Name: Ultrasound-guided transtoracica intramiocardico iniezione nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Impara l'iniezione intramiocardica ecoguidata nei topi per la terapia genica cardiaca. Questa tecnica minimamente invasiva consente il targeting preciso di agenti terapeutici nel miocardio murino.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

TWP è stato finanziato dalla Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. WTP è stato finanziato da R01 HL095712 e da un AHA Established Investigator Award.

Tutte le operazioni descritte sono state eseguite secondo protocolli approvati dalla cura e l&#39;uso di animali Comitato Istituzionale di Hospital di Boston per bambini. 1 Preparazione <ol><li> Eseguire basale cardiaca valutazione anatomica e funzionale da ecocardiografia prima di iniziare la procedura di iniezione, come il trasduttore di posizione fissa ottimale per l&#39;iniezione intramiocardico non può cedere le viste standard ottimali per delineare l&#39;anatomia e la valutazione della funzione. </li><li> La messa a punto di iniezione è mostrata nelle figure 1A-1C. Inserire una siringa vuota con un ago inguainato, conici orientato verso l&#39;alto, nel morsetto della siringa (vedere Figura 1C) e fissare la sonda ad ultrasuoni trasduttore nel morsetto scan-testa (vedi Figura 1B). Allentare la scansione testa di bloccaggio della sfera serraggio del giunto (Figura 1B) e modificare l&#39;orientamento del trasduttore in modo che sia allineato parallelamente all&#39;asse dell&#39;ago. Fissare il scan-posizione della testa serrando la palla blocco pinza giunto scan-testa. NOTA: Per l&#39;iniezione in topi adulti, un ago da 30 G con un 1 in / 2,5 cm di lunghezza è ottimale. Una siringa da 1 ml può essere utilizzato per volumi maggiori, mentre una siringa a tenuta di gas può essere utilizzato per un controllo più preciso della quantità minori (5-10 microlitri). </li><li> Applicare il gel per ultrasuoni liberamente alla punta del trasduttore con una spatola per coprire la testa lungo la sua interezza. Sfoderare con attenzione l&#39;ago e utilizzare l&#39;ago di montaggio controlli per far avanzare l&#39;ago direttamente sotto il trasduttore e all&#39;interno del gel per ultrasuoni per la visualizzazione. Fare piccoli aggiustamenti uso del supporto dell&#39;ago in modo che l&#39;ago è visualizzato chiaramente lungo la sua lunghezza l&#39;immagine ad ultrasuoni su. Se il trasduttore è stato correttamente allineato parallelamente l&#39;ago al punto 1.4, quindi l&#39;ago deve rimanere all&#39;interno del piano di imaging come è avanzata e ritirata con la manopola di comando dell&#39;iniezione (Figura 1C). </li><li> In fasi successive, non disturbare la necessitàle / trasduttore allineamento orizzontale mediante il movimento lungo l&#39;asse orizzontale. Piuttosto, indirizzare specifiche aree del cuore per iniezione modificando l&#39;(asse y) posizione verticale dell&#39;ago montare e spostando la piattaforma animale. </li><li> Spostare il trasduttore superiormente dalla piattaforma animale con il controllo dell&#39;altezza di scansione (Figura 1B) per consentire la successiva collocazione del topo anestetizzato sulla piattaforma animali. Questo non perturbare l&#39;allineamento asse x del trasduttore all&#39;asse lungo dell&#39;ago. </li><li> Rimuovere la siringa utilizzata per l&#39;allineamento dal morsetto della siringa e scartare con cura. Caricare il nuovo ago e siringa con l&#39;iniettato al volume di destinazione finale, consentendo spazio morto nella punta della siringa. Fate attenzione a rimuovere le bolle d&#39;aria. Posizionare la siringa nel