Ultrasound Imaging guidata intracardiaca iniezione di sviluppare un modello murino di Breast Cancer metastasi cerebrali Seguito da longitudinale MRI

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare la guida ecografica per stabilire un modello murino di metastasi cerebrali del cancro al seno che può quindi essere monitorato dalla risonanza magnetica. Ciò si ottiene raccogliendo cellule di cancro al seno tropicale cerebrale e iniettandole nel ventricolo sinistro. Con l'assistenza della guida ecografica, viene quindi monitorato lo sviluppo del tumore intracranico.

L'uso della risonanza magnetica e delle metastasi è confermato dalla colorazione h ed e. In definitiva, l'iniezione accurata guidata da immagini può aumentare significativamente il successo del monitoraggio, della formazione e dello sviluppo delle metastasi cerebrali del cancro al seno. La risonanza magnetica longitudinale consente un monitoraggio non invasivo della formazione e dello sviluppo del cancro al seno.

Essis tutte le procedure per animali sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee dell'Università del Texas Southwestern Medical Center per questo protocollo hanno pronte M-D-A-M-B 2 31 cellule B-R-G-F-P coltivate in terreno DMEM contenenti il 10% di FBS, l'1% di glutammina e l'1% di penicillina. La streptomicina monitora sempre le condizioni delle cellule e sostituisce il terreno ogni due o tre giorni. Quando si ottiene l'80% di confluenza, la tripsina guarda e raccoglie le cellule.

Innanzitutto, rimuovere completamente il vecchio mezzo con una pipetta sottovuoto. Quindi aggiungere cinque millilitri di PBS per lavare delicatamente le cellule fino a quando tutte le cellule sono coperte da PBS. Quindi rimuovere il lavaggio.

Quindi, aggiungi 1,5 millilitri di tripsina al piatto. Inclinare delicatamente il piatto per assicurarsi che tutte le cellule siano ricoperte di tripsina. Rimettere il piatto nell'incubatore cellulare a 37 gradi Celsius.

Aspetta un minuto e osserva le cellule al microscopio. Se sono rotondi e fluttuanti, si sono staccati. Aggiungere tre millilitri di terreno per fermare la digestione e pipettare la miscela cellulare in una provetta da centrifuga.

Centrifugare la miscela a 1,160 G per cinque minuti. Quindi rimuovere con cura il fluido utilizzando una pipetta sottovuoto. Successivamente, risospendere delicatamente le cellule in cinque millilitri di terreno privo di siero utilizzando una pipetta fino a quando non si vede alcun pellet cellulare evidente e la soluzione appare omogenea a 50 microlitri della miscela cellulare.

Aggiungere 50 microlitri di trian blue una volta ben miscelato. Aggiungere aliquote da 10 microlitri a diversi vetrini per il conteggio delle cellule. Quindi contare le celle dai valori del contatore di celle.

Calcola e usa la media di tutti i conteggi in oncia. Ora crea una sospensione cellulare più accurata. Centrifugarli nuovamente e risospenderli a 175.000 cellule per 100 microlitri di terreno privo di siero.

Quindi conservare le cellule in ghiaccio per l'iniezione intracardiaca. Per questo protocollo, utilizzare topi nudi BC femmine, di sei-otto settimane. Accedere al sistema di imaging e inizializzare il trasduttore.

7 0 4 a 40 megahertz. Inizia un nuovo studio e compila le richieste di informazioni di conseguenza. Quindi, anestetizzare il topo e somministrare l'anestetico attraverso un cono nasale.

Durante l'iniezione guidata, impostare la temperatura del tavolo di imaging a 37 gradi Celsius e fissare il mouse al tavolo con del nastro adesivo in posizione supina. Mantieni il gel per ultrasuoni a 37 gradi Celsius prima dell'imaging e applicane un po' sul torace del topo. Montare ora il trasduttore nel supporto e abbassarlo alla profondità di imaging desiderata.

Quindi, sposta il tavolino fino a quando il ventricolo sinistro non viene identificato con l'aorta ascendente come punto di riferimento per bloccare il palco in cui la vista è più chiara. Ora aspirare 100 microlitri della miscela di cellule refrigerate in una siringa da un millilitro con un ago da 22 gauge. Fissare la siringa carica al supporto della siringa.

Quindi spostare la siringa verso il torace. E prima di entrare nel mouse, spostarlo con cautela da un lato all'altro finché la punta dell'ago non si trova nel campo visivo dell'imaging. Regolare l'altezza e l'angolazione dell'ago per colpire il ventricolo sinistro e, una volta in posizione, penetrare prontamente l'ago attraverso la pelle e gli strati muscolari nel ventricolo sinistro.

Sotto la guida dell'immagine ecografica, un'indicazione di un inserimento riuscito nel ventricolo sinistro è il reflusso di sangue arterioso rosa fresco nella siringa. Quindi iniettare lentamente la miscela di cellule al termine, estrarre l'ago, sollevare il trasduttore e pulire il gel per ultrasuoni con una garza inumidita. Quindi rilascia l'animale dal nastro e trasferiscilo in una gabbia pulita con un tampone preriscaldato.

Osserva il topo fino a quando non si riprende completamente, quindi controllalo quotidianamente per alcuni giorni. Utilizzando una risoluzione di 78 micron quadrati, le lesioni iperintense della risonanza magnetica possono essere identificate con un diametro di 310 micron. Poiché le metastasi in questo studio erano molto piccole e la necrosi e l'edema erano minimi, la lesione iperintensa sulle immagini pesate T two rappresentava veramente il tumore.

Gli studi di risonanza magnetica longitudinale di massa consentono una valutazione non invasiva in vivo della crescita tumorale. La risonanza magnetica ad alta risoluzione è stata in grado di rilevare diverse piccole lesioni tre settimane dopo l'iniezione intracardiaca nella quarta settimana, le lesioni osservate nella scansione precedente sono diventate tutte più grandi. Altre nuove lesioni sono apparse su T due immagini pesate.

La colorazione H ed E ha rivelato lesioni metastatiche diffuse o lesioni metastatiche di tipo cluster H ed E. Vasi allargati sono stati spesso osservati intorno al tumore, indicando che era in corso un'angiogenesi non germinativa. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire un'iniezione di ago guidata da immagini ecografiche nel ventricolo sinistro di un cuore di topo.