Name: Molecular Profiling del microambiente tumorale invasiva in un modello 3-Dimensional delle cellule del cancro colorettale e Ex vivo fibroblasti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Scopri il profilo molecolare del microambiente tumorale nel cancro colorettale usando modelli organotipici 3D e microdissezione laser. Questo metodo isola cellule invasive e stromali per analisi differenziale.

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MB è sostenuto da sovvenzioni da una borsa di studio MRC. KP e AHM sono supportati da finanziamenti provenienti dal Wessex Medical Research e Cancer Research UK / RCS (Inghilterra) (C28503/A10013). Siamo grati per il sostegno dell&#39;Università di Southampton Histochemistry Unità di Ricerca.

1. Istituzione di primaria fibroblasti culture da colon espianti <ol><li> Ottenere campioni di tessuto normale del colon umano mucosa direttamente dalla sala operatoria chirurgica, e sospendere in 7-10 ml di PBS completato con 100 unità / ml di penicillina, 100 pg / ml streptomicina, e 0,25 mg / ml Fungizone. </li><li> In laboratorio, porre il campione al centro di 10 cm piatto di coltura tissutale e lavare 3 volte con PBS / Pen-strep / Fungizone. Non aspirare dopo il lavaggio finale. </li><li> Con pinze sterili e bisturi, tagliare il tessuto in piccoli pezzi (circa 2 mm) e posizionare ogni pezzo al centro di una croce disegnata con il bisturi in un 12-pozzetti. Rock the bisturi dolcemente sul tessuto per permettergli di aderire. </li><li> Cultura esemplari in 750 microlitri mezzi di crescita dei fibroblasti primari (DMEM integrato con siero del 20% di vitello fetale (FCS), 100 U / ml di penicillina, 100 mg / ml di streptomicina e 292 mg / ml L-glutammina), che dovrebbe submerge tessuto senza consenta di galleggiare. Evitare di disturbare la piastra per i prossimi 5 giorni se non per ri-alimentazione ogni 2 giorni. </li><li> Nel corso dei prossimi 5 giorni fibroblasti lentamente inizia a crescere fuori dal bordo del tessuto. A circa 7 giorni, questo sarà più visibile. Dopo circa 3-4 settimane, e se ci sono sufficienti fibroblasti crescita fuori, aggiungere 750 microlitri tripsina a ciascun pozzetto. Dopo che le cellule hanno staccato (che può richiedere 5-10 min), la piscina e il trasferimento di un tessuto pallone di T-25 cultura. </li></ol> 2. Organotipica Preparazione Preparazione del fibroblasto impregnato gel organotipico: <ol><li> Preparare una sospensione cellulare di fibroblasti contenente 5 x 10 5 cellule per organotipico in DMEM supplementato con 10% FCS e 292 ug / ml di L-glutammina. </li><li> Portare i gel organotipica sul ghiaccio, nei seguenti rapporti: <ul><li> 7 volumi di collagene Rat-coda: Matrigel mix (1:1) </li><li> 1 volume di filtrato 10x DMEM </li><li> 1 volume di FCS </li><li> 1 volume di sospensione cellulare di fibroblasti contenente 5 x 10 5 fibroblasti Per 9 gel (1 ml per gel) preparare 10 ml e mescolare delicatamente per evitare le bolle. </li></ul></li><li> Aggiungere 1 ml a ciascun pozzetto di una piastra da 24 pozzetti e incubare per 1 ora a 37 ° C in atmosfera umidificata per consentire gel per impostare. Dopo 1 ora aggiungere 1 ml di DMEM (10% FCS) / Glut sopra i gel e tornare alla incubatore notte. </li><li> Il giorno seguente, medio aspirato dalla parte superiore dei gel e piastra 1 ml di supporto contenente 5 x 10 5 cellule epiteliali CRC. </li></ol> Preparazione del gel spalmato fogli di nylon: <ol start="5"><li> Preparare sterile, teli di nylon in autoclave misura 1,5 centimetri x 1,5 centimetri, in anticipo. </li><li> Utilizzando pinze sterili, inserire il numero di fogli di nylon in una capsula di Petri 10 centimetri (di solito 4 fogli di nylon possono essere ospitati a piatto). </li><li> Portare gel su ghiaccio nel seguente ordine (250 microlitri totaleè necessaria volume per foglio di nylon): <ul><li> 7 volumi di collagene Rat-coda </li><li> 1 volume di filtrato 10x DMEM </li><li> 1 volume