morsetto della siringa senza regolare l&#39;allineamento asse x. Rientrare completamente la siringa con il controllo dell&#39;iniezione. NOTA: Ai fini della formazione iniziale, l&#39;uso di blu di Evancolorante (1%), Trypan macchia blu (0,4%) o una sospensione di microsfere fluorescenti come l&#39;iniettato può aiutare l&#39;operatore a confermare la competenza e il successo di iniezione mirati. </li></ol> 2 Iniezione <ol><li> Accendere la più calda integrato della piattaforma riscaldamento e set per 37 ° C. Posizionare la piattaforma animale 180 ° dal solito orientamento delle immagini, con la fascetta anestesia e testa dell&#39;animale più vicino all&#39;operatore. Questo permette al cuore (nella parte sinistra del torace) sia ipsilaterale al morsetto della siringa e l&#39;ago. Nota: minor senso orario ulteriori aggiustamenti rotazione alla piattaforma animale possono essere necessari per orientare il cuore correttamente per il piano parasternale asse corto di imaging che verrà utilizzato per l&#39;iniezione (Figura 2A). </li><li> Preparare topi per ecocardiografia come riportato in precedenza 9. Anestetizzare il mouse in una camera di induzione con il 2% isoflurano. Rimuovere peli del torace con i capelli crema di rimozione di unD Applicare lubrificante gel per entrambi gli occhi per evitare l&#39;essiccazione della sclera. </li><li> Sollevare il trasduttore mediante la scansione di controllo altezza della testa (Figura 1B). Posizionare il mouse supina anestetizzato in cima alla piattaforma animale riscaldato con il muso di un cono consegna 1-3% isoflurano (Figure 2A-2B). Inserire delicatamente una sonda rettale e nastro le quattro zampe agli elettrodi ECG, applicazione di gel per elettrodi per contatto elettrico. NOTA: un livello adeguato di anestesia deve essere garantita per il trattamento umano degli animali. Non ci dovrebbe essere alcun cambiamento nella frequenza cardiaca e nessuna risposta per il posizionamento dell&#39;ago attraverso la parete toracica. Controlli di temperatura omeostatici integrati della piattaforma degli animali dovrebbero essere utilizzati per mantenere la normotermia (37 ± 0,5 ° C), come ipotermia si tradurrà in bradicardia relativa, dilatazione ventricolare, ed eventuale disagio. </li><li> Una volta che il mouse è sicuro sulla piattaforma animali, abbassare il trasduttore sul depilated torace utilizzando la scansione di controllo altezza della testa (Figura 1B). La configurazione ottimale ultrasuoni per l&#39;iniezione è per il cuore di essere visualizzata con l&#39;orientamento asse corto parasternale, secondo la tecnica ecocardiografica standard. Ruotare la piattaforma animale 20-30 ° in senso orario per ottenere la finestra acustica ottimale per l&#39;iniezione nel piano di imaging asse corto (figure 2A-2B). Nota: Alternativamente, l&#39;iniezione può essere eseguita da un orientamento asse lungo parasternale dalla rotazione in senso antiorario della piattaforma animale (Figura 2C). </li><li> Utilizzare i comandi di regolazione della piattaforma di animali per regolare il campo di vista e di indirizzare ogni sito di iniezione desiderato nel miocardio ventricolare sinistro. Pan avanti e indietro dall&#39;apice alla base del cuore per indirizzare la posizione di iniezione desiderata nel ventricolo sinistro del miocardio (Figure 3A-3C). Nota: La papilla media parasternale asse corto (figura 3A) offre reproduciblE punti di riferimento che permettono followup l&#39;imaging del sito di iniezione. Nota: In alternativa, la vista lunga parasternale asse può essere utilizzato per indirizzare un sito di iniezione predefinito (Figura 3D). </li><li> Partendo