Name: Isolamento dei Piccoli RNA non codificanti dal siero umano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Impara a isolare piccoli RNA non codificanti di alta qualità dal siero umano utilizzando un protocollo ottimizzato con tubi phase lock e centrifugazione flash. Questo metodo migliora la resa e la purezza per applicazioni di ricerca biomedicale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Samantha Khoury e Pamela Ajuyah sono supportati dalla Australian Postgraduate Award. Vorremmo inoltre ringraziare il Translational Cancer Research Network, Lowy Centro di Ricerca sul Cancro, Università del New South Wales e l&#39;Unità di ricerca sul cancro del Nord traslazionale per il loro sostegno supplementare di Samantha Khoury.

Nota: campioni di siero umano da pazienti sani o pazienti con cancro sono stati ottenuti con il consenso informato ai sensi approvati i protocolli etici umani del Royal Prince Alfred Hospital di Sydney (numero di protocollo X10-0016 e HREC/10/RPAH/24) e l&#39;University of Technology, Sydney. I campioni di siero sono stati raccolti da pazienti prima dell&#39;intervento chirurgico da vari ospedali di Sydney e posti in stoccaggio a -80 ° C. 1. Small RNA Isolation da siero L&#39;RNA totale è stato preparato da siero umano utilizzando una versione modificata del protocollo LS Tri-Reagent RT. <ol><li> Scongelare campione di siero congelato su ghiaccio e poi il trasferimento di 400 ml di siero appena scongelato in una provetta etichettata. </li><li> Diluire il siero con 100 ml di RNasi libero H 2 O e aggiungere proteinasi K alla concentrazione di 1 mg / ml. </li><li> Incubare a 37 ° C per 20 minuti per consentire la digestione delle proteine ​​da proteinasi K. </li><li> To garantire la completa solubilizzazione, aggiungere 1,5 volte il suo volume di Tri-reagente RT LS e 100 ml di 4-bromoanisole. </li><li> Brevemente invertire l&#39;omogeneizzato, eseguire pipettaggio ripetitivo per 5 secondi e trasferire in una provetta etichettata 2 ml Heavy Phase Lock. </li><li> Centrifugare l&#39;omogeneizzato a 12.000 xg per 20 min a 4 ° C. </li><li> Decantare attentamente almeno 1 ml di soluzione acquosa risultante in una fiala LoBind DNA. L&#39;interfase organico e dovrebbe essere intrappolato sotto il gel bianco del tubo Phase Lock. </li><li> Aggiungere 5,0 ml di glicogeno (5 mg / ml) e 500 ml di isopropanolo al 100% alla soluzione acquosa, miscelare capovolgendolo, e incubare O / N a -20 ° C. </li><li> Seguendo O / N incubazione, centrifugare il campione per 20 minuti a 12.000 xg in una centrifuga 4 ° C. </li><li> Eliminare il surnatante limpido ed effettuare un giro &quot;flash&quot; per 2 min a 16.000 × g in un 4 ° C centrifuga. </li><li> Rimuovere con attenzione il chiaro solution circonda il pellet con una pipetta. </li><li> Lavare il pellet con 1 ml di etanolo al 70% e centrifugare a 10.000 xg per 10 min. Decantare la soluzione di lavaggio e ripetere la fase di lavaggio. </li></ol> 2. RNA Resuspension in Solution <ol><li> Risospendere il pellet in 10 ml di RNasi libero H 2 O, garantendo il pellet è completamente sciolto. Per assicurare che l&#39;RNA viene completamente solubilizzata il campione può essere riscaldata a 55 ° C per 5 min. Durante questo tempo, mescolare il campione con pipettaggio ripetuto. Per un rendimento RNA totale più alto, in comune due preparazioni di RNA dallo stesso paziente. </li><li> Quantificare l&#39;RNA risospeso con un UV-Vis spettrofotometro e valutare la qualità RNA utilizzando un bioanalizzatore 2100. Conservare i campioni di RNA aggregati a -80 ° C per uso nelle applicazioni a valle. </li></ol>

