Espressione ricombinante Cellulase Cel5A da Trichoderma reesei In piante di tabacco

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di esprimere le proteine bersaglio in modo transitorio nel tabacco per ottenere un'idea della fattibilità dell'espressione enzimatica a base vegetale in un breve lasso di tempo. Questa espressione transitoria si ottiene infiltrando le foglie di tabacco con un ceppo di agrobacterium tumor fain, che contiene un vettore che incorpora il gene di interesse come secondo passaggio Dopo l'incubazione, le foglie infiltrate vengono raccolte e gli estratti proteici vengono parzialmente purificati per ottenere una soluzione enzimatica funzionante. Successivamente viene eseguita l'analisi delle proteine al fine di valutare gli effetti dell'espressione vegetale sull'enzima e di verificarne l'attività enzimatica.

Si ottengono risultati che mostrano le dimensioni delle proteine, i possibili effetti della glicosilazione e l'attività enzimatica sulla base di saggi di western blotting, zy e degradazione del substrato. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sulla conversione della biomassa vegetale e può anche fornire informazioni sull'attività degli enzimi dopo essere stati espressi transitoriamente nel tabacco. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto le fasi di infiltrazione sono difficili da imparare a causa delle foglie che vengono facilmente danneggiate dai vestiti della siringa e eseguirò gli esperimenti in condizioni sterili.