con la siringa nel morsetto della siringa completamente retratto, far avanzare lentamente la siringa verso il petto dell&#39;animale ruotando il comando in senso orario iniezione (Figura 4A). Per consentire la visualizzazione chiara ecografia sia del cuore e la punta dell&#39;ago mentre si avvicina al petto, utilizzare un sacco di gel per ultrasuoni sul lato sinistro del petto e ottimizzare la finestra acustica impostando un ampio campo di vista sui controlli ecocardiografia. Impostare il punto / zona focale presso il sito di destinazione per l&#39;iniezione. Piccoli aggiustamenti al montaggio ago controlli possono ottimizzare l&#39;immagine dell&#39;ago lungo la sua lunghezza. NOTA: Alcune macchine ad ultrasuoni hanno una funzione software ago guida per estendere digitalmente una linea lungo l&#39;asse dell&#39;ago attraverso al miocardio bersaglio(Figura 4B). Tale software può essere utile ma non è indispensabile. </li><li> Con l&#39;animale opportunamente sedato (1-3% isoflurano miscelato con 0,5-0,8 L / min 100% di ossigeno), avanzare l&#39;ago attraverso la parete toracica del mouse e nel miocardio, osservando attentamente la posizione della punta dell&#39;ago smussato affatto volte. Smettere di avanzare quando la punta dell&#39;ago è all&#39;interno del miocardio bersaglio (Figura 4C). Tutta la punta smussata deve essere saldamente all&#39;interno del miocardio, per evitare perdite iniettato nello spazio pericardico. </li><li> Quando la punta è nella posizione desiderata, consegnare il iniettato spingendo lo stantuffo della siringa. Consegnare l&#39;iniettato lentamente, nell&#39;arco di 5-30 secondi (a seconda del volume di essere consegnati). Fino a 50 ml di dell&#39;iniettato possono essere forniti senza compromettere la funzione ventricolare. Un aspetto echobright transitoria alla regione miocardica iniettata può essere evidente dopo l&#39;iniezione di successo. A breve (secondi) periodo di relativa bradycardia è occasionalmente osservato con iniezione nel miocardio e rapidamente si risolve. </li><li> Una volta che l&#39;iniettato è stato somministrato, prontamente ritirare l&#39;ago con rotazione in senso antiorario della manopola iniezione. Il mouse deve essere tenuto sotto anestesia per parecchi minuti di osservazione ecocardiografico per confermare la funzione ventricolare preservata e senza complicazioni iatrogeni. Se indicato, più regioni di miocardio possono essere serialmente iniettati riposizionando dell&#39;angolo dell&#39;ago di approccio mediante regolazione della piattaforma animale. Dopo l&#39;iniezione intramiocardico, il mouse viene posizionato in una gabbia da sola e ha permesso di recuperare da anestesia sotto osservazione. </li><li> Non lasciare un animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente per mantenere decubito sternale. Non restituire un animale che ha subito l&#39;iniezione intramiocardico alla compagnia di altri animali fino alla completa guarigione. La gabbia deve essere collocato su un blocco termoregolato con ridisposizione ady di acqua e mouse dieta. Disagio iatrogeni non è previsto e il fallimento di riprendere in modo appropriato comportamento normale poco dopo l&#39;intervento suggerisce una potenziale complicazione (vedi discussione). </li><li> Eliminare attentamente l&#39;ago immediatamente dopo il completamento dell&#39;iniezione intramiocardico per ridurre al minimo il rischio di lesioni diesis all&#39;operatore o agli astanti. Riutilizzo di un ago può provocare ottundimento della punta che rende più difficile per perforare il miocardio e risultante in un più alto rischio di complicanze. </li></ol>