<ol><li>Babu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+extraction+efficiency+of+small+RNAs+with+the+Agilent+2100+Bioanalyzer+and+the+Small+RNA+Kit%5BTitle%5D)+AND+%22Agilent+Application+Note%22%5BJournal%5D)">Monitoring extraction efficiency of small RNAs with the Agilent 2100 Bioanalyzer and the Small RNA Kit.</a> Agilent Application Note. , (2010).</li>
<li>Tran, N., Hutvagner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis+and+the+regulation+of+the+maturation+of+miRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biogenesis and the regulation of the maturation of miRNAs.</a> Essays Biochem. 54, 17-28 (2013).</li>
<li>Chim, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+characterization+of+placental+microRNAs+in+maternal+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection and characterization of placental microRNAs in maternal plasma.</a> Clin. Chem. 54, 482-490 (2008).</li>
<li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cancer+with+serum+miRNAs+on+an+oligonucleotide+microarray%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Detection of cancer with serum miRNAs on an oligonucleotide microarray.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microRNAs+in+serum%3A+a+novel+class+of+biomarkers+for+diagnosis+of+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of microRNAs in serum: a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases.</a> Cell Res. 18, 997-1006 (2008).</li>
<li>Burgos, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+extracellular+miRNA+in+human+cerebrospinal+fluid+by+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing.</a> RNA. 19, 712-722 (2013).</li>
<li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Anal. Biochem. 162, 156-159 (1987).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+miRNA+processing+and+expression+in+pleomorphic+adenomas+of+the+salivary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Alterations in miRNA processing and expression in pleomorphic adenomas of the salivary gland.</a> Int. J. Cancer. 124, 2855-2863 (2009).</li>
<li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction%3A+twenty-something+years+on%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on.</a> Nat. Protoc. 1, 581-585 (2006).</li>
<li>Kirschner, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemolysis+during+sample+preparation+alters+microRNA+content+of+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haemolysis during sample preparation alters microRNA content of plasma.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Murphy, N. R., Hellwig, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+nucleic+acid+organic+extraction+through+use+of+a+unique+gel+barrier+material%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Improved nucleic acid organic extraction through use of a unique gel barrier material.</a> Biotechniques. 21, 934-936 (1996).</li>
<li>Taylor, C. J., Satoor, S. N., Ranjan, A. K., Pereira e Cotta, M. V., Joglekar, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+measurement+of+noncoding+RNA+in+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Diabetes+Research%22%5BJournal%5D)">A protocol for measurement of noncoding RNA in human serum.</a> Experimental Diabetes Research. 2012, (2012).</li>
<li>Ichikawa, M., Akiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Combination+of+Extraction+Reagent+and+DNA+Microarray+That+Allows+for+the+Detection+of+Global+MiRNA+Profiles+from+Serum%2FPlasma%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">A Combination of Extraction Reagent and DNA Microarray That Allows for the Detection of Global MiRNA Profiles from Serum/Plasma.</a> Methods Mol. Biol. 1024, 247-253 (2013).</li>
<li>Fromm, B., Harris, P. D., Bachmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+preparations+from+individual+monogenean+Gyrodactylus+salaris-a+comparison+of+six+commercially+available+totalRNA+extraction+kits%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res.+Notes%22%5BJournal%5D)">MicroRNA preparations from individual monogenean Gyrodactylus salaris-a comparison of six commercially available totalRNA extraction kits.</a> BMC Res. Notes. 4, 217 (2011).</li>
<li>Li, Y., Kowdley, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+microRNA+isolation+from+clinical+serum+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Method for microRNA isolation from clinical serum samples.</a> Anal. Biochem. 431, 69-75 (2012).</li>
<li>McAlexander, M. A., Phillips, M. J., Witwer, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Methods+for+miRNA+Extraction+from+Plasma+and+Quantitative+Recovery+of+RNA+from+Cerebrospinal+Fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Comparison of Methods for miRNA Extraction from Plasma and Quantitative Recovery of RNA from Cerebrospinal Fluid.</a> Frontiers in Genetics. 4, 83 (2013).</li>
<li>Kim, Y. K., Yeo, J., Kim, B., Ha, M., Kim, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+structured+RNAs+with+low+GC+content+are+selectively+lost+during+extraction+from+a+small+number+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Short structured RNAs with low GC content are selectively lost during extraction from a small number of cells.</a> Mol. Cell. 46, 893-895 (2012).</li>
</ol>

Non c&#39;è nulla da rivelare.