di FCS </li><li> 1 volume di DMEM 10% FCS / Glut </li></ul></li><li> Se la soluzione è gialla, neutralizzare con l&#39;aggiunta di 0,1 M NaOH in aliquote di 50 microlitri finché la soluzione diventa rosa. </li><li> Aggiungere 250 ml di questa soluzione a ciascun foglio di nylon e incubare a 37 ° C in atmosfera umidificata al 5% CO 2 per 30 min per permettere gel per impostare. </li><li> Portare soluzione di glutaraldeide 1% in PBS. Aggiungere 10 ml di ciascuna capsula di Petri 10 centimetri una volta che il gel ha impostato e incubare a 4 ° C per 1 ora. </li><li> Fogli di nylon Lavare 3x in PBS 1x e in DMEM (10% FCS) / Glu e incubare una notte in DMEM / Glu a 4 ° C. </li></ol> Alzando gel organotipica su griglie in acciaio per l&#39;invasione: <ol start="12"><li> Pre-preparare le griglie ponteggio mediante piegatura lamiere di acciaio inox in una formazione treppiede. Autoclave prima dell&#39;uso.</li><li> Utilizzare pinze sterilizzate in etanolo da mettere una griglia in acciaio in ciascun pozzetto di una piastra ben sei. </li><li> Collocare un foglio di nylon gel-rivestito con il lato superiore collagene, su ogni griglia. </li><li> Trasferire accuratamente i gel organotipici dalla piastra a 24 pozzetti per il foglio di nylon sollevata con una spatola sterilizzato in etanolo. </li><li> Riempire il pozzetto con DMEM 10% FCS / Glut supplementato con 10% FCS fino foglio di nylon è in contatto con il mezzo ma non sommersa. Assicurarsi che il mezzo non tocchi il gel organotipica. </li><li> Incubare per 14 giorni a 37 ° C in atmosfera umidificata al 5% CO 2, sostituirà supporti ogni 2 giorni. </li></ol> 3. Organotipica Fixation <ol><li> Rimuovere tutta organotipica compreso foglio di nylon da bene e mettere su pellicola trasparente. </li><li> Bisecare organotipica e foglio di nylon con un bisturi monouso pulito e fissare le due metà in formaldeide per 24 ore a temperatura ambiente. </li><li> Sostituire formaldeide con il 70% ethanolo dopo 24 ore e lasciare per una notte prima di incorporare in paraffina, sezionamento e colorazione. </li></ol> 4. Microdissezione laser del Margine invasiva <ol><li> Sezione di 10 pm di spessore su una membrana diapositive intelaiate. </li><li> Deparaffinare sezioni applicando xilene per 1 minuto, poi togliere xilene e fissare nel 75% di etanolo per un ulteriore 1 min. </li><li> Rimuovere etanolo e macchia con 0,125% soluzione Cresyl Violet per 1 min. Cresyl Violet evidenzia le cellule epiteliali e consente una facile discriminazione dallo stroma. </li><li> Rimuovere violetto cresolo e applicare il 100% di etanolo per circa 1 minuto prima del risciacquo con etanolo al 100%. Lasciare i vetrini asciugare all&#39;aria per 30 min. </li><li> Condurre microdissezione laser con piattaforma scelta (ad esempio il sistema Leica AS). </li><li> Posizionare il vetrino con la sezione macchiata da microdissezione a faccia in giù sul palco microscopio. </li><li> Montare una provetta da 0,5 ml microcentrifuga nel cassetto di raccolta ed aggiungere 50 ml ditampone di lisi cellulare (ad esempio DNA, RNA o proteina tampone di lisi) al cappuccio in cui il tessuto microdissezione raccoglierà. </li><li> Sotto visione diretta, utilizzare il joystick per identificare tessuto di interesse, e utilizzando l&#39;interfaccia software, annotare la sezione organica macchiato, mettendo in evidenza le cellule da microdissezione al fronte invasione tumorale. </li><li> Istruire il laser al fuoco, che dovrebbero entrambe tagliare la sezione evidenziata e spingere il tessuto microdissezione nel tappo della provetta. </li><li> Una quantità sufficiente di materiale è stato raccolto, estrarre la cassetta di raccolta, chiudere la provetta e centrifugare delicatamente per disegnare il tampone di lisi al fondo della provetta. </li><li> Mettere i campioni in ghiaccio fino microdissezione è completa. Campioni di processo tramite un metodo adeguato per estrarre l&#39;analita di interesse. </li></ol>