<ol><li>Kochanek, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Vital+Stat+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-117 Forthcoming.</li>
<li>Strauer, B. E., Steinhoff, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((10+years+of+intracoronary+and+intramyocardial+bone+marrow+stem+cell+therapy+of+the+heart%3A+from+the+methodological+origin+to+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">10 years of intracoronary and intramyocardial bone marrow stem cell therapy of the heart: from the methodological origin to clinical practice.</a> J Am Coll Cardiol. 58, 1095-1104 (2011).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramyocardial+autologous+cell+engraftment+in+patients+with+ischaemic+heart+failure%3A+a+meta-analysis+of+randomised+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Lung+Circ%22%5BJournal%5D)">Intramyocardial autologous cell engraftment in patients with ischaemic heart failure: a meta-analysis of randomised controlled trials.</a> Heart Lung Circ. 22 (11), 887-894 (2013).</li>
<li>Fischer-Rasokat, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pilot+trial+to+assess+potential+effects+of+selective+intracoronary+bone+marrow-derived+progenitor+cell+infusion+in+patients+with+nonischemic+dilated+cardiomyopathy%3A+final+1-year+results+of+the+transplantation+of+progenitor+cells+and+functional+regeneration+enhancement+pilot+trial+in+patients+with+nonischemic+dilated+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">A pilot trial to assess potential effects of selective intracoronary bone marrow-derived progenitor cell infusion in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy: final 1-year results of the transplantation of progenitor cells and functional regeneration enhancement pilot trial in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy.</a> Circ Heart Fail. 2, 417-423 (2009).</li>
<li>Seth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+intracoronary+cellular+cardiomyoplasty+for+nonischemic+cardiomyopathy%3A+clinical+and+histopathological+results%3A+the+first-in-man+ABCD+%28autologous+bone+marrow+cells+in+dilated+cardiomyopathy%29+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Percutaneous intracoronary cellular cardiomyoplasty for nonischemic cardiomyopathy: clinical and histopathological results: the first-in-man ABCD (autologous bone marrow cells in dilated cardiomyopathy) trial.</a> J Am Coll Cardiol. 48, 2350-2351 (2006).</li>
<li>Ladage, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+methods+of+vector+delivery+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Percutaneous methods of vector delivery in preclinical models.</a> Gene Ther. 19, 637-641 (2012).</li>
<li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nat Biotechnol. 31, 898-907 (2013).</li>
<li>Laakmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+closed-chest+ultrasound-guided+substance+delivery+into+the+pericardial+space+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive closed-chest ultrasound-guided substance delivery into the pericardial space in mice.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 386 (3), 227-238 (2013).</li>
<li>Respress, J. L., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transthoracic+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transthoracic echocardiography in mice.</a> J Vis Exp. (39), e1738(2010).</li>
<li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cis-regulating+elements+and+trans-activating+factors+of+the+rat+cardiac+troponin+T+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of cis-regulating elements and trans-activating factors of the rat cardiac troponin T gene.</a> J Biol Chem. 269, 30595-30603 (1994).</li>
<li>Shimshek, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-improved+Cre+recombinase+%28iCre%29+expression+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Codon-improved Cre recombinase (iCre) expression in the mouse.</a> Genesis. 32, 19-26 (2002).</li>
<li>Lichtenauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+and+intramyocardial+injection+of+apoptotic+white+blood+cell+suspensions+prevents+ventricular+remodelling+by+increasing+elastin+expression+in+cardiac+scar+tissue+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Intravenous and intramyocardial injection of apoptotic white blood cell suspensions prevents ventricular remodelling by increasing elastin expression in cardiac scar tissue after myocardial infarction.</a> Basic Res Cardiol. 106 (4), 645-655 (2011).</li>
<li>Herrmann, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postinfarct+intramyocardial+injection+of+mesenchymal+stem+cells+pretreated+with+TGF-alpha+improves+acute+myocardial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Postinfarct intramyocardial injection of mesenchymal stem cells pretreated with TGF-alpha improves acute myocardial function.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (1), 371-378 (2010).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+injection+of+autologous+mesenchymal+stromal+cells+improves+myocardial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct injection of autologous mesenchymal stromal cells improves myocardial function.</a> Biochem Biophys Res Commun. 390 (3), 902-907 (2009).</li>
<li>Campbell, N. G., Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+delivery+routes+for+stem+cell+therapy+to+the+heart%3A+current+and+future+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cell delivery routes for stem cell therapy to the heart: current and future approaches.</a> J Cardiovasc Transl Res. 5 (5), 713-726 (2012).</li>
<li>Hou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiolabeled+cell+distribution+after+intramyocardial%2C+intracoronary%2C+and+interstitial+retrograde+coronary+venous+delivery%3A+implications+for+current+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Radiolabeled cell distribution after intramyocardial, intracoronary, and interstitial retrograde coronary venous delivery: implications for current clinical trials.</a> Circulation. 112, Suppl 9. 150-156 (2005).</li>
<li>Dib, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+successful+training+on+methods+of+delivery+of+biologics+for+cardiac+regeneration%3A+a+report+of+the+International+Society+for+Cardiovascular+Translational+Research%29%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Recommendations for successful training on methods of delivery of biologics for cardiac regeneration: a report of the International Society for Cardiovascular Translational Research).</a> JACC Cardiovasc Interv. 3 (3), 265-275 (2010).</li>
<li>Dib, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+therapy+for+cardiovascular+disease%3A+a+comparison+of+methods+of+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cell therapy for cardiovascular disease: a comparison of methods of delivery.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 177-181 (2011).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Biologics possono essere consegnati al miocardio mediante iniezione diretta intramiocardico, iniezione intrapericardica, o l&#39;amministrazione indiretta attraverso il flusso sanguigno. Cellulari basato recenti sperimentazioni di terapia in modelli con infarto miocardico hanno descritto un approccio toracotomia aperta per la fornitura di iniettato 12-14. Un fattore importante per il successo di un intervento terapeutico infarto dipende dalla scelta del percorso di consegna. La dose massima locale del biologi...

