Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di occludere il flusso sanguigno in una parte del cuore per produrre un danno da ischemia e riperfusione. Per simulare un infarto miocardico, ciò si ottiene eseguendo prima una toracotomia per esporre l'arteria discendente anteriore sinistra o LAD. Nella seconda fase, una sutura viene legata attorno al LAD per fermare il flusso sanguigno.

Quindi, dopo un periodo ischemico, la sutura viene rimossa e l'arteria viene riperfusa con il sangue. Nella fase finale, l'incisione chirurgica viene chiusa. In definitiva, la gravità dell'infarto del miocardio può essere misurata mediante l'analisi dei livelli sierici di biomarcatori e dell'istologia del tessuto cardiaco.

Il vantaggio principale del nostro metodo esistente per simulare l'infezione da malardi è che è facile trovare il LED e ottenere la sutura nella posizione corretta. Beh, la dimostrazione visiva è così importante perché le manipolazioni sono molto difficili da imparare, e le descrizioni scritte non trasmettono bene la complessità di quelle manipolazioni. Questa è una procedura abbastanza difficile e, in generale, le persone sono inesperte con essa Avrebbe difficoltà a identificare il LED o a controllare l'emorragia se dovesse iniziare durante la procedura.

Bene, una delle implicazioni è che questo approccio può essere utilizzato per testare i composti terapeutici per la loro efficacia nel trattamento dell'infarto del miocardio. Poiché un modello animale deve essere utilizzato in questi approcci per essere in grado di misurarlo in modo efficace, inizio fissando con nastro adesivo una lunghezza di due sete calde, sutura lunga almeno 10 centimetri su una piattaforma chirurgica. Quindi avvolgere la sutura attorno agli incisivi superiori anteriori del topo anestetizzato, tendere il topo, quindi fissare la coda alla piattaforma e le zampe ai lati del corpo dell'animale.

Dopo aver pulito i siti chirurgici rasati con Betadine e alcool, posizionare la piattaforma con la testa del mouse rivolta verso l'estremità del banco e praticare un'incisione cervicale mediana di 0,5 centimetri nella pelle. Separare i lobi della ghiandola tiroidea in corrispondenza del loro isus per esporre il muscolo Sterno OIDs dove la trachea può essere vista sotto il muscolo. Quindi, rimuovere l'ago interno di un trocar calibro 18 e quindi utilizzare una mano per spostare leggermente la lingua del topo verso l'alto con un paio di pinze curve.

Trova la trachea attraverso l'incisione della pelle cervicale e quindi usa l'altra mano per inserire delicatamente il tubo di intubazione del trocar finché non è visibile all'interno della trachea. Ora, impostare un respiratore per animali che sfiata il 2% di isoflurano in ossigeno a una portata di 0,4 litri al minuto per fornire ventilazione artificiale all'animale, utilizzando un connettore a forma di Y modificato per collegare il tubo di intubazione al ventilatore, il corretto posizionamento del tubo tracheale può essere confermato giudicando l'espansione simmetrica del torace. Rimuovere il nastro adesivo sulla coda e ruotare delicatamente il mouse per posizionarlo in posizione di decubito laterale destro per il successivo intervento chirurgico.

Quindi fissare nuovamente la coda e le zampe alla piattaforma con del nastro adesivo per eseguire la toracotomia. Innanzitutto, praticare un'incisione obliqua lunga circa un centimetro e a due millimetri di distanza dal bordo sternale sinistro nella direzione in cui la gamba anteriore sinistra incontra il corpo. Circa uno o due millimetri sotto il punto in cui la gamba e il corpo si uniscono.

La vena toracica superficiale si trova vicino a questo sito e l'incisione deve essere praticata in modo che l'estremità laterale dell'incisione arrivi fino alla vena, ma non tagli la vena. Taglia il muscolo toracico per esporre le costole sottostanti. Facendo attenzione ad evitare lesioni accidentali all'imbarcazione.

Quindi aprire la cavità toracica con un'incisione da sei a otto millimetri nel terzo spazio intercostale, a un minimo di due millimetri dal bordo sternale dove si trova l'arteria toracica interna, facendo attenzione a non danneggiare l'arteria. Quindi, inserire i divaricatori toracici fatti in casa nell'incisione e tirare delicatamente indietro per aprire l'incisione fino a quando non è larga da otto a 10 millimetri. Facendo attenzione a evitare il polmone, il cuore dovrebbe ora essere parzialmente visibile sotto i polmoni.

Usa la pinza curva per sollevare delicatamente il pericardio, separarlo e quindi far scorrere il tessuto dietro il divaricatore. Ora usa un cannocchiale da dissezione per localizzare l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra, o LAD, che corre lungo il centro della parete cardiaca da vicino all'apice del cuore fino al ventricolo sinistro e appare rosso vivo e fortemente pulsante sulla superficie del cuore. La vena cardiaca viene talvolta scambiata per la LAD, tuttavia un'illuminazione adeguata può aiutare a distinguere i due vasi.