<ol><li>Nystrom, M. L., Thomas, G. J., Stone, M., Mackenzie, I. C., Hart, I. R., Marshall, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+quantitative+method+to+analyse+tumour+cell+invasion+in+organotypic+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Development of a quantitative method to analyse tumour cell invasion in organotypic culture.</a> J Pathol. 205 (4), 468-475 (2005).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-153+supports+colorectal+cancer+progression+via+pleiotropic+effects+that+enhance+invasion+and+chemotherapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">miR-153 supports colorectal cancer progression via pleiotropic effects that enhance invasion and chemotherapeutic resistance.</a> Cancer Res. , (2013).</li>
<li>Bullock, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+actions+of+miR-21+highlight+the+critical+role+of+deregulated+stromal+microRNAs+during+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic actions of miR-21 highlight the critical role of deregulated stromal microRNAs during colorectal cancer progression.</a> Cell Death Dis. 20 (4), (2013).</li>
<li>Jenei, V., Nystrom, M. L., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+invasion+in+an+organotypic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring invasion in an organotypic model.</a> Methods Mol Biol. 769, 223-232 (2011).</li>
<li>De Wever, O., Demetter, P., Mareel, M., Bracke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+myofibroblasts+are+drivers+of+invasive+cancer+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Stromal myofibroblasts are drivers of invasive cancer growth.</a> Int J Cancer. 123 (10), 2229-2238 (2008).</li>
<li>Fries, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+fibroblast+heterogeneity+and+the+role+of+fibroblast+subpopulations+in+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Evidence of fibroblast heterogeneity and the role of fibroblast subpopulations in fibrosis.</a> Clin Immunol Immunopathol. 72 (3), 283-292 (1994).</li>
<li>Moutasim, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Betel-derived+alkaloid+up-regulates+keratinocyte+alphavbeta6+integrin+expression+and+promotes+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Betel-derived alkaloid up-regulates keratinocyte alphavbeta6 integrin expression and promotes oral submucous fibrosis.</a> J Pathol. 223 (3), 366-377 (2011).</li>
<li>Winter, J., Jung, S., Keller, S., Gregory, R. I., Diederichs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Many+roads+to+maturity%3A+microRNA+biogenesis+pathways+and+their+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Many roads to maturity: microRNA biogenesis pathways and their regulation.</a> Nat Cell Biol. 11 (3), 228-234 (2009).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+miRNA+expression+patterns+using+total+RNA+extracted+from+matched+samples+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+%28FFPE%29+cells+and+snap+frozen+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Comparison of miRNA expression patterns using total RNA extracted from matched samples of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cells and snap frozen cells.</a> BMC Biotechnol. 7 (36), (2007).</li>
<li>Szafranska, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+molecular+characterization+of+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues+by+microRNA+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Accurate molecular characterization of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by microRNA expression profiling.</a> J Mol Diagn. 10 (5), 415-423 (2008).</li>
</ol>

Gli autori evidenziano alcun potenziale conflitto di interesse.

Qui si descrive un metodo per isolare e caratterizzare specificamente le cellule tumorali che hanno acquisito la capacità di invadere il cancro stroma associato durante le prime fasi della progressione metastatica in un 3-dimensionale di co-coltura costrutto delle cellule epiteliali e stromali. Modelli di co-coltura costituiti da cellule epiteliali CRC giustapposti con una stroma sintetico contenente ex vivo fibroblasti umano del colon sono stati usati per studiare CRC invasione in ...

