July 10th, 2014
I modelli murini sono diventati sempre più popolari negli studi di neuroscienze comportamentali. Man mano che i modelli avanzano, è importante sviluppare misure comportamentali sensibili specifiche per il topo. Questo protocollo descrive il Pasta Matrix Reaching Task, che è un compito motorio qualificato per l'uso in modelli murini di ictus.
L'obiettivo generale di questa procedura è valutare gli effetti comportamentali dell'uso compensatorio degli arti e di un modello murino di ictus. Ciò si ottiene determinando prima l'arto che raggiunge il raggiungimento, consentendo ai topi di raggiungere entrambi gli arti durante le procedure di modellatura. Il secondo passo consiste nello stabilire l'abilità motoria allenando solo l'arto che si allunga preferito sul compito di raggiungere la matrice di pasta.
Il successivo uso compensatorio degli arti viene insegnato addestrando i topi a utilizzare l'arto meno colpito sulla matrice di pasta. Compito di raggiungimento che inizia quattro giorni dopo la lesione ischemica unilaterale controlaterale all'arto di estensione preferito. Il passo finale consiste nel valutare l'effetto di un allenamento dell'arto meno colpito sull'esito funzionale dell'arto colpito dall'ictus.
In definitiva, l'esito funzionale alterato dell'arto interessato è dimostrato da una diminuzione del numero di colpi riusciti nel corso di diversi giorni di test. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella ricerca di base sull'ictus, comprese le implicazioni degli interventi comportamentali sull'esito funzionale. In generale, le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà a causa del tempo e dei pazienti impiegati per insegnare ai topi questo compito altamente qualificato.
Il vantaggio è che la sensibilità di questo test supera quella di altri test motori sensoriali. Nei topi. Iniziare la procedura tagliando i pezzi di pasta CAPI crudi con una lametta.
Quindi posizionare i pezzi di pasta nella matrice di pasta. Abituare un topo alla camera di prova per tre sessioni da cinque a 10 minuti ciascuna con una matrice di pasta completa posizionata davanti e diversi pezzi di pasta sul fondo da mangiare per modellare la portata. Posizionare il topo nella camera di prova con una matrice di pasta completa davanti, come nell'addestramento abitativo.
Registra il numero di tratti con ciascun arto e indica il numero di tratti con l'arto destro e sinistro. Separatamente. Definisci una portata come l'estensione di un arto attraverso l'apertura di portata, in modo tale che il polso rompa il piano della camera, rendendo visibili le quattro zampe all'esterno della camera. Non è necessario che la portata sia diretta verso la pasta o entri in contatto con la pasta durante le sessioni di formatura.
Limitare il mouse a un massimo di 10 colpi o 10 minuti di tempo nella camera, a seconda di quale dei due eventi si verifichi. Innanzitutto, per incoraggiare il mouse a raggiungere. Tenere diversi pezzi di pasta appena all'interno della camera attraverso l'apertura di raggiungimento.
Estrai i pezzi di pasta quando il topo mostra interesse, come annusare o mordere, incoraggiandoli così a raggiungere i pezzi di pasta che si ritirano. Se i topi non mostrano interesse per la pasta secca, metti le punte dei pezzi di pasta in una tazzina di acqua tiepida per renderli più appetibili. Le sessioni di modellatura vengono utilizzate anche per determinare la preferenza degli arti.
Quando un topo mostra almeno il 70% delle sue distanze giornaliere con un singolo arto, quei quattro arti sono definiti come l'arto preferito. Posizionare un topo nella camera di prova con una matrice mezza piena davanti. Addestra il topo a raggiungere solo con il suo arto preferito riempiendo solo il segno della matrice controlaterale all'arto preferito.
Durante questa fase di allenamento, lasciare vuota la porzione di matrice corrispondente all'arto meno interessato in modo da scoraggiare i tentativi di allungamento con questo arto. Somministrare una volta al giorno, 15 minuti o 100 sessioni di formazione per aiutare il topo a imparare con successo a mirare e rompere i pezzi di pasta. Durante le prime sessioni di allenamento, esercitare una piccola pressione sui pezzi di pasta mentre sono nella matrice tenendo un altro pezzo di pasta leggermente, dietro e perpendicolarmente al bersaglio che si vuole raggiungere.