La popolazione dei microRNA costituisce circa il 0,4-0,5% del RNA totale ritrovate nel siero. Inoltre vi è anche un alto contenuto proteico trovato nel siero umano. Per migliorare RNA e ridurre proteine ​​e fenolo contamina abbiamo modificato il tradizionale approccio Chomczynski 9 con l&#39;aggiunta di diversi passaggi. L&#39;RNA totale è stato isolato dal siero utilizzando lo standard Tri-Reagent RT-LS (Centro di Ricerca Molecolare) tuttavia quando eseguite nel nostro laboratori...

Negli ultimi anni, c&#39;è stata una spinta crescente a scoprire nuovi biomarcatori per la diagnosi precoce delle malattie umane. Molta attenzione è stata focalizzata sull&#39;uso di piccoli RNA come microRNA 2 (miRNA o miR) come potenziali marcatori. Questi piccoli RNA sono presenti nei fluidi corporei come siero e studi hanno dimostrato che sono resistenti alla degradazione e sono stabili in un intervallo di variazione delle condizioni ambientali 3. Poiché questi miRNA caratteristiche, siero o circolanti sono il biomarcatore ideale 4, 5. Attualmente ci sono due approcci principali per l&#39;isolamento di piccoli RNA da fluidi biologici. Il primo approccio utilizza la tecnologia basata su colonne di impegnare ed eluire i piccoli RNA 6, mentre il secondo approccio utilizza il protocollo di lunga data con fenolo e guanidina tiocianato reagenti 7. Abbiamo sviluppato un efficace, semplice protocollo, senza colonne per isolare piccoli RNA da siero umano. L&#39;RNA isolato è immediatamentediatamente utilizzabili in applicazioni a valle, compresi gli array di oligonucleotidi di DNA e RNA sequenziamento. Questo protocollo è stato sviluppato perché eravamo di fronte a diversi problemi quando si utilizzano metodi basati fenolo-per isolare l&#39;RNA dal siero. L&#39;approccio tradizionale Chomczynski è spesso utilizzato nella maggior parte dei laboratori con una gamma di reagenti disponibili dalla maggior parte dei fornitori commerciali. Tuttavia, considerando la loro diffusione, non sono stati sviluppati orientamenti rigorosi per produrre costantemente RNA di alta qualità da fluidi corporei, in particolare sangue o siero. Problemi comuni associati con isolare RNA da siero comprendono basse rese di RNA e la contaminazione con reagenti utilizzati durante l&#39;isolamento, in particolare fenolo. Il nostro approccio elimina questi contaminanti fenolo per fornire RNA di alta qualità per l&#39;analisi a valle come la PCR quantitativa (qPCR) e RNA sequenziamento. Abbiamo inoltre testato questo RNA array miRNA.

<table><tbody><tr><td>Tri-Reagente RT LS</td><td>Molecular Research Center, USA</td><td>TR 118</td><td></td></tr><tr><td>Senza RNasi H2O</td><td>GIBCO Invitrogen</td><td>10977-023</td><td></td></tr><tr><td>Proteinasi K</td><td>Finnzymes, Finlandia</td><td>EO0491</td><td></td></tr><tr><td>Provetta ad aggancio di fase pesante</td><td>5PRIME</td><td>2302830</td><td>capacità 2 ml</td></tr><tr><td>Provetta DNA Lobind</td><td>Eppendorf</td><td>0030 108.078</td><td>1,5 ml capacità</td></tr><tr><td>Glycogen</td><td>Invitrogen, USA</td><td>10814-010</td><td>5 mg/ml</td></tr><tr><td>Isopropanolo di grado RNA</td><td>Sigma Aldrich, USA</td><td>I9516</td><td>Centrifuga refrigerata al 100%</td></tr> <tr><td></td><td>Spettrofotometro UV Vis John Morris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanolo di grado RNA</td><td>Sigma Aldrich, USA</td><td>E7023</td><td>70%</td></tr><tr><td>Bioanalizzatore Agilent 2100</td><td>Agilent, Stati Uniti</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento dei piccoli rna non codificanti dal siero umano