Co-colture organotipiche sono modelli tissutale che aiutano a ricostruire in vivo microambiente tumorale in 3-dimensioni per giustapposizione di cellule epiteliali maligne e cellule stromali in un gel di collagene contenente componenti essenziali della matrice extracellulare 1-3. Principalmente concepito come un metodo per misurare invasione tumorale, organotypics ridurre la dipendenza da modelli animali in vivo, ed evitare le lacune di altre tecniche in vitro come saggi Transwell, in cui le cellule invasori sono costretti artificialmente in uno stato mono-disperso 2-4. L&#39;inclusione di cellule stromali in questi modelli, quali fibroblasti, riflette il ruolo essenziale del microambiente tumorale maligna nella regolazione invasione e metastasi 3-4, tuttavia l&#39;eterogeneità fenotipica dello stroma è tale che, al fine di massimizzare la rilevanza fisiologica di organotipico modelli, organo specifico, anatomicamente accurati ex vivofibroblasti dovrebbero essere inclusi ove possibile 3,6. Organotypics sono una piattaforma versatile per studiare le interazioni tra tumore e le cellule stromali e sono sempre più utilizzati in nuovi modi per esaminare l&#39;impatto sulla invasione tumorale di inibitori chimici e le alterazioni geniche mirate 7,8. Studiare il margine di tumore invasivo è una prospettiva particolarmente emozionante. In modelli organotipici, cancro colorettale fissato (CRC) linee cellulari producono tipicamente uno strato epiteliale ben stratificato, in sezione trasversale, le cellule che hanno acquisito la capacità di invadere la matrice extracellulare (ECM) sono facilmente distinguibili. Alla luce della eterogeneità micro-topografica consolidata di tumore e tumore associato cellule stromali in vivo, estrazione di queste cellule mediante microdissezione laser e studiare isolatamente, può rivelare importanti informazioni biologiche riguardanti le origini del colon-retto metastasi del cancro e come può essere più efficiente mirato. Ion la seguente metodologia, tutti i pazienti che hanno donato campioni di tessuto fornite per iscritto il consenso informato, e lo studio è stato approvato dalle istituzioni del comitato etico di ricerca regionali.

<table><tbody><tr><td>Linee cellulari di cancro del colon-retto - esempio mostrato SW480</td><td>ATCC ATCC</td><td>CCL-228</td><td></td></tr><tr><td>Collagene</td><td>BD Biosciences</td><td>354265</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Membrana in nylon</td><td>Merck Millipore</td><td>VVLP01300</td><td></td></tr><tr><td>Griglia metallica</td><td>The Mesh Company</td><td>WSS20-A4</td><td></td></tr><tr><td>themeshcompany.com Laser piattaforma di microdissezione</td><td>Leica Microsystems</td><td>Leica AS LMD</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini montati su membrana</td><td>Dispositivi</td><td></td><td></td>molecolari</tr><tr><td>Cresyl Violet</td><td>Merck Millipore</td><td>1052350025</td><td></td></tr></tbody></table>

molecular profiling del microambiente tumorale invasiva in un modello 3-dimensional delle cellule del cancro colorettale e<em&gt; ex vivo</em&gt; fibroblasti

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Invadere il cancro colorettale (CRC), le cellule hanno acquisito la capacità di liberarsi dalle loro celle sorelle, infiltrare lo stroma, e rimodellare la matrice extracellulare (ECM). Caratterizzare la biologia di questo gruppo fenotipicamente distinto di cellule potrebbe migliorare notevolmente la nostra comprensione di eventi precoci durante la cascata metastatica. Invasione tumorale è un processo dinamico facilitato dalle interazioni bidirezionali tra epitelio maligno e lo stroma cancro associato. Al fine di esaminare le risposte specifiche cellule al stroma-interfaccia tumore abbiamo combinato organotipica co-coltura e laser tecniche di micro-dissezione. Modelli organotipica, in cui componenti stromali chiave come i fibroblasti sono 3 dimentioanally co-coltura con cellule epiteliali tumorali, sono strumenti sperimentali altamente manipolabile che consentono l&#39;invasione e le interazioni tumore-stroma da studiare in near-phcondizioni ysiological. Laser microdissezione (LMD) è una tecnica che comporta la dissezione chirurgica ed estrazione dei vari strati all&#39;interno del tessuto tumorale, con precisione di micron. Combinando queste tecniche con la genomica, trascrittomica e epigenetica profiling puntiamo a sviluppare una comprensione più profonda delle caratteristiche molecolari di invadere le cellule tumorali e circostante tessuto stromale, e in tal modo potenzialmente rivelare nuovi biomarcatori e opportunità per lo sviluppo di farmaci in CRC.