Le malattie cardiache sono la principale causa di morte per uomini e donne negli Stati Uniti, che rappresentano 600.000 decessi ogni anno 1. Modelli murini di malattie cardiovascolari sono di fondamentale importanza per lo studio dei meccanismi fisiopatologici e per esplorare potenziali terapie. Consegna miocardico di vettori di terapia genica, cellule staminali, RNA modificati, e altri agenti terapeutici permessi indagine del loro potenziale terapeutico per le malattie cardiache 2-7. Attualmente, ci sono opzioni limitate per la consegna del miocardio di agenti terapeutici in modelli murini 6. Iniezione intramiocardico sotto visualizzazione diretta è comunemente usato, ma richiede una sternotomia o toracotomia ed è limitata alla regione esposta del cuore. Mentre conveniente quando eseguita al momento di un&#39;altra manipolazione sperimentale come LAD legatura, la necessità di una procedura invasiva consegna intramiocardico limita potenziali disegni sperimentali e introduce uneffetti SUPPLEMENTARI dalla procedura (ad esempio, la fibrosi a causa di toracotomia). Consegna pericardico percutanea di vettori virali è stato segnalato, ma il sito e la distribuzione di agente terapeutico non è omogeneo ed è difficile da controllare 8. Percutanea risultati iniezione coronarici in distribuzione più omogenea del materiale iniettato, ma la consegna coronarica efficiente e riproducibile impugna in modelli murini. Qui, descriviamo una cassa tecnica di iniezione intramiocardico chiuso che permette minimamente invasiva, operatore controllato il targeting di agenti terapeutici sotto guida ecografica. La tecnica è facile da imparare, evita la necessità di toracotomia o sternotomia e le loro concomitanti complicazioni sperimentali, e offre una maggiore flessibilità sui tempi e siti di iniezione intramiocardico. Così, l&#39;iniezione intramiocardico ecocardiografia assistita rappresenta un metodo tecnicamente semplice e molto efficace di manipolare ilmiocardio in modelli sperimentali murini.

