esistenti per ridurre il distacco della retina nei roditori possono determinare una variabilità nell'altezza e nella persistenza del distacco retinico, portando a misurazioni inconsistenti dei tassi di morte cellulare. Con questa tecnica, è possibile creare distacchi retinici bollosi e persistenti in modo riproducibile, riducendo il rischio di emorragie sottoretiniche e consentendo così un modello affidabile di distacco della retina nei roditori. Il distacco retinico sperimentale nei roditori è relativamente semplice da eseguire, ha una durata ragionevole e presenta notevoli somiglianze con la malattia umana.Pertanto, rappresenta un ottimo modello per lo studio dei meccanismi di morte cellulare dei fotorecettori e delle terapie per prevenire la perdita della vista. Nelle patologie degenerative della retina, sapendo che la morte dei fotorecettori varia nella retina distaccata, è vantaggioso creare un distacco riproducibile senza emorragia sottoretinica. Questo perché una maggiore durata del distacco retinico o la comparsa di emorragia sottoretinica possono influenzare la morte dei fotorecettori.Dopo aver anestetizzato un topo di otto settimane, tagliare i baffi dell'animale, quindi dilatare la pupilla con una soluzione contenente 5% fenilefrina e 0,5% tropicamide sotto un microscopio chirurgico. Incidere la congiuntiva dell'animale, applicare un'anestesia topica con soluzione oftalmica di proparacaina cloridrato 0,5%. Posizionare il topo in posizione laterale con il muso rivolto verso il chirurgo, quindi incisionare la congiuntiva temporale al limbo posteriore, separando la congiuntiva dalla sclera mediante una pinzetta.Afferrare la congiuntiva al limbo per controllare l'occhio. Quindi, tenere un ago da 30 gauge con il bisellino rivolto verso l'alto. Utilizzare la punta dell'ago per creare un tunnel attraverso la sclera, penetrando nella sclera fino al corioide senza attraversare la retina.Successivamente, tenendo l'ago da 30 gauge parallelo all'iride, perforare la cornea per ridurre la pressione intraoculare. Ora orientare il bisello verso il basso. Inserire un ago da 33 gauge collegato a una siringa Hamilton da 10 microlitri nello spazio sottoretinico e iniettare 3,5 microlitri di urinato di sodio.Questo distaccherà circa il 50% della retina neurosensoriale dall'epitelio pigmentato retinico sottostante. Utilizzando pinzette, spingere la cornea intorno alla puntura corneale per permettere al liquido umorale di fuoriuscire attraverso la puntura corneale, quindi utilizzare una punta chirurgica in cellulosa per verificare l'assenza di perdite dalla ferita sclerale al fine di ridurre il rischio di fuoriuscita di urina sodica. Applicare colla di cianoacrilato sulla ferita sclerale e quindi riattaccare la congiuntiva alla sua posizione originale.Utilizzare un vetrino per controllare il fondo oculare e confermare la creazione di un distacco retinico bolloso senza emorragia sottoretinica. Infine, applicare un unguento antibiotico sull'occhio per ridurre il rischio di infezione. Mantenere il topo su un tappetino riscaldante per prevenire l'ipotermia.Successivamente a bassa pressione sanguigna. Restituire l'animale nella sua gabbia dopo che si è risvegliato dall'anestesia. Per valutare la persistenza del distacco retinico indotto con questo protocollo, sono state preparate sezioni criostatiche ai giorni tre, sette e quattordici dopo l'induzione del distacco.Sono stati utilizzati sei occhi per ogni punto temporale, ematossilina ed eosina. La colorazione è stata usata per visualizzare le sezioni, ognuna delle quali mostrava un bolo. Distacco della retina in prossimità del cristallino.Nessun occhio ha mostrato segni di infezione o lesioni al cristallino. Una volta acquisita padronanza, questa chirurgia può essere eseguita in circa cinque minuti. Durante il tentativo di questa procedura, è importante eseguire ogni passaggio con delicatezza per evitare perdite di sodio, emorragia sottoretinica intensa o lesioni al cristallino, tutti fattori che possono influenzare la morte delle cellule recettrici nella retina staccata. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come creare un distacco retinico sperimentale nei roditori con un'altezza di distacco riproducibile e sostenuta, senza emorragia sottoretinica.

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Fonte: Park, S. W., et al. Approccio limbare-Iniezione sottoretinica di vettori virali per la terapia genica nell'epitelio pigmentato retinico di topi. J. Vis. Exp. (2015)Il video descrive il metodo per l'iniezione sottoretinica di vettori virali nell'epitelio pigmentato retinico (RPE) in un modello murino. Descrive in dettaglio la procedura, dall'anestesia e dalla preparazione degli occhi alla consegna precisa del vettore lentivirale, garantendo l'integrazione e l'espressione genica nell'EPR.

Iniezione sottoretinica di vettori virali nell'epitelio pigmentato retinico in un modello murino

Qui presentiamo un protocollo accettato dalla comunità in formato multimediale per l'iniezione sottoretinica di un bolo di cellule RPE in ratti e topi. Questo approccio può essere utilizzato per determinare i potenziali di salvataggio, i profili di sicurezza e le capacità di sopravvivenza delle cellule RPE trapiantate dopo l'impianto in modelli animali di degenerazione retinica.

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Epitelio pigmentato retinico (RPE) strategie di sostituzione e la terapia genica basati sono considerati per diverse condizioni degenerative della retina. Per la traduzione clinica, modelli di grandi dimensioni occhio animali sono tenuti a studiare tecniche chirurgiche applicabili nei pazienti. Qui vi presentiamo un modello di coniglio per la chirurgia sottoretinico orientata verso il trapianto di RPE, che è versatile ed economico.

Un passo per passo protocollo per la chirurgia sottoretinico in Conigli

Le iniezioni sottoretiniche sono la tecnica più comune per somministrare grandi agenti terapeutici come proteine e vettori virali ai fotorecettori e all'epitelio pigmentato retinico. Qui viene descritto un metodo alternativo nei topi che si rivolge con successo allo spazio sottoretinico con danni collaterali minimi e tempi di recupero rapidi.

Un metodo alternativo e validate iniezione per l&#39;accesso ai sottoretinico Spazio<i&gt; via</i&gt; Un approccio Transcleral posteriore

Iniezione subretinal è stato ampiamente applicato negli studi preclinici di terapia sostitutiva delle cellule staminali per degenerazione maculare senile. In questo articolo visualizzato in quel momento, descriviamo una tecnica di iniezione subretinal meno rischioso, riproducibile e precisamente modificati tramite l'approccio trans-sclerale per fornire cellule negli occhi del ratto.

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Qui dimostriamo un nuovo approccio all'utilizzo di tomografia a coerenza ottica spectral-domain ad alta risoluzione (HR-SD-OCT) per assistere la consegna degli agenti di terapia genica nello spazio subretinal, valutare la sua copertura area e caratterizzano la vitalità del fotoricettore.

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Questo articolo descrive i metodi per l'iniezione sottoretinica nei ratti, utilizzando la visualizzazione intraoperatoria per controllare sia il sito di iniezione che l'area di distacco della retina.

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Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

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