Abbiamo applicato il metodo di cui sopra per più combinazioni di linee cellulari e cellule stromali CRC. Un esempio qui presentato è linee cellulari epiteliali SW480 CRC con ex vivo fibroblasti umani primari del colon. Co-colture 3-dimensionali sono costruiti (Figura 1), sottoposto alla microscopia e cattura microdissezione laser (Figura 2), e analizzati mediante microRNA (miRNA) profiling (Figura 3) per il confronto dei miRNA differenzialmente espressi tra cel...

Profiling molecolare delle cellule laser microdissezione e da stroma, modelli di cancro colorettale tissutale sintesi rappresenta un approccio nuovo e manipolabile per caratterizzare e sezionare la biologia distintivo all&#39;interfaccia tra cellule tumorali al fronte invasivo e cancro associato cellule stromali.

Molecular Profiling del microambiente tumorale invasiva in un modello 3-Dimensional delle cellule del cancro colorettale e<em&gt; Ex vivo</em&gt; fibroblasti

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

L'obiettivo generale di questa procedura è caratterizzare la biologia distintiva all'interfaccia tra cellule epiteliali maligne nel fronte tumorale invasivo e cellule stromali associate al cancro. Questo viene ottenuto innanzitutto stabilendo colture primarie di fibroblasti da impianti colici. Il secondo passaggio consiste nella costruzione di modelli di co-coltura organotipica utilizzando fibroblasti colici primari e cellule tumorali del colon-retto in coltura.I successivi modelli organotipici vengono fissati in formalina, sezionati su vetrini con membrana e colorati con violetto di cresile. Il passaggio finale è la microdissezione laser, al fine di separare le cellule tumorali invasive da quelle non invasive e dalle cellule stromali associate al cancro. Infine, possono essere utilizzate tecniche di profilazione molecolare per caratterizzare la biologia delle cellule tumorali invasive e non invasive e delle cellule stromali nell'ambiente tumorale circostante.L'idea per questo metodo è nata quando abbiamo capito quanto siano chiaramente distinguibili le cellule invasive da quelle non invasive nei modelli tridimensionali di co-coltura organotipica del cancro del colon-retto. Per ini

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Abbiamo descritto una procedura per la disaggregazione del tumore del colon-retto (CRC) per la produzione di singole cellule vitali, che vengono poi catturate su microarray anticorpi personalizzato riconoscere gli antigeni di superficie (DotScan CRC microarray). Sotto-popolazioni di cellule legato al microarray può essere profilato con multiplazione a fluorescenza utilizzando anticorpi monoclonali taggati con coloranti fluorescenti.

Carcinoma del colon-retto Profilo delle proteine ​​di superficie L&#39;utilizzo di un anticorpo Microarray e Multiplexing fluorescenza

Abbiamo sviluppato modelli di co-coltura 3D per live-cell imaging in tempo reale delle interazioni tra cellule tumorali del seno e altre cellule nel loro microambiente che hanno un impatto progressione verso un fenotipo invasivo. Questi modelli possono servire come schermi preclinici di farmaci per colpire paracrino indotte proteolitici, percorsi chemochine / citochine e chinasi implicati nella invasività.

Modelli per MAME 4D Live-Imaging cellule di tumore: Interazioni microambiente che Impact progressione maligna

Il video descrive la dissezione laser del modello 3D di co-coltura organotipica con precisione a livello di micron. Nei modelli organotipici 3D, i costituenti stromali come i fibroblasti sono co-coltivati tridimensionalmente con cellule epiteliali tumorali. Il modello 3D funge da strumento sperimentale che consente di studiare l'invasione e le interazioni cancro-stroma in condizioni quasi fisiologiche.