Se l'illuminazione è troppo intensa, può essere difficile visualizzare le differenze di colore tra i vasi. Quindi posizionare un frammento di cotone da uno a due millimetri tra l'atrio sinistro e il ventricolo sinistro. Per sollevare l'atrio sinistro e per aiutare a esporre il LAD e chiarire la sua posizione, utilizzare il tronco polmonare per identificare l'oracolo sinistro per tenere il cuore in posizione e semplificare la legatura applicare delicatamente una pressione immediatamente sotto il punto di legatura previsto circa due millimetri più in basso della punta dell'oracolo sinistro.

Quindi utilizzare un ago affusolato per far passare una sutura di seta di sei volte sotto il LAD, facendo attenzione a non entrare nella camera del ventricolo sinistro o a danneggiare il LAD. Fai un doppio nodo sciolto con la sutura, lasciando un anello di due o tre millimetri di diametro. Quindi posizionare un pezzo di tubo in PE 10 lungo due o tre millimetri attraverso l'anello e stringere l'anello attorno all'arteria e al tubo.

Fissare l'anello facendo un nodo scorsoio aggiuntivo, facendo attenzione a non danneggiare la parete del ventricolo. Confermare l'occlusione del LAD controllando la comparsa di un pallido o colore nella parete anteriore del ventricolo sinistro, che dovrebbe apparire entro pochi secondi dalla legatura. Quindi rimuovere il divaricatore e pizzicare la pelle insieme a una pinza per bulldog per chiudere temporaneamente la ferita dopo il periodo di ischemia, rimuovere la pinza per bulldog e inserire i divaricatori toracici per esporre la legatura.

Quindi sciogliere il nodo e rimuovere il tubo PE 10 Dopo 15-20 secondi, confermare la riperfusione osservando un ritorno del colore rosso rosa nella parete anteriore del ventricolo sinistro. Infine, per chiudere la cavità toracica, l'incisione si chiude nel terzo spazio intercostale con quattro suture di seta aut. Facendo attenzione a mantenere i polmoni liberi dalla sutura mentre si legano i nodi della sutura.

Applicare una leggera pressione sul torace con il porta-aghi per ridurre al minimo l'aria che potrebbe rimanere intrappolata nella cavità toracica. Successivamente, utilizzare quattro suture di seta aut continue per chiudere tutti gli strati muscolari del torace, quindi utilizzare suture di nylon per chiudere la pelle con un'altra sutura continua. Quando la sutura è completa, interrompere il flusso di isoflurano mentre l'ossigeno continua a fluire.

Quindi, dopo aver monitorato attentamente l'animale fino a quando non riprende un normale schema respiratorio, estubare il topo, rimuovendo lentamente il tubo per evitare l'aspirazione di qualsiasi cavità orale. L'applicazione delle secrezioni del colorante blu di maggese consente la risoluzione dell'area del cuore in cui si verifica l'occlusione del LAD, mentre i cuori che non sono colorati con colorante blu mostrano solo l'area dell'infarto dopo 24 ore di infarto di riperfusione. Le aree in bianco dovrebbero essere distinguibili dalle aree a rischio in rosso e dalle aree non a rischio.

Nel blu le dimensioni dell'infarto dipendono dalla durata dell'ischemia. È importante sottolineare che i livelli oculari di troponina cardiaca sono bassi negli animali operati in modo fittizio che si sottopongono a tutte le procedure chirurgiche tranne l'ischemia e la riperfusione, rispetto agli animali che subiscono infarto del miocardio. Ciò indica che l'intervento chirurgico fittizio non produce una patologia cardiaca significativa, mentre il danno da riperfusione ischemica è sufficiente a produrre un aumento di questo biomarcatore ampiamente utilizzato per l'infarto del miocardio.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come condurre un intervento chirurgico di sopravvivenza nei topi per simulare l'infezione da malardi Bene, seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'istologico, la colorazione del cuore per determinare le dimensioni dell'infarto e l'efficacia di diverse terapie. È importante ricordare che, poiché si tratta di una procedura invasiva, è necessario gestire correttamente il dolore e l'angoscia, ed è importante gestire quel dolore fornendo analgesici in conformità con le linee guida locali, le linee guida istituzionali e le linee guida nazionali. Una cosa importante da ricordare per questo esperimento è progettarlo in modo da rispondere alla tua domanda specifica.

Ad esempio, se è necessario avere un grave infarto, potrebbe essere necessario prolungare il periodo ischemico durante l'intervento chirurgico.