<table><tbody><tr><td>Sistema di imaging a ultrasuoni Vevo 2100&nbsp;</td><td>Trasduttore Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo Integrated Rail System III</td><td>Trasduttore Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscan MS400</td><td>Trasduttore Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscan MS550D</td><td>Aghi Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305128</td><td>30 G x 1 in/2,5 cm</td></tr><tr><td>1 cc siringa con punta scorrevole</td><td>Exel International&nbsp;</td><td>26048</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>A tenuta di gas 50 &#956; l. siringhe di vetro</td><td>Hamilton</td><td>1705</td><td></td></tr><tr><td>Trypan colorazione blu (0,4%)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>15250</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>AHN3640</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Aquasonic 100</td><td>Parker Laboratories</td><td>(01-08)</td><td>o</td></tr><tr><td>microsfere di polistirene equivalenti (rosso fluorescente)</td><td>Life Technologies</td><td>F-8842</td><td>o equivalente</td></tr></tbody></table>

ultrasound-guided transtoracica intramiocardico iniezione nei topi

Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice

Modelli murini di malattie cardiovascolari sono importanti per lo studio dei meccanismi fisiopatologici e di esplorare potenziali terapie rigenerative. Gli esperimenti che coinvolgono l&#39;iniezione infarto sono attualmente svolte da accesso chirurgico diretto attraverso una toracotomia. Mentre conveniente quando eseguita al momento di un&#39;altra manipolazione sperimentale come legatura dell&#39;arteria coronaria, la necessità di una procedura invasiva consegna intramiocardico limita potenziali disegni sperimentali. Con la sempre migliore risoluzione ultrasuoni e modalità di imaging non invasive avanzate, è ora fattibile per eseguire di routine, iniezione intramiocardico percutanea ecoguidata. Questa modalità efficiente e affidabile fornisce agenti ad una zona mirata di miocardio. I vantaggi di questa tecnica includono la prevenzione di morbilità chirurgica, la possibilità di indirizzare le regioni del miocardio selettivo sotto guida ecografica, e la possibilità di esprimere iniettato al myocardium in più intervalli di tempo predeterminati. Con la tecnica praticata, complicanze da iniezione intramiocardico sono rari, e topi tornare rapidamente alla normale attività sul recupero da anestetico. Seguendo la procedura descritta in questo protocollo, l&#39;operatore con esperienza di base ecocardiografia può rapidamente diventare competente in questa versatile tecnica, mini-invasiva.

Murino iniezione intramiocardico di blu tipo e microsfere fluorescenti Iniezione di colorante blu di Evan è utile per scopi di formazione. Subito dopo l&#39;iniezione, eutanasia il mouse e rimuovere il cuore per visualizzare la posizione del colorante blu iniettato. Figura 5 mostra un esempio di una iniezione di successo, con colorante blu infiltrante il miocardio a livello muscolare metà papillari (Figura 5A, regione racchiusa dalla linea tratteggiata). Evans ...

Iniezione percutanea intramiocardico ecocardiografia-guida rappresenta una modalità efficiente, affidabile, e il targeting per la fornitura di agenti di trasferimento di geni o cellule nel cuore murino. Seguendo la procedura descritta in questo protocollo, l&#39;operatore può rapidamente diventare competente in questa versatile tecnica, mini-invasiva.

Ultrasound-guided transtoracica intramiocardico iniezione nei topi

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di somministrare in modo sicuro e preciso un Eloqua di iniettabile in una regione mirata del miocardio sotto guida ecografica. Questo viene ottenuto innanzitutto manipolando l'orientamento della sonda in modo che sia allineato parallelamente all'asse dell'ago di somministrazione. Successivamente, il topo in posizione supina e anestetizzato viene posizionato correttamente sulla piattaforma per animali per facilitare l'iniezione mirata.Successivamente, la finestra acustica ottimale viene definita per una somministrazione accurata dell'inject otto, mediante lievi regolazioni della piattaforma animale e visualizzando un ampio campo visivo. Infine, sotto guida ecografica, la punta dell'ago viene avanzata con attenzione attraverso la parete toracica e nel miocardio e viene effettuata l'iniezione. L'inject otto viene così somministrato in modo sicuro ed efficace.La microscopia trasversale del miocardio specularizzato viene utilizzata per mostrare il corretto rilascio di un marcatore tissutale nel bersaglio miocardico desiderato. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale. Poiché il sistema integrato su rotaia, la piattaforma p

ultrasound-guided-transthoracic-intramyocardial-injection-in-mice

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Numerose manipolazioni genetiche e / o iniezioni intramiocardiche di geni, proteine, cellule e / o biomateriali si sovrappongono la dimensione del tempo negli studi di acuta ischemia / riperfusione e rimodellamento cronica nel topo. Questo video illustra le procedure di microchirurgia per ischemia / riperfusione, permanente legatura delle arterie coronarie, e gli studi di iniezione intramiocardico.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Consegna cellula intramiocardico in modelli murini di malattie cardiovascolari, come ipertensione o infarto del miocardio, è ampiamente utilizzato per testare il potenziale terapeutico di diversi tipi di cellule in studi rigenerativi. Pertanto, una descrizione dettagliata e una chiara visualizzazione di questa procedura chirurgica contribuiranno a definire i limiti ei vantaggi di cellule cardiovascolari analisi terapeutici in piccoli roditori.