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

L&#39;analisi di RNA e la sua espressione è una caratteristica comune in molti laboratori. Di rilievo è la nascita di piccoli RNA come microRNA, che si trovano nelle cellule di mammifero. Questi piccoli RNA sono geni regolatori potenti che controllano le vie vitali come la crescita, lo sviluppo e la morte e molto interesse è stato rivolto al loro espressione nei fluidi corporei. Ciò è dovuto alla loro disregolazione in malattie umane come il cancro e il loro potenziale applicazione come biomarker sierici. Tuttavia, l&#39;analisi di espressione miRNA nel siero può essere problematico. Nella maggior parte dei casi la quantità di siero è limitante e siero contiene basse quantità di RNA totale, di cui piccoli RNA costituiscono solo 0,4-0,5% 1. Così l&#39;isolamento di una quantità sufficiente di RNA qualità dal siero è una sfida importante per i ricercatori di oggi. In questo documento tecnico, si dimostra un metodo che utilizza solo 400 ml di siero umano per ottenere RNA sufficiente sia per matrici di DNA o analisi qPCR. L&#39;unadvantages di questo metodo sono la sua semplicità e la capacità di produrre RNA di alta qualità. Non richiede colonne specializzati per la purificazione dei piccoli RNA e utilizza reagenti generali e hardware presenti nei laboratori comuni. Il nostro metodo si usa un blocco Gel Fase per eliminare la contaminazione fenolo mentre allo stesso tempo cedevole RNA di alta qualità. Abbiamo anche introdurre un ulteriore passo per rimuovere ulteriormente tutti gli agenti inquinanti durante la fase di isolamento. Questo protocollo è molto efficace per isolare rese di RNA totale fino a 100 ng / ml di siero ma può anche essere adattato per altri tessuti biologici.

Figura 1 rappresenta un tipico spettro UV / Vis di RNA isolato dal siero. Da questo profilo abbiamo notato contaminazione proteina a 280 nm con fenolo e contaminanti organici sia a 270 nm e 230 nm, rispettivamente. Residue guanidina tiocianato stato inoltre osservato a 260 nm. Per ridurre i contaminanti, una serie di passaggi di ottimizzazione hanno fatto la procedura RT-LS Tri-reagente standard. Abbiamo aggiunto 5 mg / ml di glicogeno di aumentare sia il rendimento totale RNA e ridurre la contaminazion...

Questo protocollo descrive un metodo per l&#39;estrazione di piccoli RNA da siero umano. Abbiamo usato questo metodo per isolare microRNA da siero cancro per uso in matrici di DNA e anche singleplex PCR quantitativa. Il protocollo utilizza fenolo e guanidina tiocianato reagenti con modifiche a produrre RNA di alta qualità.

Isolamento dei Piccoli RNA non codificanti dal siero umano

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare RNA di alta qualità da campioni di siero. Utilizzando la nostra versione ottimizzata del comune protocollo MRC con reagente RTLS. Ciò viene ottenuto diluendo innanzitutto il siero in un rapporto uno a cinque con acqua priva di nucleasi per ridurre la contaminazione proteica.Il secondo passaggio consiste nell'introdurre due provette con gel separatore di fase per il primo passaggio di centrifugazione. Questo trattiene la maggior parte delle sostanze contaminanti, come il fenolo e le proteine, nella fase organica. Successivamente, il terzo e ultimo passaggio di ottimizzazione è una breve centrifugazione a 12.000 ×g, che elimina qualsiasi contaminante residuo dal pellet di RNA prima dei lavaggi con etanolo.L'ultimo passaggio consiste nell'unire due preparati di RNA modificati provenienti dallo stesso paziente se è richiesto un resa totale di RNA più elevata. Utilizzando infine questo metodo modificato, che solubilizza il siero in acqua priva di nucleasi e impiega una provetta con blocco di fase per trattenere i principali contaminanti e introduce una centrifugazione rapida, dimostriamo che è possibile massimizzare il recupero di picco

isolation-of-small-noncoding-rnas-from-human-serum

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

In questo documento vengono utilizzati dei metodi per la purificazione isolamento, e la rilevazione di esosomi, nonché le tecniche per l'analisi del loro contenuto molecolare. Questi metodi sono adattabili per l'isolamento exosome da supporti sia la cultura di cellule e fluidi biologici, e può al di là di analisi del contenuto molecolare essere utile anche per studi funzionali.