Microdissezione laser: una tecnica per isolare le cellule tumorali del colon-retto invasive da un modello di coltura organotipica 3D

Ingegneria tessutale fibroblasti derivati ​​da matrice nativa è uno strumento emergente per generare un substrato stromale che supporta la proliferazione delle cellule epiteliali e differenziazione. Ecco un protocollo di applicazione di tale metodologia per valutare l'impatto dei diversi tipi di cellule stromali sulla biologia delle cellule tumorali è presentato.

Ingegneria dei tessuti del tumore stromale Microenvironment con l&#39;applicazione di Invasion Cancer Cell

Questo articolo fornisce metodologie dettagliate per l'utilizzo di tridimensionali (3D) test per quantificare l'invasione delle cellule di cancro al seno. In particolare, discuteremo le procedure necessarie per configurare tali analisi, quantificazione e analisi dei dati, così come i metodi per esaminare la perdita dell'integrità della membrana che si verifica quando le cellule invadono.

Quantificazione del cancro al seno Cellula Invasività Utilizzando una tridimensionale (3D) Modello

Qui presentiamo un protocollo per la co-coltura in tre dimensioni, che è utile per studiare le interazioni multicellulari e la modulazione dipendente dalla matrice extracellulare del comportamento delle cellule tumorali. In questo modello sperimentale, le cellule tumorali vengono coltivate su gel di collagene incorporati con fibroblasti umani associati al cancro.

Tridimensionale Co-cultura Modello di tumore stromale-Interaction

Dimostriamo un metodo per generare surrogati 3D del cancro al seno, che possono essere coltivati utilizzando un sistema di bioreattori di perfusione per fornire ossigeno e sostanze nutritive. Dopo la crescita, i surrogati vengono fissati e trasformati in paraffina per la valutazione dei parametri di interesse. Viene spiegata la valutazione di uno di questi parametri, la densità cellulare.

Preparazione e analisi di<em&gt; In Vitro</em&gt; Tridimensionale carcinoma mammario mondo dei replicanti

Qui, descriviamo un metodo di coltura tridimensionale per analizzare la morfologia del primario del seno le cellule tumorali, come pure per studiare le interazioni diretta/indiretta con i monociti ed i risultati come degradazione del collagene, reclutamento delle cellule immuni, cell invasione e promozione dell'infiammazione legata al cancro.

Analizzando la comunicazione tra i monociti e le cellule di cancro al seno primario in una tabella extracellulare estrarre (ECME)-sistema tridimensionale basato su

L'obiettivo di questo protocollo è quello di stabilire un modello in vitro 3D per studiare la differenziazione dei fibroblasti associati al cancro (CAF) in un ambiente di massa tumorale, che può essere affrontato in diversi sistemi di analisi, come l'immunofluorescenza, la trascrizione l'analisi e l'imaging delle cellule di vita.

Un modello esplosivo 3D come sistema più fisiologico per la differenziazione dei fibroblasti associati al cancro e gli studi sull'invasione in vitro

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Un modello tridimensionale di sferoidi per studiare le cellule staminali del cancro del colon

C'è un bisogno critico di modelli di cancro 3D che catturino il crosstalk eterocellulare per studiare le metastasi del cancro. Il nostro studio presenta la generazione di epiteliali stromali eteromulticellulari in un ambiente privo di scaffold e scaffold che può essere utilizzato per studiare l'invasione e le distribuzioni spaziali cellulari.

Cellule stromali eteromulticellulari in colture 3D prive di scaffold di cellule tumorali epiteliali per guidare l'invasione

Scopri il profilo molecolare del microambiente tumorale nel cancro colorettale usando modelli organotipici 3D e microdissezione laser. Questo metodo isola cellule invasive e stromali per analisi differenziale.

Molecular Profiling del microambiente tumorale invasiva in un modello 3-Dimensional delle cellule del cancro colorettale e Ex vivo fibroblasti (Video) | JoVE Journal

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