Intramiocardico cellulare di consegna: Osservazioni in murini Hearts

Un seno cancro al cervello metastasi modello del mouse viene stabilito con ecografia guidata iniezione intracardiaca delle cellule MDA-MB231/Br-GFP. Sviluppo delle metastasi intracraniche multifocali è stato monitorato longitudinalmente utilizzando ad alta risoluzione di 9.4 T MRI.

Ultrasound Imaging guidata intracardiaca iniezione di sviluppare un modello murino di Breast Cancer metastasi cerebrali Seguito da longitudinale MRI

Murino in modelli di infiammazione colica hanno dimostrato che una piccola percentuale (1-5%) di cellule staminali mesenchimali (MSC) iniettato per via endovenosa o intraperitonealmente ospita il colon infiammato1,2. Questo studio indica che le iniezioni intracardiache ultrasuono-guida di MSCs provocare maggiore localizzazione all'intestino.

Ultrasuono-guida di iniezione intracardiaca di cellule staminali mesenchimali umane per aumentare Homing all'intestino per l'utilizzo in modelli murini di malattie intestinali infiammatorie sperimentali

Nuove strategie terapeutiche nella medicina rigenerativa cardiaca richiedono studi estesi e dettagliati nei modelli animali preclinici grande prima che essi possono essere considerati per uso in esseri umani. Qui, dimostriamo una tecnica di iniezione intramiocardica ecocardiografia-guida percutanea contrasto in conigli, che è importante per l'efficacia di tali terapie innovarici di verifica delle ipotesi.

L'iniezione intramiocardica ecocardiografia-guida percutanea contrasto e consegna delle cellule in un modello preclinico grande

Qui presentiamo un protocollo per la manipolazione del gene specifico in topi. Nell'ambito dell'anestesia, i cuori di topo sono stati esternalizzati attraverso il quarto spazio intercostale. Successivamente, gli adenovirus codifica specifici geni sono stati iniettati con una siringa nel miocardio, seguito dalla misura di espressione della proteina in vivo imaging e Western blot analisi.

Un metodo semplice ed efficace per In Vivo manipolazione del Gene specifico tramite l'iniezione intramiocardica in topi

La somministrazione cellulare guidata da ultrasuoni intorno al sito di infarto miocardico nei topi è un modo sicuro, efficace e conveniente di trapianto cellulare.

Impianto di cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte ecoguidate in topi infartuati miocardici

Il presente protocollo descrive una procedura di radiologia interventistica stabilita per l'iniezione intratimica nei topi per evitare il rischio di chirurgia aperta e migliorare l'accuratezza delle iniezioni percutanee cieche.

Una tecnica minimamente invasiva, accurata ed efficiente per l'iniezione intratimica nei topi

Questo articolo descrive in dettaglio un protocollo ottimizzato per le iniezioni intramiocardiche guidate dall'ecocardiografia in modelli di ratto di infarto miocardico utilizzando un ago da 29 G x 88 mm. Questa tecnica garantisce una somministrazione robusta, precisa e riproducibile di agenti terapeutici direttamente nella zona peri-infartuale.

Iniezione guidata da ecocardiografia per la somministrazione mirata e affidabile di cellule staminali intramiocardiche in un modello di infarto miocardico di ratto

L'ecocardiografia transtoracica offre un metodo non invasivo per la valutazione della funzione cardiaca nei topi. Una combinazione di ultrasuoni e Doppler modalità di imaging possono essere utilizzate per ottenere misure dimensionali del cuore e del flusso sanguigno intracardiaco, che insieme forniscono una valutazione delle cardiaca sistolica e diastolica prestazioni.

L&#39;ecocardiografia transtoracica in topi

Impara l'iniezione intramiocardica ecoguidata nei topi per la terapia genica cardiaca. Questa tecnica minimamente invasiva consente il targeting preciso di agenti terapeutici nel miocardio murino.

Ultrasound-guided transtoracica intramiocardico iniezione nei topi

Esplora altri video