Isolamento e caratterizzazione di RNA contenenti esosomi

Molti mRNA codificanti proteine ​​mitocondriali sono associate alla membrana esterna mitocondriale. Descriviamo una procedura di frazionamento subcellulare volta a isolamento dei mitocondri di lievito con i suoi mRNA e ribosomi associati. Questo protocollo può essere applicato a cellule cresciute in condizioni diverse per rivelare meccanismi di localizzazione mRNA e traduzione localizzata vicino ai mitocondri.

Isolamento di mRNA associati con mitocondri di lievito per studiare i meccanismi di traduzione localizzata

Questo manoscritto descrive un approccio per isolare RNP affini selezionati formati in cellule eucariotiche tramite uno specifico arricchimento diretto da oligonucleotidi. Dimostriamo l'applicabilità di questo approccio isolando un RNP affine legato alla regione retrovirale 5' non tradotta che è composta da DHX9/RNA elicasi A.

Isolamento di cognate Complessi RNA-proteina da Cellule con eluizione oligonucleotidi-diretto

Le interazioni RNA-proteina sono al centro di molti processi cellulari. Qui, descriviamo un metodo in vivo per isolare RNA specifico e identificare nuove proteine ad esso associate. Questo potrebbe gettare nuova luce su come gli RNA sono regolati nella cellula.

Novel RNA-Proteine ​​leganti isolamento dalla rapida Metodologia

Questo protocollo descrive l'isolamento e la quantificazione di piccoli RNA di lipoproteine ad alta densità.

Isolamento di lipoproteine ​​ad alta densità per non codificante Piccolo RNA Quantificazione

È descritta una procedura di isolamento di RNA (viaggio) tandem per il recupero dei complessi in modo endogeno formato mRNA-proteina. In particolare, complessi RNA-proteina sono reticolate in vivo, poliadenilazione RNAs sono isolati dagli estratti con i branelli di oligo e particolare mRNA vengono catturati con oligonucleotidi antisenso RNA modificati. Proteine legate a mRNA vengono rilevati dall'analisi del immunoblot.

Una procedura di isolamento del RNA basati su Oligonucleotide Tandem recuperare mRNA-proteina eucariotica complessi

Questo protocollo viene illustrato come purificare i microRNA extracellulari da terreni di coltura cellulare per piccoli RNA libreria costruzione e sequenziamento di nuova generazione. Vari punti di controllo di controllo di qualità sono descritti per permettere ai lettori di capire cosa aspettarsi quando si lavora con campioni di ingresso bassi come exRNAs.

Isolare, sequenziamento e analisi dei microRNA extracellulari dalle cellule staminali mesenchimali umane

In questo articolo viene descritta una strategia dettagliata per l'isolamento di piccoli RNA, l'arricchimento dei microRNA e la preparazione di campioni per il sequenziamento ad alto valore di velocità effettiva. Viene quindi descritto come elaborare le letture di sequenza e allinearle ai microRNA, utilizzando strumenti open source.

Una pipeline completa per l'isolamento e la sequenza dei microRNA e la loro analisi tramite gli strumenti open source

Gli RNA circolari (circRNA) sono RNA non codificanti che possono avere ruoli nella regolazione trascrizionale e nelle interazioni di mediazione tra proteine. A seguito della valutazione di diversi parametri per la costruzione di librerie di sequenziamento di circuitRNA, è stato compilato un protocollo che utilizza la preparazione della libreria totale di RNA spiaggiata con il pretrattamento di RNase R ed è presentato qui.

Identificazione di RNA circolari mediante il sequenziamento dell'RNA

Il presente protocollo descrive l'isolamento dei microRNA dalle ghiandole salivari delle zecche e dalle vescicole extracellulari purificate. Questa è una procedura universale che combina reagenti e forniture comunemente usati. Il metodo consente anche l'uso di un piccolo numero di zecche, con conseguente microRNA di qualità che possono essere facilmente sequenziati.

Isolamento di microRNA da colture di ghiandole salivari Tick Ex Vivo e vescicole extracellulari

Impara a isolare piccoli RNA non codificanti di alta qualità dal siero umano utilizzando un protocollo ottimizzato con tubi phase lock e centrifugazione flash. Questo metodo migliora la resa e la purezza per applicazioni di ricerca biomedicale.

Isolamento dei Piccoli RNA non codificanti dal siero umano

Esplora altri video