Questa piccola quantità di supporto aiuta a stabilizzare la pasta sottile ed è più facile da afferrare per il topo. Per raggiungere con successo è necessario che il mouse raggiunga l'apertura. Prendete un pezzo di pasta, rompete il pezzo di pasta e rimuovetelo dalla matrice.
Registrare il numero totale di canne fino a un massimo di 100 e il numero e la posizione dei pezzi di pasta rotti con successo. In questa procedura. Allenare l'arto meno colpito a partire da quattro giorni dopo l'insulto ischemico alla corteccia motoria controlaterale all'arto che si allunga preferito.
Proprio come per l'allenamento preoperatorio di raggiungimento, somministrare una volta al giorno, 15 minuti o 100 sessioni di allenamento di raggiungimento. Rimuovi la prima colonna di pasta per la prima settimana di allenamento degli arti meno colpiti. Per garantire che i primi tentativi di raggiungere l'arto interessato non abbiano successo, posizionare il topo nella camera di raggiungimento con la matrice riempita a metà davanti.
Assicurarsi che la metà riempita della matrice sia opposta alla metà riempita preoperatoria, il che costringerà il topo a raggiungere ora con un arto meno interessato. Incoraggia a raggiungere l'arto meno colpito rinforzando l'estensione di questo arto attraverso l'apertura di allungamento per farlo. Quando il topo estende l'arto meno colpito nei primi giorni di allenamento, posiziona un pezzetto di pasta sul pavimento della camera di raggiungimento.
Indipendentemente dal fatto che la portata abbia successo o meno, conta solo le portate effettuate con l'arto meno interessato per il totale di 100 rigi. Non contare i tentativi furtivi con l'arto interessato nel numero totale di raggiungimenti. Quindi, riportare la colonna verticale più mediale di pasta nella matrice dopo i primi sette giorni di allenamento dell'arto meno colpito, registrare il numero totale di colpi e il numero e la posizione dei pezzi di pasta rotti con successo per determinare l'impatto dell'uso compensatorio dell'arto meno colpito sul recupero funzionale dell'arto colpito dall'ictus.
Testare le prestazioni dell'arto interessato sul PMRT. A seguito di un allenamento degli arti meno influenzato. Posizionare la matrice davanti alla camera orientata in modo identico alle procedure di allenamento preoperatorie.
Ciò costringerà i topi a raggiungere ora con il loro record di arti colpiti dall'ictus, il numero totale di colpi e il numero e la posizione dei pezzi di pasta rotti con successo da confrontare con i livelli di prestazione pre-ictus. Qui sono mostrati i modelli di raggiungimento rappresentativi con l'arto interessato dei topi prima e dopo l'insulto ischemico unilaterale della corteccia motoria sensoriale opposta all'arto preferito. La parte anteriore indica i pezzi di pasta situati sempre più davanti al topo, mentre quella laterale indica i pezzi di pasta situati sempre più a lato del topo.
Qui sono mostrati i cambiamenti rappresentativi del modello dell'arto interessato nei giorni di allenamento postoperatorio. Questo grafico mostra un esempio rappresentativo di come l'allenamento dell'arto meno colpito influenzi le prestazioni dell'arto interessato sull'allenamento PMRT dell'arto meno colpito per 15 giorni dopo l'insulto ischemico unilaterale della corteccia motoria sensoriale compromette l'esito funzionale dell'arto interessato e compromette il successo del recupero durante il tentativo di questa procedura. È importante ricordare di evitare di sovrallenare i topi durante la fase di modellatura lasciandoli raggiungere troppe volte.
In caso contrario, la curva di apprendimento non rifletterà accuratamente la fase iniziale dell'apprendimento in questo test. Seguendo questa procedura. Altri metodi, tra cui l'immunoistochimica, la mappatura corticale e l'imaging in vivo, possono essere utilizzati per indagare altre questioni riguardanti l'impatto degli interventi comportamentali sulla neuroanatomia.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Questo protocollo descrive il Pasta Matrix Reaching Task, un compito motorio complesso progettato per modelli murini di ictus. Mira a valutare gli effetti comportamentali dell'uso compensatorio degli arti dopo una lesione ischemica unilaterale.